鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用，经实验发现鸦胆子素D能够抑制胃癌细胞生长速率、抑制胃癌细胞增殖、阻滞胃癌细胞周期在S期、抑制胃癌细胞体外克隆形成能力、抑制胃癌细胞体内成瘤能力，为胃癌治疗提供了新的药物，对临床胃癌的治疗具有重要意义。

Application of Brucetin D in the Preparation of Drugs for the Treatment of Gastric Cancer

The invention discloses the application of Brucea Javanica D in the preparation of medicines for treating gastric cancer. It is found that Brucea Javanica D can inhibit the growth rate of gastric cancer cells, inhibit the proliferation of gastric cancer cells, block the cell cycle of gastric cancer at S stage, inhibit the clonal formation ability of gastric cancer cells in vitro, and inhibit the tumorigenic ability of gastric cancer cells in vivo. It provides a new drug for the treatment of gastric cancer and provides a Therapy is of great significance.

【技术实现步骤摘要】
鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用。
技术介绍
胃癌(gastriccarcinoma)是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，是世界上一种重要的癌症，2018年新发病例超过100万例，估计有78.3万例死亡。在国内癌症中，胃癌的发病率位于第二位，死亡率位于第三位。胃癌一般没有典型临床表现，常见症状为胃脘胀痛、消瘦、食欲减退、乏力、反酸、黑便等。胃癌的常规治疗措施，包括手术治疗、化学药物治疗、放射治疗及中医药治疗。中医药治疗胃癌有上千年历史，具有鲜明的中国特色。随着时代的进步，人们的治疗观念也随之改变，诸多胃癌患者在接受西医综合治疗的同时，也能够接受中医药辨证论治。目前，中医药治疗胃癌已经取得相当大的成就，在胃癌的治疗方面发挥出独特的优势。鸦胆子，别名老鸦胆、苦参子，为苦木科植物鸦胆子的干燥成熟果实，是一种中药植物。鸦胆子主要产于福建、台湾、广东、广西、海南和云南等省区；亚洲东南部至大洋洲北部也有分布。鸦胆子素D(BruceineD，BD)是从鸦胆子中分离提取出来的一种化合物。鸦胆子素被证实具有广泛的生物活性，如抗炎、抗疟、抗阿米巴原虫活性、抗肿瘤等作用。其抗肿瘤活性已成为国内外的一个研究热点。研究表明，鸦胆子素D对慢性粒细胞白血病、肝癌细胞、胰腺癌细胞、结直肠癌细胞和骨肉瘤细胞等均有不同程度的抑制作用。但其对胃癌的影响尚未有相关报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用，为胃癌的治疗提供了新的药物。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用。鸦胆子素D在制备抑制胃癌细胞生长速率的药物中的应用。鸦胆子素D在制备抑制胃癌细胞增殖的药物中的应用。鸦胆子素D在制备阻滞胃癌细胞周期在S期的药物中的应用。鸦胆子素D在制备抑制胃癌细胞体外克隆形成能力的药物中的应用。鸦胆子素D在制备抑制胃癌细胞体内成瘤能力的药物中的应用。本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次公开了鸦胆子素D可以用于治疗胃癌，通过抑制胃癌细胞生长、增殖、阻滞细胞周期在S期，抑制体外克隆形成和体内成瘤，本专利技术的实施拓宽了鸦胆子素D的医药用途，并为胃癌的治疗提供了新的药物，对胃癌临床治疗具有重要意义。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：图1为MTT法检测BD处理胃癌细胞生长速率结果(A：HGC；B：SGC7901；C：MKN45)；图2为BrdU实验检测BD胃癌细胞增殖速率的影响(A：HGC；B：SGC7901；C：MKN45)；图3为平板克隆实验验证BD对胃癌细胞增殖速率的影响；图4为流式周期胃癌细胞细胞周期阻滞于S期。图5为WB检测BD处理胃癌细胞细胞周期阻滞于S期。图6为软琼脂单克隆形成实验对胃癌细胞体外克隆形成能力。图7为小鼠成瘤实验检测BD对肿瘤生长的影响(A：BD处理对胃癌细胞成瘤图片；B：BD处理对胃癌细胞成瘤生长)。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。实施例1、BD对胃癌细胞的抑制作用将胃癌细胞HGC、SGC-7901和MKN-45培养于含10％的胎牛血清(FBS)的1640培养基中，所有细胞中都加入1％的青霉素和链霉素，待细胞生长密度达到80-90％时，加入0.2μM、0.4μM和0.8μM的BD处理胃癌细胞HGC7天，0.6μM、1.2μM和2.4μM的BD处理胃癌细胞SGC-79017天，0.6μM、1.2μM和2.4μM的BD处理胃癌细胞MKN-457天，同时以加入等量的DMSO作为对照，然后MTT法检测胃癌细胞生长情况。具体方法如下：细胞计数：(1)从细胞培养箱中拿出所需要的细胞，在超净工作台中进行操作，将培养皿中的培养基吸除，然后用温热的1×PBS清洗两次，最后吸除PBS。(2)向培养皿中加入1ml的胰酶，晃动培养皿将胰酶均匀覆盖到细胞上，然后放入37℃细胞培养箱。(3)在倒置显微镜下观察细胞是否消化完成，然后将培养皿放入超净工作台中操作，终止消化，用1ml的移液枪将细胞吹散，转移到5ml的离心管。(4)将消化好的细胞放入离心机中离心，转速为750rpm，离心5min。(5)吸走上清，然后加入2ml的新的培养基重悬细胞，吸10μl加到血球计数板上，在倒置显微镜下进行细胞计数。细胞铺板：(1)根据细胞计数的结果，将细胞稀释呈800cells/200μl。(2)用200μl移液枪将细胞悬液加到96孔板中，每孔200μl；铺7天的细胞，每天设置3个重复，隔一天测一次。OD值的测定：(1)向待测的孔中加入20μl的已经配制好的MTT，置于恒温培养细胞箱中，培养条件为37℃，5％CO2孵育2h。(2)吸干培养基，每孔加入150μlDMSO，后置于分光光度计中测量490nm处的吸光值，绘制生长曲线，结果如图1所示。结果显示，用含有0.2μM、0.4μM、0.6μM3种不同浓度鸦胆子素D的培养液培养HGC胃癌细胞，0.6μM、1.2μM、2.4μM3种不同浓度鸦胆子素D的培养液培养SGC7901和MKN45胃癌细胞，不同作用浓度及作用时间下胃癌细胞生长率。相同作用时间内随着鸦胆子素D物质的量浓度的升高，细胞的生长率下降。此外，胃癌细胞对BD浓度有依赖性，随着药物浓度的增加，细胞的生长率下降。结果表明，BD处理可以明显减慢胃癌细胞的生长速率。实施例2、BD对胃癌细胞增殖的影响取培养正常的HGC、SGC和MKN细胞，并取处于对数期的细胞进行分盘计数处理，按每孔10000cell计算，将细胞铺在24孔板细胞培养皿上，并使其能够均匀分布，加入500μl培养基，置于37℃，5％CO2培养箱过夜培养后，将相应浓度的鸦胆子素D加入细胞培养基中处理48小时；然后加入配好的BrdU溶液，使培养基中BrdU最终孵育浓度为10μg/ml，在含有5％CO2，37℃的恒温细胞培养箱培养45min；等到孵育时间到后，去除24孔板中培养基，然后用冰的1×PBS清洗三次；最后按200μl/孔4％多聚甲醛溶液加入培养板中，室温下让细胞固定30min；吸走4％多聚甲醛溶液，然后用1×PBS清洗3次并在摇床上轻轻晃动，每孔加上500μl的PBS，每次清洗5min；固定完后对细胞用现配的2M盐酸打孔，分别对每孔细胞加入200μl/孔2M的盐酸溶液，在37℃恒温生化培养箱中处理20min；用0.1M的四硼酸钠/硼酸进行中和，每个空加入500μl的四硼酸钠，放在水平摇床上缓慢摇晃清洗，重复一次；盐酸打孔后，去除盐酸溶液，然后用1×PBS在摇床上清洗3次，每次500μl/孔，每次清洗5min；接着用200μl/孔的0.1％Triton-100溶液对细胞进行处理，在室温下处理10min；用1×PBS进行清洗，每次5min，重复三次，并将24孔板放在水平摇床上进行清洗；随后用配制为10％山羊血清，按500μl/孔加入24板中，在室温封闭2h；将BrdU一抗按1:1000的浓度用10％的山羊血清稀释后，然后按500μl/孔加入24孔板中，并放置于4℃条件下孵育过夜；用1×PBS进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.鸦胆子素D在制备治疗胃癌的药物中的应用。2.鸦胆子素D在制备抑制胃癌细胞生长速率的药物中的应用。3.鸦胆子素D在制备抑制胃癌细胞增殖的药物中的应用。4.鸦胆子素D...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽群，李林，何荫良，董振，崔红娟，
申请(专利权)人：西南大学，富恩生物技术成都有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50