水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品及制备方法技术

本发明专利技术属于化妆品微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品及其制备方法。水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品包括目标菌群和背景菌群，所述目标菌群由酿酒酵母、黑曲霉组成，所述背景菌群由蜡样芽胞杆菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌组成。本发明专利技术样品中菌群的组成及含量与实际样品一致；标准样品与实际样品基体成分一致；均匀性、稳定性符合标准样品要求，可以最大程度保证标准样品的稳定性；样品的制备方法、工艺简单，成功率高。

Standard sample for counting mould and yeast in water-soluble cosmetics and its preparation method

The invention belongs to the field of quality control in microbiological detection of cosmetics, in particular to a standard sample for counting mould and yeast in water-soluble cosmetics and a preparation method thereof. Standard samples for counting mould and yeast in water-soluble cosmetics include target flora and background flora. The target flora consists of Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus niger. The background flora consists of Bacillus cereus, Escherichia coli and Staphylococcus aureus. The composition and content of microflora in the sample of the invention are consistent with the actual sample; the matrix composition of the standard sample is consistent with the actual sample; the homogeneity and stability meet the requirements of the standard sample, and the stability of the standard sample can be guaranteed to the greatest extent; the preparation method and process of the sample are simple, and the success rate is high.

【技术实现步骤摘要】
水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品及制备方法
本专利技术属于化妆品微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品及其制备方法。
技术介绍
化妆品是许多人日常生活中的个人护理产品，其本身的作用及安全性直接关系到使用者的身体健康安全。化妆品中微生物直接反映着化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。水溶性化妆品微生物学检验领域非常特殊。目前，国内外尚未有机构制备水溶性化妆品微生物学标准样品和大规模生产的先例，仍属空白领域。目前国内已有的仅是标准菌株或仅含有纯菌的适用于食品领域的标准样品，与实际的样品不一致，无法满足日常实验室质量控制等需要。霉菌和酵母菌计数是指化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌菌落总数。如果制备的霉菌和酵母菌样品中，目标菌群易发生变化(繁殖和死亡等)，就会导致样品的保存期短，样品的均匀性和稳定性差；背景菌和目标菌含量的高低也是制备该标准样品的重要考虑因素，通常实际样品中微生物含量较低，因此所制备的标准样品中背景菌和目标菌含量应与实际样品保持一致。因此，综合考虑霉菌和酵母菌的生化特性，选取性质相对稳定的标准菌株作为目标菌群对保证样品的均匀性和稳定性十分重要，并且样品的均匀性和稳定性与冻干的菌种、冻干的工艺条件、冻干保护剂的使用、再水化的介质等均有密切的关系。水溶性化妆品中霉菌和酵母菌指标，直接反映着化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。如果化妆品中霉菌和酵母菌超过一定限量，会有伤害皮肤危险的发生。因此，制备均匀性与稳定性俱佳的霉菌和酵母菌样品，可以避免霉菌和酵母菌检验的随意性和不确定性，真实地反映检测实验室的能力。这对提高实验室质量控制水平，保障水溶性化妆品的质量具有特殊重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种与实际样品一致的标准样品，用于化妆品检测过程中质量控制、人员培训、方法验证、培养基或试剂盒性能评价等用途，均匀性、稳定性符合标准样品的要求，本专利技术的另一个目的是提供该样品的制备方法，工艺简单，成功率高。本专利技术为实现上述目的所采用的技术方案是：水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品，其特征是：包括目标菌群与背景菌群，所述目标菌群由酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、黑曲霉(Aspergillusniger)组成，所述背景菌群由蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)、大肠埃希氏菌(E.coil)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)组成。所述样品基体为化妆水，化妆水体积分数为0.5％；保护剂以海藻糖和无菌水组成，其中海藻糖体积分数为10％。所述样品中目标菌群的目标浓度为102～103CFU/mL，背景菌群的目标浓度为103CFU/mL。水溶性化妆品中霉菌和酵母菌定性标准样品的制备方法，其特征是：包括冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验、样品定值四个步骤，其中样品冻干过程为：菌株复苏传代—增菌—菌悬液配制—冻干—包装—储存，具体过程为：(1)菌株复苏传代将标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；(2)增菌目标菌群培养至对数生长期末，背景菌群培养至稳定期，从斜面刮取菌落，加到10mL的冻干保护剂中制成相应单一菌种的菌液；(3)菌悬液配制将上一过程得到的菌液与冻干保护剂混合，按目标菌群的目标浓度102～103CFU/mL和背景菌群的目标浓度103CFU/mL配制菌悬液，分别配制2个目标菌的菌悬液和3个背景菌的菌悬液，分别按1:1体积比混合形成目标菌群悬液和背景菌群悬液，再将目标菌群悬液与背景菌群悬液按1:1体积比混合，得到混合菌悬液，置于磁力搅拌器上不断搅拌，1：100比例添加化妆水，充分搅拌混匀后分装到样品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要盖实；(4)冻干和包装将装有混合菌悬液的样品瓶开盖放入冻干机中，冷冻干燥50～55h，当样品冷冻干燥结束后，直接进行箱内加塞，关闭机器，样品瓶中样品为真空状态；(5)储存将样品放置在-15～-20℃条件下避光保存，从全部样品中随机挑选样品发放给实验室或进行均匀性和稳定性试验。所述样品基体为化妆水，化妆水体积分数为0.5％；保护剂以海藻糖和无菌水组成，其中海藻糖体积分数为10％。所述样品的均匀性和稳定性试验按照GB/T15000.3-2008《标准样品工作导则(3)标准样品定值的一般原则和统计方法》进行。本专利技术菌种的选择采用酿酒酵母、黑曲霉作为水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数样品的目标菌群，以蜡样芽胞杆菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌作为背景菌群。环境中常见的霉菌中黑曲霉比较常见，酵母菌属酿酒酵母较为常见。选用与实际样品一致的化妆水为基体，与实际样品相一致；选择具有较好冻干保护作用的海藻糖为保护剂，并且选用大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌等环境中常见菌作为背景菌群，模拟实际样品中不同菌之间的竞争或干扰状态；目标菌群和背景菌群的添加量模拟实际样品中微生物的含量，充分起到了质量控制作用。本专利技术的水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品具有以下优势特性：样品的基体与实际样品一致，样品中菌群的组成及含量与实际样品一致；目标菌含量与实际样品一致；活的微生物、数量不发生变化、生化特征不发生变异，从满足特殊运输的条件着手，通过特殊工艺的研究、稳定性和均匀性的研究等形成一套完善的标准样品制备技术，适合于水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品的制备。附图说明图1为本专利技术工艺流程图。具体实施方式下面结合附图及具体实施例对本专利技术作进一步详细描述，但本专利技术并不局限于具体实施例。实施例1水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品，包括目标菌群和背景菌群，所述目标菌群由酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、黑曲霉(Aspergillusniger)组成，所述背景菌群由蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)、大肠埃希氏菌(E.coil)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)组成。所述样品基体为化妆水，化妆水体积分数为0.5％；保护剂以海藻糖和无菌水组成，其中海藻糖体积分数为10％。所述样品中目标菌群的目标浓度为102～103CFU/mL，背景菌群的目标浓度为103CFU/mL。所述样品用于化妆品检测过程中质量控制、人员培训考核、方法验证、培养基或试剂验收和质量控制等。如检测实验室采购的培养基，需要验证其有效性，从外观无法验证，则可以利用该标准样品，按照检测方法规定，使用待验证的培养基进行培养和相应的检测，检测结果与标准样品的特性值的一致性相比较，结果一致则说明培养基可以通过验收，用于该项目的检测；否则则需要更进一步的确认。实施例2如图1所示，一种实施例1中水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品的制备方法，包括样品冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验、标准样品定值四个步骤，具体步骤如下：1、样品添加菌株的准备按照目标菌群：酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、黑曲霉(Aspergillusniger)，背景菌群：蜡样芽胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品，其特征是：包括目标菌群与背景菌群，所述目标菌群由酿酒酵母、黑曲霉组成，所述背景菌群由蜡样芽胞杆菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌组成。

【技术特征摘要】
1.水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品，其特征是：包括目标菌群与背景菌群，所述目标菌群由酿酒酵母、黑曲霉组成，所述背景菌群由蜡样芽胞杆菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌组成。2.根据权利要求1所述的水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品，其特征是：所述样品基体为化妆水，化妆水体积分数为0.5%；保护剂以海藻糖和无菌水组成，其中海藻糖体积分数为10％。3.根据权利要求1或2所述的水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品，其特征是：所述样品中目标菌群的目标浓度为102～103CFU/mL，背景菌群的目标浓度为103CFU/mL。4.根据权利要求1所述的水溶性化妆品中霉菌和酵母菌计数标准样品的制备方法，其特征是：包括冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验、样品定值四个步骤，其中样品冻干过程为：菌株复苏传代—增菌—菌悬液配制—冻干—包装—储存，具体过程为：（1）菌株复苏传代将标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；（2）增菌目标菌培养至对数生长期末，背景菌群培养至稳定期，从斜面刮取菌落，加到10mL的冻干保护剂中制成相应单一菌种的菌液；（3）菌悬液配制将上一过程得到的菌液与冻干保护剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵红阳，徐大军，吕敬章，王秀君，刘汉霞，王鸣雨，卫锋，卢行安，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11