The invention discloses a beta galactosidase galRBM20_1 and its preparation method and application. The amino acid sequence of the enzyme is shown in SEQ ID NO.1. The invention obtains a variety of enzymes genes from the fecal microorganisms of Rhinopithecus yunnanensis, and constructs the Fosmid Library of the macrogenome of the fecal microorganisms of Rhinopithecus yunnanensis. GalRBM20_1, a beta-galactosidase gene, was cloned from the macrogenome of faecal microorganisms of Rhinopithecus yunnanensis. After heterologous expression in E. coli, its enzymatic properties and salt tolerance were studied. The recombinant enzyme has high pH stability and thermal stability, as well as good salt tolerance. The invention provides a new source for obtaining the galRBM20 1 gene of beta galactosidase, and provides a large number of galRBM201 genes for industrial production through efficient recombination expression, which can be widely used in dairy industry.
【技术实现步骤摘要】
一种β-半乳糖苷酶galRBM20_1及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程
,具体涉及一种β-半乳糖苷酶galRBM20_1及其制备方法和应用。
技术介绍
β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.238)学名为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶,常用名为乳糖酶,该酶能催化半乳糖苷键水解,水解乳糖生成葡萄糖和半乳糖。乳糖是哺乳动物乳汁中特有的糖类,牛奶中绝大多数糖类是乳糖,但乳糖只有被β-半乳糖苷酶水解成葡萄糖和半乳糖后才能被机体小肠粘膜细胞吸收。大多数哺乳动物刚出生后体内β-半乳糖苷酶活性较高,但之后随着年龄增长活性逐渐下降,最终乳糖酶缺乏并导致乳糖不耐症。亚洲人和非洲人是世界上最易发生乳糖不耐症的人群,这类人群摄入乳糖后由于乳糖不能被小肠吸收而直接进入大肠,刺激大肠蠕动加快,造成腹鸣、腹泻等症状。β-半乳糖苷酶广泛应用于乳制品行业。在奶类和乳制品加工过程中,加入安全的β-半乳糖苷酶,使其消化为葡萄糖和半乳糖,这样的奶类被称作低乳糖奶。低乳糖奶不仅可以满足正常消费者的需要,更可以满足乳糖不耐症者、先天性β-半乳糖苷酶缺乏者食用乳制品、充分吸收乳制品营养的需要。目前, ...
【技术保护点】
1.一种β‑半乳糖苷酶galRBM20_1,其特征在于,所述的β‑半乳糖苷酶galRBM20_1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种β-半乳糖苷酶galRBM20_1,其特征在于,所述的β-半乳糖苷酶galRBM20_1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述的β-半乳糖苷酶galRBM20_1的编码基因,其特征在于,所述的编码基因如SEQIDNO.2所示。3.一种重组载体,其特征在于,所述的重组载体为包含SEQIDNO.2所示核苷酸序列的载体。4.一种重组菌,其特征在于,所述的重组菌为包含SEQIDNO.2所示核苷酸序列的菌株。5.一种β-半乳糖苷酶galRBM20_1的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1)设计引物F1和R1,以滇金丝猴粪便微生物宏基因组Fosmid文库混合质粒为模板,进行PCR扩增得到β-半乳糖苷酶galRBM20_1基因;2)设计引物引物F2和R2,以β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1为摸板,进行PCR扩增,得到含有内切酶NdeⅠ和XhoⅠ识别位点的基因片段galRBM20_1/NdeⅠ/XhoⅠ;3)用限制性内切酶NdeⅠ与XhoⅠ切割表达载体pEASY-E2,并与基因片段galRBM20_1/NdeⅠ/XhoⅠ连接;4)将得到的表达...
【专利技术属性】
技术研发人员:许波,张文洪,黄遵锡,杨云娟,李俊俊,唐湘华,周峻沛,
申请(专利权)人:云南师范大学,
类型:发明
国别省市:云南,53
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