多蛋白酶方法技术

本发明专利技术涉及鉴别蛋白质上可被抗体结合的表位的方法。本发明专利技术的方法通常包括使用单一第一蛋白酶或第一蛋白酶的组合的蛋白质的限制性或约束性蛋白水解步骤，以及使用单一第二蛋白酶或第二蛋白酶的组合的进一步的蛋白水解步骤。发明专利技术还涉及鉴别的表位和与已通过本发明专利技术方法鉴别的表位结合的抗体。

Polyprotease method

The present invention relates to a method for identifying epitopes on proteins that can be bound by antibodies. The method of the present invention usually includes a restrictive or restrictive protein hydrolysis step using a single first protease or a combination of the first protease, and a further protein hydrolysis step using a single second protease or a combination of the second protease. The invention also relates to identified epitopes and antibodies that bind to epitopes identified by the method of the invention.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多蛋白酶方法
本专利技术涉及某些选择靶蛋白的表位的新方法，该方法用于但不限于抗体(例如功能性抗体)产生。因此，本专利技术在一些方面中涉及用于产生抗体的方法。此类方法典型地包括鉴别抗原表位和培育针对该抗原表位的抗体。本专利技术还涉及抗原表位和结合此类抗原表位的抗体。
技术介绍
由于用例如若干种单克隆抗体(mAb)疗法(包括阿达木单抗(Humira)、贝伐单抗(Avastin)、赫赛汀(Herceptin))所见的临床成功，和例如靶向PCSK9的新型胆固醇下降mAb治疗(阿利库单抗(Alirocumab)和依伏库单抗(Evolocumab))的希望，抗体治疗的发展非常迅速。然而，目前市场上的所有抗体以及所有在晚期临床发展中的抗体通常是针对细胞外靶标，并且这些抗体通常是使用聚焦于亲和力或结合强度的筛选平台进行发现和开发。细胞内作用的抗体的开发和针对“困难靶标(即其中传统抗体发现方法失败的靶标)”的抗体的开发是一项艰巨的挑战，需要新的技术进步来发现和开发有效的抗体。对于细胞内作用的抗体，还需要用于将抗体内化至正确的靶器官中的细胞的新工具。此外，目前的抗体发现和开发平台通常缺乏(例如在医学症状本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴别蛋白质上可被抗体结合的表位的方法，所述方法包括：(i)使用单一第一蛋白酶或第一蛋白酶的组合对所述蛋白质执行限制性或约束性蛋白水解；(ii)使用单一第二蛋白酶或第二蛋白酶的组合对所述蛋白质执行非限制性蛋白水解或执行限制性或约束性蛋白水解，其中所述第二蛋白酶均不同于步骤(i)中使用的蛋白酶；(iii)分析在步骤(ii)中从所述蛋白质释放的肽，以鉴别其中一端已被所述第一蛋白酶切割而另一端已被所述第二蛋白酶切割的肽；(iv)探测蛋白质区域中的一个或多个表位，所述蛋白质区域含有或侧接切割位点，所述切割位点是步骤(iii)中鉴别的所述第一蛋白酶的切割位点，其中一种或多种抗体针对所述表位，从而鉴...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.06 GB 1617002.91.一种鉴别蛋白质上可被抗体结合的表位的方法，所述方法包括：(i)使用单一第一蛋白酶或第一蛋白酶的组合对所述蛋白质执行限制性或约束性蛋白水解；(ii)使用单一第二蛋白酶或第二蛋白酶的组合对所述蛋白质执行非限制性蛋白水解或执行限制性或约束性蛋白水解，其中所述第二蛋白酶均不同于步骤(i)中使用的蛋白酶；(iii)分析在步骤(ii)中从所述蛋白质释放的肽，以鉴别其中一端已被所述第一蛋白酶切割而另一端已被所述第二蛋白酶切割的肽；(iv)探测蛋白质区域中的一个或多个表位，所述蛋白质区域含有或侧接切割位点，所述切割位点是步骤(iii)中鉴别的所述第一蛋白酶的切割位点，其中一种或多种抗体针对所述表位，从而鉴别可被抗体结合的所述蛋白质上一个或多个表位。2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(ii)中执行非限制性蛋白水解。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中单一第一蛋白酶在步骤(i)中使用。4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中单一第二蛋白酶在步骤(ii)中使用。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中在步骤(ii)中执行非限制性蛋白水解，其中所述方法进一步包括，在步骤(i)之后，但在步骤(ii)之前的额外步骤，所述额外步骤使用在步骤(ii)中使用的所述单一第二蛋白酶或第二蛋白酶的组合对所述蛋白执行限制性或约束性蛋白水解。6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中所述单一第一蛋白酶或所述第一蛋白酶的组合选自：胰蛋白酶、Arg-C、Lys-C和Lys-N。7.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中所述单一第一蛋白酶或所述第一蛋白酶的组合选自：胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和Glu-C。8.根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中所述单一第二蛋白酶或所述第二蛋白酶的组合选自：胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和Glu-C。9.根据权利要求1-5或7中任意一项所述的方法，其中所述单一第二蛋白酶或所述第二蛋白酶的组合选自：胰蛋白酶、Arg-C、Lys-C和Lys-N。10.根据权利要求1-9中任意一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在步骤(ii)之前、之中或之后实施的变性步骤。11.根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肽用质谱法分析。12.根据权利要求1-11中任意一项所述的方法，其中探...

【专利技术属性】
技术研发人员：O·奥尔瓦，C·特尔库利亚，M·戴维森，J·赫格伦，
申请(专利权)人：欧比力克治疗公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE