一种黄芪建中丸中十八种成分含量的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种黄芪建中丸中十八种成分含量的测定方法，包括以下步骤：用甲醇对黄芪建中丸进行超声提取，离心，取上清液后，采用超高效液相色谱串联质谱正负离子模式检测，采用18种成分的标准品制备混合标准品溶液建立标准曲线，进行方法学考察。本方法可以测定黄芪建中丸中十八种成分，即芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、肉桂酸、异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ和没食子酸；该方法样品前处理方法简单，时间短，检测方法专属性强、灵敏度高、重现性好、分析时间短，可用于黄芪建中丸的生产质量监控。

A Method for the Determination of Eighteen Components in Huangqi Jianzhong Pills

The invention provides a method for determining the content of eighteen components in Huangqi Jianzhong Pills, which includes the following steps: ultrasonic extraction of Huangqi Jianzhong Pills with methanol, centrifugation, extraction of supernatant, detection by positive and negative ion mode of ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, preparation of mixed standard solution by standard products of eighteen components, establishment of standard curve and methodological investigation. This method can be used for the determination of eighteen components in Huangqi Jianzhong Pills, i.e. mangiferin, mangiferin, pilose isoflavone, pilose isoflavone, rosanine, rosanin, isoflavane, isoglycyrrhizin, glycyrrhizin, glycyrrhetinic acid, cinnamic acid, isoflavanoside, astragaloside I, astragaloside II, astragaloside III, astragaloside IV and gallic acid. The pretreatment method is simple, the time is short, the detection method is specific, sensitive, reproducible and the analysis time is short. It can be used for the quality control of Huangqi Jianzhong pills.

【技术实现步骤摘要】
一种黄芪建中丸中十八种成分含量的测定方法
本专利技术涉及中药成分检测
，具体属于一种超高效液相色谱串联质谱法测定黄芪建中丸中18种成分的方法。
技术介绍
黄芪建中丸源自仲景经方黄芪建中汤，全方共由黄芪、肉桂、白芍、炙甘草和大枣五味药组成。临床上主要用于补气散寒，健胃和中。用于中气不足，心跳气短，恶寒腹痛和身体衰弱。现代药理研究表明，其在治疗脾虚导致的胃肠道疾病方面疗效确切；另外也有研究表明，黄芪建中丸还有镇静和解痉、降血糖、调节血液成分、调节免疫功能等作用。然而，现有的研究多集中在临床以及药理作用上，对其化学成分的研究较少。为了更好地研究黄芪建中丸，保证其生产质量和临床应用，急需提供对黄芪建中丸化学成分分析的方法。中药成分十分复杂，活性物质不明确、组分间含量差别大、药效机理检测难等问题加大了中药的质量控制难度。而且中药复方制剂是中药的主要用药形式，由多味中药材配伍组成，成分更加复杂。此外，中药的药效是多种组分共同作用的结果，具有复杂的多组分多靶点的特点。近年来，基于质谱的联用技术得到了迅猛发展，尤其是超髙效液相色谱串联质谱。超高效液相色谱串联质谱具有高分离效能、高通量、高灵敏度和特异性强的特点，且受基质干扰小使样品预处理过程简单化，分析速度快。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种超高效液相色谱串联质谱法测定黄芪建中丸中18种成分的方法，该方法灵敏度高、重现性好，分析准确、可靠，可满足同时定量检测黄芪建中丸中18种化学成分(芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、肉桂酸、异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ和没食子酸)。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种超高效液相色谱串联质谱测定黄芪建中丸中18种成分的方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备精密称取黄芪建中丸冻干粉末0.25g、1.5g各一份于离心管中，加入甲醇1mL，涡旋1min混匀，进行超声处理20min，13000r/min的条件下离心15min，取上清，即得供试品溶液1号和2号，分别用于超高效液相色谱串联质谱正、负离子模式分析；(2)对照品溶液的制备：取芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、肉桂酸、异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ和没食子酸对照品精密称定，分别置5mL容量瓶中，加入甲醇定容，制成浓度分别为0.218mg/mL、0.192mg/mL、0.27mg/mL、0.312mg/mL、0.256mg/mL、0.312mg/mL、0.228mg/mL、0.21mg/mL、0.2mg/mL、0.626mg/mL、0.27mg/mL、0.274mg/mL、0.312mg/mL、1.074mg/mL、0.306mg/mL、0.282mg/mL、0.382mg/mL和1.072mg/mL的对照品溶液。(3)混合标准品溶液的制备：分别吸取适量体积的十八种成分的对照品溶液于两个10mL容量瓶中，定容，得到芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸和肉桂酸组成的终浓度为13.08μg/ml、1.536μg/ml、10.53μg/ml、85.59μg/ml、1.024μg/ml、9.984μg/ml、9.12μg/ml、8.4μg/ml、8μg/ml、25.04μg/ml、43.84μg/ml、6.48μg/ml的混合标准溶液A。异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ和没食子酸组成的终浓度为356.976μg/ml、18.72μg/ml、71.958μg/ml、20.502μg/ml、3.666μg/ml和48.51μg/ml的混合标准品溶液B；(4)将混合标准品溶液A和B分别稀释至终浓度为80％、66％、33％、12.5％、5％、2％的系列浓度，采用超高效液相色谱串联质谱检测，其中混合标准品溶液A在正离子模式下分析，混合标准品溶液B在负离子模式下分析，并分别绘制标准曲线；所述液相色谱条件：色谱柱：WatersACQUITYUPLCHSST3液相色谱柱，规格：2.1mm×100mm，1.8μm；柱温：45℃；流动相：乙腈和0.2％甲酸水溶液；分析时间25min；所述质谱条件：采用MRM多反应监测模式、ESI离子源，离子源温度400℃，质量范围：M/Z50-1500，喷雾电压：3.5千伏(+)、3.5千伏(－)，鞘气体体积：35，辅助体积：10，毛细管温度：320℃，透镜电压：55千帕，质量分辨率：70000；(5)取步骤(1)配置的1号和2号供试品溶液，采用步骤(4)中所述液相色谱条件和质谱条件，进行质谱正、负离子模式分析，再根据标准曲线即可得到供试品黄芪建中丸中十八种成分含量。本专利技术所建立的一种超高效液相色谱串联质谱测定黄芪建中丸中十八种成分的方法与现有技术相比具有如下优点和效果：1.样本前处理简单、快捷，重现性好；2.分析时间短，不超23分钟；3.分离度较好，可准确测定十八种成分的含量。该方法可用于黄芪建中丸的生产质量监控。附图说明图1样品溶液的质谱总离子流图(上：正离子；下：负离子)具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细、完整的说明。实施例中使用到的仪器和试剂如下：仪器：Agilent1290超高效液相色谱仪(Agilent公司)，3200QTrap质谱仪(ABSciex公司)超声波清洗器(KQ5200E，昆山市超声仪器有限公司)，色谱柱WatersACQUITYUPLCHSST3(2.1mm×100mm，1.8μm)。试剂：乙腈(色谱纯，Fisher公司)、甲醇(色谱纯，Fisher公司)、超纯水、甲酸(色谱纯，Fisher公司)，其余试剂均为分析纯。(1)供试品溶液的制备：取黄芪建中丸，加液氮迅速研磨至粉末，精密称取0.25g、1.5g各一份于离心管中，加入甲醇1mL，涡旋1min混匀，进行超声处理20min，13000r/min的条件下离心15min，取上清，既得供试品溶液1号和2号，分别用于质谱正、负离子模式分析；(2)对照品溶液的制备：取芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、肉桂酸、没食子酸、异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪皂苷Ⅳ对照品精密称定，置5mL容量瓶中，加入甲醇定容，制成浓度分别为0.218mg/mL、0.192mg/mL、0.27mg/mL、0.312mg/mL、0.256mg/mL、0.312mg/mL、0.228mg/mL、0.21mg/mL、0.2mg/mL、0.626mg/mL、0.27mg/mL、0.274mg/mL、1.072mg/mL、0.312mg/mL、1.074mg/mL、0.306mg/mL、0.282mg/mL和0.382mg/mL的对照品溶液。(3)混合标准品溶液的制备：分别吸取适量体积的十八种成分的对照品溶液于两个10mL容量瓶中，定容，得到芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种超高效液相色谱串联质谱法测定黄芪建中丸中18种成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取黄芪建中丸，加液氮迅速研磨至粉末，精密称取0.25g、1.5g各一份于离心管中，加入甲醇1mL，涡旋1min混匀，进行超声处理20min，13000r/min的条件下离心15min，取上清，即得供试品溶液1号和2号；(2)对照品溶液的制备：取芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、肉桂酸、异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ和没食子酸对照品精密称定，分别置5mL容量瓶中，加入甲醇定容，制成浓度分别为0.218mg/mL、0.192mg/mL、0.27mg/mL、0.312mg/mL、0.256mg/mL、0.312mg/mL、0.228mg/mL、0.21mg/mL、0.2mg/mL、0.626mg/mL、0.27mg/mL、0.274mg/mL、0.312mg/mL、1.074mg/mL、0.306mg/mL、0.282mg/mL、0.382mg/mL和1.072mg/mL的对照品溶液。(3)混合标准品溶液的制备：取芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸和肉桂酸这12种成分的对照品溶液适量，制备混合标准品溶液A。取异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ和没食子酸这6种成分的对照品溶液适量，制备混合标准品溶液B；(4)将混合标准品溶液A和B分别稀释成系列浓度，采用超高效液相色谱串联质谱检测，其中混合标准品溶液A在正离子下分析，混合标准品溶液B负离子模式下分析，分别绘制标准曲线；所述液相色谱条件如下：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱，规格：2.1mm×100mm，1.8μm；柱温：45℃；流动相：乙腈和0.2％甲酸水溶液；分析时间25min；所述质谱条件如下：采用MRM多反应监测模式、ESI离子源，离子源温度400℃，质量范围：M/Z50‑1500，喷雾电压：3.5千伏(+)、3.5千伏(－)，鞘气体体积：35，辅助体积：10，毛细管温度：320℃，透镜电压：55千帕，质量分辨率：70000；(5)取步骤(1)配置的1号和2号供试品溶液，采用步骤(4)中所述液相色谱条件和质谱条件，进行质谱正、负离子模式分析，再根据标准曲线即可得到供试品黄芪建中丸中十八种成分含量。...

【技术特征摘要】
1.一种超高效液相色谱串联质谱法测定黄芪建中丸中18种成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取黄芪建中丸，加液氮迅速研磨至粉末，精密称取0.25g、1.5g各一份于离心管中，加入甲醇1mL，涡旋1min混匀，进行超声处理20min，13000r/min的条件下离心15min，取上清，即得供试品溶液1号和2号；(2)对照品溶液的制备：取芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、异甘草苷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、肉桂酸、异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅳ和没食子酸对照品精密称定，分别置5mL容量瓶中，加入甲醇定容，制成浓度分别为0.218mg/mL、0.192mg/mL、0.27mg/mL、0.312mg/mL、0.256mg/mL、0.312mg/mL、0.228mg/mL、0.21mg/mL、0.2mg/mL、0.626mg/mL、0.27mg/mL、0.274mg/mL、0.312mg/mL、1.074mg/mL、0.306mg/mL、0.282mg/mL、0.382mg/mL和1.072mg/mL的对照品溶液。(3)混合标准品溶液的制备：取芒柄花苷、芒柄花素、...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘月涛，贾璐，秦雪梅，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14