抗-CD27抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗‑CD27抗体以及这些抗体用于治疗如癌症和传染病的疾病的用途。

Anti-CD27 antibody

The present invention relates to anti-CD27 antibodies and their use in the treatment of diseases such as cancer and infectious diseases.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗-CD27抗体
本专利技术涉及通过刺激免疫应答改善的病症的治疗，特别是通过刺激抗原特异性的T淋巴细胞。本专利技术的各个方面适用于治疗已知或预期通过刺激CD27+免疫细胞或通过抑制一种或多种免疫检查点蛋白来改善的任何病症。通过本专利技术适当地治疗的病症是通过免疫刺激改善的那些病症，例如传染病和癌症。更具体地，本专利技术涉及抗-CD27抗体以及这些抗体在治疗如癌症和传染病的疾病中的用途。
技术介绍
CD27，一种TNF受体家族成员，被确认为人T细胞上的膜分子(vanLier等,1987,J.Immunol.139:1589-96)。根据目前的证据，CD27具有单一配体，CD70，其也是TNF家族成员(Goodwin等,1993,Cell73:447-56)。CD27专门地由造血细胞表达，特别是淋巴细胞谱系的那些，即T细胞、B细胞和NK细胞。CD27最初被定义为人T细胞共刺激分子，其增加对TCR刺激的增殖反应(vanLier等,1987,J.Immunol.139:1589-96)。CD70(CD27的配体)的存在决定了CD27介导的共刺激的时机和持久性。在未成熟树突状细胞中CD70的转基因表达足以将对病毒或肿瘤的免疫耐受转化为CD8+T细胞反应性。同样地，激动性可溶性CD70在这种肽免疫时促进CD8+T细胞反应(Rowley等,2004,JImmunol172:6039-6046)，且在CD70转基因小鼠中，响应于TCR刺激的CD4+和CD8+效应细胞形成得到极大地促进(Arens等2001,Immunity15:801-12；Tesselaar等,2003,NatImmunol4:49-54；Keller等2008,Immunity29:334-346)。在小鼠淋巴瘤模型中，肿瘤排斥在CD70转基因或抗小鼠CD27抗体注射时得到提高(Arens等,2003,JExpMed199:1595-1605；French等,2007,Blood109:4810-15；Sakanishi和Yagita,2010,Biochem.Biophys.Res.Comm.393:829-835；WO2008/051424；WO2012/004367)。在WO2012/004367中，描述了第一抗人激动性抗体(命名为hCD27.15)，其不需要交联以激活CD27介导的免疫反应的共刺激。另外，公开了称为1F5的抗人CD27抗体，其在交联时激活CD27(WO2011/130434和Vitale等,Clin.CancerRes,2012,18(14):3812-3821)。然而，本领域仍然需要开发具有改进特性的抗人CD27抗体，包括结合具有A59TSNP的人CD27和来自食蟹猴的CD27的能力。
技术实现思路
本专利技术提供抗-CD27抗体及其抗原结合片段，其包含下文指明的结构和功能特征。在另一实施方式中，本专利技术提供结合人CD27的抗体或其抗原结合片段，其包含含有以下的重链可变区和轻链可变区：(i)包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(ii)包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；和(iii)包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3。在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：(i)包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1，其中X1＝M；(ii)包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2，其中X1＝N，X2＝T，X3＝N和X4＝T；和(iii)包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3，其中X1＝M。在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段任选地具有至少一种以下特征：根据细胞ELISA分析以低于100pM或低于200pM的EC50结合人CD27；根据细胞ELISA分析以低于150pM或低于250pM的EC50结合人CD27A59T；根据细胞ELISA分析以低于100pM或低于150pM的EC50结合恒河猴CD27；如通过表面等离子体共振(例如BIACORE)或类似技术(例如KinExa或OCTET)测定的以约5-10nM的二价KD值结合人CD27和人CD27(A59T)；与食蟹猴或恒河猴CD27交叉反应；阻断人CD27与人CD70的结合；增加T细胞激活；刺激抗原特异性的T-细胞产生IL-2和IFNγ；当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以低于5nM的EC50在表达人CD27的细胞中诱导NF-κB激活；当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以低于10nM的EC50在表达人CD27A59T的细胞中诱导NF-κB激活；当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以低于1nM的EC50在表达恒河猴CD27的细胞中诱导NF-κB激活；对于与CD8+或CD4+T细胞上的人CD27的结合具有低于0.5nM的EC50；以可溶性形式增加CD8+T细胞激活；和在人肿瘤培养物中增加抗-CD3诱导的IFNγ产生。在一个实施方式中，表达人CD27、人CD27A59T或恒河猴CD27的细胞是具有瞬时转染的CD27质粒的包含NF-κB-荧光素酶报告构建体的HEK293FT人胚肾细胞。在一个实施方式中，CD8+T细胞激活通过作为CD25+CD69+的％CD8+T细胞测量，且具有平均约1.5-2倍的CD8+T细胞激活增加。在另一实施方式中，抗-CD3诱导的IFNγ产生的增加在20ug/ml的抗-CD27抗体和10ng/ml的抗-CD3抗体下是至少1.5倍。在另一实施方式中，本专利技术提供结合人CD27的抗体或抗原结合片段，其包含含有以下的重链可变区和轻链可变区：(i)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，其中X1＝M；(ii)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，其中X1＝D和X2＝T；和(iii)包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的轻链可变区CDR3，其中X1＝W，X2＝N和X3＝S。在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段任选地具有至少一种以下特征：根据细胞ELISA分析以低于100pM或低于200pM的EC50结合人CD27；根据细胞ELISA分析以低于150pM或低于250pM的EC50结合人CD27A59T；根据细胞ELISA分析以低于100pM或低于150pM的EC50结合恒河猴CD27；如通过表面等离子体共振(例如BIACORE)或类似技术(例如KinExa或OCTET)测定的以约5-10nM的二价KD值结合人CD27和人CD27(A59T)；与食蟹猴或恒河猴CD27交叉反应；阻断人CD27与人CD70的结合；增加T细胞激活；刺激抗原特异性的T-细胞产生IL-2和IFNγ；当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以低于5nM的EC50在表达人CD27的细胞中诱导NF-κB激活；当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以低于10nM的EC50在表达人CD27A59T的细胞中诱导NF-κB激活；当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以低于1nM的EC50在表达恒河猴CD27的细胞中诱导NF-κB激活；对于与CD8+或CD4+T细胞上的人CD27的结合具有低于0.5nM的EC50；以可溶性形式增加CD8+T细胞激活；和在人肿瘤培养物中增加抗-CD3诱导的IFNγ产生。在一个实施方式中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合人CD27的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：a.包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1，b.包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2，c.包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3，d.包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，e.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和f.包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.26 US 62/399,837;2017.08.16 US 62/546,2141.一种结合人CD27的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：a.包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1，b.包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2，c.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3，d.包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，e.包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和f.包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。2.如权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：a.包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1，其中X1＝M；b.包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2，其中X1＝N，X2＝T，X3＝N和X4＝T；c.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3，其中X1＝M；d.包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，其中X1＝M；e.包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，其中X1＝D和X2＝T；和f.包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的轻链可变区CDR3，其中X1＝W，X2＝N和X3＝S。3.一种结合人CD27的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：a.包含SEQIDNO:1的氨基酸序列，其中X1＝M；或者与所述序列相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的重链可变区CDR1；b.包含SEQIDNO:2的氨基酸序列，其中X1＝N，X2＝T，X3＝N和X4＝T；或者与所述序列相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的重链可变区CDR2；c.包含SEQIDNO:3的氨基酸序列，其中X1＝M；或者与所述序列相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的重链可变区CDR3；d.包含SEQIDNO:4的氨基酸序列，其中X1＝M；或者与所述序列相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；e.包含SEQIDNO:5的氨基酸序列，其中X1＝D和X2＝T；或者与所述序列相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和f.包含SEQIDNO:6的氨基酸序列，其中X1＝W，X2＝N和X3＝S；或者与所述序列相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。4.一种结合人CD27的抗体或其抗原结合片段，其包含选自下组的轻链免疫球蛋白可变区、重链免疫球蛋白可变区或轻链和重链免疫球蛋白可变区两者：a.包含含有SEQIDNO:7的氨基酸序列或与SEQIDNO:7相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变重链和/或含有SEQIDNO:8的氨基酸序列或与SEQIDNO:8相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；b.包含含有SEQIDNO:9的氨基酸序列或与SEQIDNO:9相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变重链和/或含有SEQIDNO:14的氨基酸序列或与SEQIDNO:14相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；c.包含含有SEQIDNO:32的氨基酸序列或与SEQIDNO:32相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变重链和/或含有SEQIDNO:33的氨基酸序列或与SEQIDNO:33相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；d.包含含有SEQIDNO:34的氨基酸序列或与SEQIDNO:34相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变重链和/或含有SEQIDNO:35的氨基酸序列或与SEQIDNO:35相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；e.包含含有SEQIDNO:39的氨基酸序列或与SEQIDNO:39相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变重链和/或含有SEQIDNO:40的氨基酸序列或与SEQIDNO:40相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；f.包含选自SEQIDNO:10-13或与SEQIDNO:10-13之一相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变重链和/或选自SEQIDNO:15-18或与SEQIDNO:15-18之一相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；g.包含含有SEQIDNO:10的氨基酸序列或与SEQIDNO:10相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变重链和/或含有SEQIDNO:15的氨基酸序列或与SEQIDNO:15相差1、2或3个保守置换的氨基酸序列的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；h.包含与SEQIDNO:10-13任一具有至少90％同一性的可变重链和/或与SEQIDNO:15-18任一具有至少90％同一性的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；i.包含与SEQIDNO:10-13任一具有至少90％同一性的可变重链和/或与SEQIDNO:15-18任一具有至少90％同一性的可变轻链的抗体或其抗原结合片段，其中任何序列变异存在于所述抗体或抗原结合片段的框架区中；j.包含相对于SEQIDNO:10-13任一含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换的可变重链和/或相对于SEQIDNO:15-18任一含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换的可变轻链的抗体或其抗原结合片段；和k.包含相对于SEQIDNO:10-13任一含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换的可变重链和/或相对于SEQIDNO:15-18任一含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换的可变轻链的抗体或其抗原结合片段，其中所述氨基酸置换存在于所述抗体或抗原结合片段的框架区中。5.如权利要求4的抗体或其抗原结合片段，包含选自以下的轻链和重链免疫球蛋白可变区：a.包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的可变重链和包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的可变轻链；b.包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的可变重链和包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的可变轻链；和c.包含SEQIDNO:34的氨基酸序列的可变重链和包含SEQIDNO:35的氨基酸序列的可变轻链。6.如权利要求4的抗体或其抗原结合片段，包含选自以下的可变轻链区域和可变重链区域：a.包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的可变重链和包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的可变轻链；b.包含SEQIDNO:39的氨基酸序列的可变重链和包含SEQIDNO:40的氨基酸序列的可变轻链；c.选自SEQIDNO:10-13的可变重链和选自SEQIDNO:15-18的可变轻链；和d.包含SEQIDNO:10的氨基酸序列的可变重链和包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的可变轻链。7.如权利要求1或2的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区。8.如权利要求1-7任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其片段具有以下特征中的至少一种：a)在细胞ELISA分析中以小于100pM的EC50结合人CD27；b)在细胞ELISA分析中以小于150pM的EC50结合人CD27(A59T)；和c)在细胞ELISA分析中以小于100pM的EC50结合恒河猴CD27。9.如权利要求1-7任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其片段具有以下特征中的至少一种：a)以约5-10nM的二价KD值结合人CD27和人CD27(A59T)，如通过表面等离子体共振测定的；b)在细胞ELISA分析中以小于200pM的EC50结合人CD27；c)在细胞ELISA分析中以小于250pM的EC50结合人CD27(A59T)；d)在细胞ELISA分析中以小于150pM的EC50结合恒河猴CD27；e)与食蟹猴或恒河猴CD27交叉反应；f)阻断人CD27与人CD70的结合；和g)增加T细胞激活。10.如权利要求1-9任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其片段具有以下特征中的至少一种：a)当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以小于5nM的EC50在表达人CD27的细胞中诱导NF-κB激活；b)当所述抗体或其片段为可溶性形式时，以小于10nM的EC50在表达人CD27A59T的细胞中诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·M·毕比，张成俊，V·阮，L·法雅达特迪尔曼，S·萨德科瓦，J·王，T·O·菲诗曼，W·W·普罗西瑟，H·范伊恩纳姆，A·范伊尔萨斯，L·格勒恩，
申请(专利权)人：默沙东公司，默沙东有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US