本发明专利技术是一种源自海洋的多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)BMF02菌株，其保藏号为：CCTCC NO：M 2017154。本发明专利技术还公开了利用多粘类芽孢杆菌BMF02菌株制备可湿性粉剂的方法与用途。本发明专利技术菌株发酵温度低，发酵时间短，发酵条件易于控制。用该菌株制得的可湿性粉剂具有很好的防治甜瓜枯萎病的作用，可以用于甜瓜的种植。本发明专利技术方法制备的海洋多黏类芽孢杆菌BMF02菌株可湿性粉剂，对甜瓜枯萎病的田间综合防效高达84.9％，高于3％的多抗霉素。使用该菌剂后，甜瓜产量得到了较大的提高。
Preparation and application of Bacillus polymyxa BMF02 and its wettable powder
The present invention is a BMF02 strain of Paenibacillus polymyxa originating from the sea, and its preservation number is CCTCC NO: M 2017154. The invention also discloses a method and application of preparing wettable powder by using Bacillus polymyxa BMF02 strain. The fermentation temperature of the strain is low, the fermentation time is short, and the fermentation conditions are easy to control. The wettable powder prepared by this strain has good control effect on Melon Fusarium Wilt and can be used for melon cultivation. The wettable powder of Bacillus polymyxa BMF02 strain prepared by the method of the invention has a comprehensive field control effect of 84.9% against Melon Fusarium wilt, which is higher than 3% of polyantimycin. After using the fungicide, the yield of melon was greatly increased.
【技术实现步骤摘要】
多粘类芽孢杆菌BMF02及其可湿性粉剂的制备方法与用途
本专利技术涉及一种源自海洋的菌株，特别是一种多粘类芽孢杆菌BMF02菌株，本专利技术还涉及利用该多粘类芽孢杆菌BMF02菌株制备可湿性粉剂的方法和用途。
技术介绍
甜瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌甜瓜转化型(Fusariumoxysporumf.sp.melonis)侵染引起的一种土传病害，严重影响甜瓜的产量和品质，造成经济损失。目前甜瓜枯萎病的防治主要依赖化学农药，但化学防治会导致一系列的问题，如食品中农药残留超标、环境污染和病原菌产生抗药性等。因此，研制新型高效、环保、安全的微生物制剂成为了防治植物病害的研究热点。多黏类芽孢杆菌(PaenibaciLLus.poLymyxa)是一种广范存在的重要微生物资源，其中很多菌株作为重要的生防资源，用于多种植物病害的生物防治，该菌对人畜安全、无环境污染、对植物非致病性，具有显著的生防潜力和环境适应性，在生产过程中活菌量高且产品稳定性强，是目前进行微生物农药规模化生产的理想菌属。多个学者分离得到的多黏类芽孢杆菌对番茄灰霉病、黄瓜枯萎病和辣椒疫病等植物病害具有一定的防治效果。美国环境保护署(EPA)将多黏类芽孢杆菌列为可商业上应用的微生物种类之一。近年来有关防治植物病害的微生物制剂研究报道日益增加。李磊等通过室内筛选和田间试验，确定解淀粉芽孢杆菌Ht-q6可湿性粉剂的最佳配方以及对番茄叶霉病和灰霉病的田间防效。贾海民等研究了微生物杀菌剂“10亿芽孢/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂”不同施用量(0.5g/穴、1.0g/穴和1.5g/穴)对番茄重茬病的防治效果及其对番茄产量的影响。结果表明：施用微生物杀菌剂0.5～1.5g/穴能够有效控制番茄重茬病的发生，防效为59.1％～98.9％，且能够显著增强番茄的生长势，提高番茄果实产量和品质。徐玲等通过室内盆栽实验结果表明，HY96-2的生防制剂KDLD对番茄青枯病的防治效果可达81.5％。目前，国内外对于甜瓜防治的生物防治主要是利用陆源微生物进行防治，而采用海洋微生物防治的报道较少。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种源自海洋的耐盐、培养温度低、营养简单的新的多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)BMF02菌株CCTCCNO：M2017154。本专利技术所要解决的另一个术问题，供述了利用多粘类芽孢杆菌BMF02菌株制备可湿性粉剂的方法。本专利技术所要解决的再一个技术问题是提供了可湿性粉剂防治甜瓜枯萎病的用途。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)BMF02菌株，其特点是，其保藏号为：CCTCCNO：M2017154。本专利技术所涉及的多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)BMF02菌株，已于2017年4月10日保藏在中国典型培养物保藏中心(ChinaCenterforTypeCultureCollection)CCTCC，其保藏号为：CCTCCNO：M2017154，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学第一附小对面)，武汉大学保藏中心，邮编：430072；电话：027-68752319。本专利技术还公开了多粘类芽孢杆菌BMF02菌株的产芽孢发酵培养方法，其特点是，其步骤如下：(1)将BMF02菌株接种到PDA培养基上活化24h，在无菌条件下用接种环挑取BMF02菌株于装有60mL种子液培养基的250mL三角瓶中，28℃，180r/min振荡培养16h；调整菌液浓度为108个细胞/mL，作发酵用种子液；所述种子液培养基为PD培养基；(2)将种子液按接种量为5％-10％接种于装有发酵培养基的发酵罐进行产芽孢发酵培养，搅拌速度为180r/min，在0～12h时通气量为15m3/h，12h后通气量调整为32m3/h，28℃，发酵时间为24h，得发酵液；发酵培养基配方为：葡萄糖0.24％，豆饼粉0.96％，玉米粉1.68％，硫酸镁0.36％，初始pH7.0。本专利技术还公开了利用多粘类芽孢杆菌BMF02菌株制备可湿性粉剂的方法，其特点是，其步骤如下：(1)将多粘类芽孢杆菌BMF02菌株在发酵罐中进行发酵培养，得到的发酵液用皂土为载体，增加絮凝剂进行吸附，板框过滤后，得到菌饼，干燥后得到BMF02菌粉；(2)向BMF02菌粉，按以下质量百分比向BMF02菌粉中加入助剂：BMF02菌粉70％，稳定剂海藻酸钠14％，湿润剂蔗糖脂肪酸酯8％，分散剂聚乙烯醇8％；混合均匀，粉碎后过300目筛，得到BMF02菌株可湿性粉剂。以上所述的方法中，所述的絮凝剂优选为氯化钙和磷酸氢二钠的组合物，二者占为发酵液体积7％。优选二者的比例为氯化钙占组合物的45％。本专利技术所述的方法所制得的BMF02菌株可湿性粉剂作为有效成份可以用来制造防治甜瓜枯萎病的药物或者药物组合物。以下是专利技术所做的相关的实验及其结果。1材料与方法1.1供试菌种海洋多黏类芽孢杆菌(PaenibaciLLus.poLymyxa)菌株BMF02,保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2017154。1.2培养基菌株活化培养基：PDA培养基；种子液培养基：PD培养基。1.3载体和助剂载体：膨润土、皂土、高岭土、碳酸氢钙、活性白土、硅藻土、凹凸棒土；稳定剂：荧光素钠、硬脂酸锌、腐植酸、黄原胶、海藻酸钠、硬脂酸钙；湿润剂：脂肪醇聚氧乙烯醚25、蔗糖脂肪酸酯、吐温80、乙氧基化烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、木质素磺酸钠；分散剂：聚乙烯醇、羧甲基纤维素纳；展着剂：柱层层析硅胶、薄层层析硅胶。1.4种子液制备将BMF02菌株接种到PDA培养基上活化24h，在无菌条件下用接种环挑取BMF02菌株于装有60mL种子液培养基的250mL三角瓶中，28℃，180r/min振荡培养16h；调整菌液浓度为108个细胞/mL，作发酵用种子液。1.5可湿性粉剂载体和助剂的筛选1.5.1不同载体和助剂与BMF02菌株生物相容性的测定将制备好的种子液取6mL分别接入装有60mL含4％载体和助剂的PD培养基的250mL的三角瓶中，在28℃，180r/min的条件下培养24h，用稀释涂布计数法检测培养液中的含菌量。每个处理3个重复。根据活菌数量判断不同载体和助剂与BMF02菌株的生物相容性。1.5.2可湿性粉剂载体和助剂种类的筛选载体对BMF02菌株吸附量的测定，分别向100mL的烧杯中加入各种载体各2g。将BMF02菌株的发酵液向烧杯中的载体缓慢滴加，滴加的同时用玻璃棒搅拌。当载体粉末开始凝结成团且不散开时，停止向其中继续滴加发酵液。记录滴加到载体中的发酵液的量。每种载体3个重复。载体和助剂悬浮率测定采用国家标准农药可湿性粉剂悬浮率测定方法。载体和助剂润湿性采用国家标准农药可湿性粉剂润湿时间测定方法。1.5.3可湿性粉剂加工载体与助剂配比及用量筛选筛选出的稳定剂与BMF02菌株的新鲜干粉按1:5、1:10、1:20的质量比混合均匀。分别在放置5d、10d、15d时称取不同配比的试样测定活菌数。确定稳定剂的配比。将筛选出的最佳湿润剂、分散剂和展着剂按不同的比例混合，粉碎机混合均匀后过325目筛，测定本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)BMF02菌株，其特征在于，其保藏号为：CCTCC NO：M 2017154。
【技术特征摘要】
1.一种多黏类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)BMF02菌株，其特征在于，其保藏号为：CCTCCNO：M2017154。2.权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌BMF02菌株的产芽孢发酵培养方法，其特征在于，其步骤如下：(1)将BMF02菌株接种到PDA培养基上活化24h，在无菌条件下用接种环挑取BMF02菌株于装有60mL种子液培养基的250mL三角瓶中，28℃，180r/min振荡培养16h；调整菌液浓度为108个细胞/mL，作发酵用种子液；所述种子液培养基为PD培养基；(2)将种子液按接种量为5％-10％接种于装有发酵培养基的发酵罐进行产芽孢发酵培养，搅拌速度为180r/min，在0～12h时通气量为15m3/h，12h后通气量调整为32m3/h，发酵时间为24h，得发酵液；发酵培养基配方为：葡萄糖0.24％，豆饼粉0....
【专利技术属性】
技术研发人员：陈茹，吴海霞，彭云，李欢，陈新元，曹雪梅，王亚楠，陈莹莹，汤曼利，马桂珍，暴增海，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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