一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法及其建立的模型技术

本发明专利技术提供了一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法及其建立的模型。通过将盖他病毒以滴鼻方式感染健康小鼠，饲养并选择表现出盖他病毒感染症状的小鼠为盖他病毒感染小鼠实验模型。本发明专利技术以妊娠期鼠及仔鼠为模拟动物，经过滴鼻方式感染小鼠，研究盖他病毒对妊娠期不同阶段的小鼠和新生仔鼠的致病性，在临床表现上与盖他病毒感染妊娠猪/马等和新生猪/马等相似度很高，且操作简单、易于观察、节约成本；本发明专利技术技术方案构建的感染盖他病毒的实验模型稳定性好，重复性强，建模成功性几乎为100％；对于动物和人的致病性、促进养殖业健康发展及保障公共卫生安全均具有重要的学术意义和应用价值。

Establishment of a mouse model infected with getavirus and its model

The invention provides a method for establishing a mouse model infected with Gatavirus and a model established. Healthy mice were infected by Getavirus by nasal dropping. The mice with the symptoms of Getavirus infection were fed and selected as the experimental model of Getavirus infection in mice. In the present invention, pregnant rats and offspring rats are used as simulative animals, and the mice are infected by nasal drip to study the pathogenicity of the virus against different stages of pregnancy and neonatal rats. The clinical manifestations are highly similar to those of gestation infected pigs / horses and newborn pigs / horses, and the operation is simple, easy to observe and save costs. The experimental model of virus has good stability, strong repeatability and almost 100% success. It has important academic significance and application value for animal and human pathogenicity, promoting the healthy development of aquaculture industry and ensuring public health safety.

【技术实现步骤摘要】
一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法及其建立的模型
本专利技术属于动物实验模型的构建
涉及一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法及其建立的模型，具体涉及一种猪盖他病毒导致病理损伤、流产、腹泻的小鼠模型的建立方法及其建立的模型。
技术介绍
盖他病毒属于披膜病毒科(Tongaviridae)甲病毒属(Alphavirus)成员。病毒粒子大小约70nm，球形结构，具有囊膜和纤突，病毒基因组为单股正链RNA，基因组有两个开放阅读框(ORF)，编码两个多聚蛋白，病最终被切割为4个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3和NSP4)和5中结构蛋白(C、E3、E2、6K和E1)。1955年Scherer等首次从马来西亚的雪背库蚊(Culexspp.mosquitoes)中分离获得该病毒。血清学检测结果显示，GETV(盖他病毒)广泛分布于欧洲、亚洲和大洋洲，在猪、马、牛及袋鼠等多种动物体内检测到GETV抗体，该病毒能够引起马的皮疹、发热和关节水肿及妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪的震颤等病症。尽管目前尚无人感染GETV而临床发病的报道，但人的血清中普遍能够检测到GETV抗体。因此，目前人们一般将该病看作是人兽共患病。因此，建立一种稳定、操作简便、经济高效、符合盖他病毒感染动物引起致病性的试验动物模型是十分必要的。
技术实现思路
本专利技术针对的技术问题是：盖他病毒能够引起马的皮疹、发热和关节水肿及妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪的震颤等病症，且在人的血清中也能够检测到GETV抗体。但是目前仍未针对盖他病毒感染猪的病症建立实验模型、从而进行对该病毒对动物的影响进行广泛、准确的研究。针对上述问题，本专利技术提供了一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法及其建立的模型，本专利技术以妊娠期鼠及仔鼠为模式动物，经滴鼻方式感染小鼠，在临床上表现与盖他病毒感染妊娠期母猪/牛等及新生仔猪/牛等相似，且操作简单、易于观察，通过该方法建立的盖他病毒感染妊娠期鼠及仔鼠的实验模型稳定、操作简便、经济高效。对于研究盖他病毒不同毒株致病性等具有重要的应用价值。弥补了该领域中对于此技术研究的空白。本专利技术还提供了所述盖他病毒感染小鼠模型在疫苗研发、致病机理中的应用。本专利技术是通过以下技术方案实现的一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：将盖他病毒通过滴鼻方式感染健康小鼠，饲养并选择表现出盖他病毒感染症状的小鼠作为盖他病毒感染小鼠模型。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述的盖他病毒为猪、马、蚊子、狐狸或牛体内的盖他病毒。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述的盖他病毒为猪盖他病毒，为中国猪源盖他病毒分离株HNJZ-S1株，保藏编号为CGMCCNO.12550。所述的猪源盖他病毒分离株HNJZ-S1株，其保藏编号为CGMCCNO.12550；分类命名：披盖病毒科甲病毒属盖他病毒HNJZ-S1；拉丁文学名：Togaviridae，Alphavirus,SwineGetahvirus(SGETV)；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位简称：CGMCC，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，保藏日期：2016年6月2日。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述的小鼠为妊娠期小鼠和/或1～5日龄仔鼠。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述的小鼠为妊娠期小鼠，滴鼻方式的注入量为45～55μl/只。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述的小鼠为1～5日龄仔鼠，仔鼠的滴鼻方式的注入量为6～13μl/只。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述滴鼻感染的盖他病毒的浓度为101～109TCID50/mL。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述妊娠期小鼠及1～5日龄仔鼠感染盖他病毒后的表现症状为：妊娠期小鼠感染猪盖他病毒的症状为：病理损伤、产木乃伊胎、流产、早产胎儿；1～5日龄仔鼠感染猪盖他病毒的主要症状为：病理损伤、严重后肢瘫痪、生长缓慢、精神沉郁，肠道内容物减少、肠壁变薄、腹泻；所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，所述盖他病毒包括以下扩增步骤：a.将原始病毒液从-80℃冰箱中取出，室温融解；然后10000g离心5～10min，离心完成后取上清液，备用；b.将生长成单层的Marc-145细胞用PBS缓冲液冲洗2次，加入步骤a所述融解、离心后的上清液，放入37℃二氧化碳培养箱(含5％二氧化碳)中孵育1h后，弃去病毒液；加入含2％胎牛血清的DMEM培养液，然后再放入37℃二氧化碳培养箱(含5％二氧化碳)中培养并观察，至病毒感染Marc-145细胞病变(cytopathiceffect，CPE)达到90％时，置于-80℃冻存；c.在步骤b所述置于-80℃冻存的Marc-145病变细胞在室温融解，如此将Marc-145病变细胞反复冻融三次，然后4℃条件下、10000g离心10min，取上清收获病毒液；d.重复步骤a、步骤b及步骤c病毒在细胞中的传代实验1次，收获病毒液，分装，-80℃保存。所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，步骤a所述原始病毒液的浓度为(107TCID50/mL)；步骤b所述Marc-145细胞在含有10％胎牛血清，100μg/mL青霉素，100μg/mL链霉素的DMEM培养液中生长成单层。一种根据上述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法建立的盖他病毒感染小鼠实验模型。与现有技术相比，本专利技术具有以下积极有益效果病毒感染的动物模型在研究病毒的致病性和疫苗候选株筛选以及疫苗的临床前实验中具有重要的作用。建立有效、可靠、易于操作的动物实验模型有利于病毒致病性研究和疫苗临床前的进度。本专利技术以妊娠期鼠及仔鼠为模拟动物，经过滴鼻方式感染小鼠，研究盖他病毒对妊娠期不同阶段的小鼠和新生仔鼠的致病性，在临床表现上与盖他病毒感染妊娠猪/牛/马等和新生猪/牛/马等相似度很高，且操作简单、易于观察、节约成本；本专利技术针对研究盖他病毒致病性研究问题提供一种操作简便、经济高效、快速的盖他病毒感染小鼠实验模型的构建方法，该实验模型可以模拟盖他病毒感染妊娠期母猪/牛/马等以及新生仔猪/牛/马等临床发病的特征；对于动物和人的致病性、促进养殖业健康发展及保障公共卫生安全均具有重要的学术意义和应用价值；本专利技术的技术方案构建时间短，12h即可得到感染盖他病毒的妊娠鼠和仔鼠，且仔鼠感染病毒的时间科持续3～5天，均具有持续稳定性；即本专利技术技术方案构建的感染盖他病毒的实验模型稳定性好，重复性强，建模成功性几乎为100％；本专利技术提供一种操作简单、成本低、能够有效模拟猪群等动物群发病的实验动物模型，为研究盖他病毒不同毒株致病性，疫苗研发等具有重要的应用价值。附图说明图1表示实施例1所述猪盖他病毒HNJZ-S1感染妊娠6天和妊娠10天妊娠鼠3～5天后产生的木乃伊胎、流产；图中图1A为木乃伊胎，图1B为流产胎儿；图2表示实施例1所述猪盖他病毒HNJZ-S1感染14日龄妊娠鼠3-5天后引起早产；图中，图2A为早产胎儿，图2B为未接种病毒对照组；图3表示实施例2所述新生仔鼠感染猪盖他病毒HNJZ-S13-5天后引起瘫痪(箭头所指)；图中图3A为感染组，图3B为未接种病毒对照组；图4表示实施例2所述猪盖他病毒感染组濒死仔鼠胃和肠道内容物减少、肠壁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：将盖他病毒通过滴鼻方式感染健康小鼠，饲养并选择表现出盖他病毒感染症状的小鼠作为盖他病毒感染小鼠实验模型。

【技术特征摘要】
1.一种盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：将盖他病毒通过滴鼻方式感染健康小鼠，饲养并选择表现出盖他病毒感染症状的小鼠作为盖他病毒感染小鼠实验模型。2.根据权利要求1所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述的盖他病毒为猪、马、蚊子、狐狸或牛体内的盖他病毒。3.根据权利要求2所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述的盖他病毒为猪盖他病毒，为中国猪源盖他病毒分离株HNJZ-S1株，保藏编号为CGMCCNO.12550。4.根据权利要求1所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述的小鼠为妊娠期小鼠和/或1～5日龄仔鼠。5.根据权利要求4所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述的小鼠为妊娠期小鼠，滴鼻方式的注入量为45～55μl/只。6.根据权利要求4所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述的小鼠为1～5日龄仔鼠，仔鼠的滴鼻方式的注入量为6～13μl/只。7.根据权利要求1～6任一项所述的盖他病毒感染小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述滴鼻注入的盖他病毒的浓度为101～109TCID50/mL。8.根据权利要求1～6任一项所述的盖他病毒感染小鼠模型的建...

【专利技术属性】
技术研发人员：王川庆，周峰，常洪涛，陈陆，王傲杰，王新卫，杨霞，赵军，刘红英，王增，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41