一种对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂及其应用。复合菌剂包括有Bacillus flexus HGD12、Pseudomonas putida HGD3和Bacillus velezensis HP9菌株的发酵液；所述Bacillus flexus HGD12为弯曲芽孢杆菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019224；所述Pseudomonas putida HGD3为恶臭假单胞菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019223；所述Bacillus velezensis HP9为贝莱斯芽孢杆菌，于2019年4月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019243。本发明专利技术具有促进辣椒生长，提高辣椒产量，减少化肥施用，达到化肥减量、辣椒增产的有益效果。

A Compound Microbial Agent with Growth-promoting and Yield-increasing Effect on Pepper and Its Application

The invention discloses a compound bacterium agent which has the effect of promoting growth and increasing production of pepper and its application. Compound microbial agents include fermentation broth containing Bacillus flexus HGD12, Pseudomonas putida HGD3 and Bacillus velezensis HP9 strains; the Bacillus flexus HGD12 is Campylobacter and is stored in a typical culture preservation center in China on April 1, 2019, with the preservation number CCTCC NO: M 2019224; the Pseudomonas putida HGD3 is Pseudomonas putida, which is preserved on April 1, 2019. It is stored in the China Typical Culture Preservation Center with the storage number CCTCC NO:M 2019223; the Bacillus velezensis HP9 is Bacillus berezensis, and it is stored in the China Typical Culture Preservation Center on April 8, 2019 with the storage number CCTCC NO:M 2019243. The invention has the advantages of promoting the growth of pepper, increasing the yield of pepper, reducing the application of chemical fertilizer, and achieving the beneficial effect of reducing the amount of chemical fertilizer and increasing the yield of pepper.

【技术实现步骤摘要】
一种对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂及其应用
本专利技术属于农业微生物
，尤其涉及一种促进辣椒生长和增产的微生物复合菌剂及其应用。
技术介绍
我国是世界第一大辣椒生产国与消费国，年播种面积约133.3万公顷，但是辣椒种植上普遍存在盲目施肥和过度施肥的现象，大量化肥的施用导致了土壤板结及肥力下降，最终可造成辣椒产量和品质的下降，这一现象已经影响到农业的可持续发展。微生物菌剂中的菌株由于来源于土壤或植物材料中的有益微生物，对环境无毒无害，施用后可以改良土壤、增加土壤有机质含量，还可促进作物生长发育、起到增加产量和改善品质的作用。与化肥配合还可减少化肥的过度使用、更好地保护生态环境。目前辣椒专用复合菌剂的研究和应用的报道较少。专利CN108130289A公开了由7种芽孢杆菌属菌株及1种假单胞菌属菌株组成的辣椒专用复合菌剂的制备及在大尖椒田间应用上的效果。专利CN107418906A公开了由3种乳杆菌属菌株组成的复合菌剂在提高彩椒产量和抗根腐病上的应用。但其增产效果均是在常规化肥施用量下进行的，且仅是复合菌剂对1个辣椒品种的田间试验。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂及其应用。本专利技术具有促进辣椒生长，提高辣椒产量，减少化肥施用，达到化肥减量、辣椒增产的目的。本专利技术的技术方案：一种对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂及其应用，包括有BacillusflexusHGD12、PseudomonasputidaHGD3和BacillusvelezensisHP9菌株的发酵液；所述BacillusflexusHGD12为弯曲芽孢杆菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2019224；所述PseudomonasputidaHGD3为恶臭假单胞菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2019223；所述BacillusvelezensisHP9为贝莱斯芽孢杆菌，于2019年4月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2019243。一种如权利要求1所述的对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂的制备方法，按照下述方法制备；a、斜面活化：将BacillusflexusHGD12、PseudomonasputidaHGD3和BacillusvelezensisHP9菌株分别接种于固体培养基，过夜活化菌株；b、液体活化：分别挑取由步骤a活化菌种的菌苔于液体培养基中，于28-30℃条件下，150rpm摇床振荡培养至对数生长期；c、获取各菌株的发酵液：将步骤b中处于对数生长期的各菌株培养液按5％体积比分别接种入液体培养基中，28-30℃下摇床150rpm振荡培养18-36h，分别得到BacillusflexusHGD12、PseudomonasputidaHGD3和BacillusvelezensisHP9菌株的发酵液；d、复合菌剂的制备：将步骤c中BacillusflexusHGD12、PseudomonasputidaHGD3和BacillusvelezensisHP9菌株的发酵液等比例混合均匀，得复合菌剂。前述的对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂的制备方法中，所述步骤a中，固体培养基为NA固体培养基。前述的对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂的制备方法中，按下述比例计，所述NA固体培养基内含有牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000mL和琼脂15-20g；该NA固体培养基为pH7.0-7.2，使用前并在121℃下灭菌20min。前述的对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂的制备方法中，所述步骤b、c中，液体培养基为NA液体培养基。前述的对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂的制备方法中，所述NA液体培养基每升含有：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g和蒸馏水1000mL；该NA液体培养基为pH7.0-7.2，使用前并在121℃下灭菌20min。前述的对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂的制备方法中，所述步骤d中，复合菌剂含活菌总数为3×108-3×109CFU/mL之间。一种辣椒促生菌剂制品，所述制品的活性成分包括权利要求1所述的复合菌剂。一种辣椒促生菌剂制品，所述制品的活性成分是权利要求1所述的复合菌剂。前述的辣椒促生菌剂制品，还包括用于促生菌剂的常规成分。本专利技术还提供了所述复合菌剂在促进辣椒生长、提高辣椒产量及减少化肥施用方面的应用，具体方法是在辣椒苗期(移栽后10d)、辣椒始花期(定殖后30-40d)、辣椒坐果期(定殖后60-70d)分别施用，每次用量均为2-4升/亩，活菌总数为3×108-3×109CFU/mL之间，兑水稀释后灌根于辣椒根部，总共3次。与现有技术相比，本专利技术的复合菌剂菌株来源于茶园根际土壤的根际促生菌，不同菌株具有固氮、解磷、解钾或产生ACC脱氨酶的促生特性，且各菌株之间无拮抗性，混合施用可促进辣椒生长，提高辣椒产量，并达到化肥减量的目的。综上所述，本专利技术具有促进辣椒生长，提高辣椒产量，减少化肥施用，达到化肥减量、辣椒增产的有益效果。附图说明图1复合菌剂对艳辣425株高的影响；图2复合菌剂对艳椒425茎粗的影响；图3复合菌剂对遵辣10号株高的影响；图4复合菌剂对遵辣10号茎粗的影响；图5复合菌剂在田间应用中促进遵辣10号根系发育图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不作为对本专利技术限制的依据。实施例1：组成复合菌剂的3个菌株的分子鉴定对3株菌株进行分子鉴定：对菌株HGD12、HGD3和HP9提取细菌DNA，分别以该DNA为模板，采用细菌16SrDNA通用引物进行PCR扩增，对扩增产物进行测序，3株细菌的测序结果如序列表所示，16SrDNA序列的扩增长度分别为1417、1442、1454bp。经同源性比对，HGD12菌株16SrDNA序列与GenBank数据库中BacillusflexusNBRC1571516SrDNA序列(NCBI登录号：BCVD01000224)同源性达99.93％；HGD3菌株16SrDNA序列与GenBank数据库中PseudomonasputidaAA716SrDNA序列(NCBI登录号：CP018846)同源性达99.86％；HP9菌株16SrDNA序列与GenBank数据库中BacillusvelezensisCR502(Genbank登录号：AY603658)的同源性为99.86％。以上所述扩增16SrDNA通用引物序列为：27f:5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'，1492r：5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3'所述PCR体系为：1×premixrTaq，0.4μM引物27f，0.4μM引物1492r，50ngDNA。所述PCR程序为：95℃预变性10min，95℃变性45sec，55℃退火45sec，72℃延伸90sec，35个循环；之后72℃延伸7min。根据分子鉴定结果，将HGD12菌株鉴定为Bacillusflexus，HGD3菌株鉴定为Pseudomonasputida，HP9菌株鉴定为Bacillusvelezensis。实施例2：组成复合菌剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂，其特征在于：包括有Bacillus flexus HGD12、Pseudomonas putida HGD3和Bacillus velezensis HP9菌株的发酵液；所述Bacillus flexus HGD12为弯曲芽孢杆菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019224；所述Pseudomonas putida HGD3为恶臭假单胞菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019223；所述Bacillus velezensis HP9为贝莱斯芽孢杆菌，于2019年4月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2019243。

【技术特征摘要】
1.一种对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂，其特征在于：包括有BacillusflexusHGD12、PseudomonasputidaHGD3和BacillusvelezensisHP9菌株的发酵液；所述BacillusflexusHGD12为弯曲芽孢杆菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2019224；所述PseudomonasputidaHGD3为恶臭假单胞菌，于2019年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2019223；所述BacillusvelezensisHP9为贝莱斯芽孢杆菌，于2019年4月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2019243。2.一种如权利要求1所述的对辣椒具有促生增产作用的复合菌剂的制备方法，其特征在于：按照下述方法制备；a、斜面活化：将BacillusflexusHGD12、PseudomonasputidaHGD3和BacillusvelezensisHP9菌株分别接种于固体培养基，过夜活化菌株；b、液体活化：分别挑取由步骤a活化菌种的菌苔于液体培养基中，于28-30℃条件下，150rpm摇床振荡培养至对数生长期；c、获取各菌株的发酵液：将步骤b中处于对数生长期的各菌株培养液按5％体积比分别接种入液体培养基中，28-30℃下摇床150rpm振荡培养18-36h，得到BacillusflexusHGD12、PseudomonasputidaHGD3和BacillusvelezensisHP9菌株的发酵液；d、复合菌剂的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩丽珍，黄文茂，王欢，周静，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52