一种改良注射混合液制备及使用方法技术

本发明专利技术属于注射液技术领域，公开了一种改良注射混合液制备及使用方法。改良的注射混合液按比例由转染脂质体载体、外源质粒和外源miRNAs溶液组成；制备方法包括：将构建的外源质粒使用灭菌的ddH2O稀释浓度为500ng/μL；其次将定制的miRNAs使用灭菌的ddH2O稀释浓度为20pmoL/μL；然后准备转染脂质体载体；并按照转染脂质体载体：Sox9a外源质粒：外源miRNA(可为一种或多种混合物)＝2:1:1的比例配置混合液2～4μL。使用方法采用性腺体外显微注射结合电转染。本发明专利技术通过向原有的混合液中添加不同比例和不同种类的外源miRNAs，能够控制6个月斑马鱼精巢和卵巢的分化以及成鱼性腺再生。

An improved method for preparation and application of injection mixture

The invention belongs to the technical field of injection, and discloses a method for preparing and using an improved injection mixture. The improved injection mixtures consist of transfected liposome carrier, exogenous plasmid and exogenous microRNAs solution in proportion. The preparation methods include: diluting the constructed exogenous plasmid with sterilized ddH 2 at 500 ng/muL; secondly, diluting the customized microNAs with sterilized ddH 2 at 20 pmoL/muL; then preparing the transfected liposome carrier; and according to the transfected liposome carrier: Sox9a exogenous plasmid Granule: Mixture of exogenous microRNAs (for one or more mixtures) = 2:1:1 with a mixture of 2-4 ml. Methods The gonads were microinjected in vitro and electrotransfected. By adding different proportion and different kinds of exogenous microRNAs to the original mixture solution, the invention can control the differentiation of zebrafish testis and ovary and the regeneration of adult gonads for six months.

【技术实现步骤摘要】
一种改良注射混合液制备及使用方法
本专利技术属于注射液
，尤其涉及一种改良注射混合液制备及使用方法。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：过去十年之间，斑马鱼作为多种实验的载体已经成为一种具有很高研究价值的模型，斑马鱼在进化上更趋近于哺乳动物，和一些哺乳动物比如人类和小鼠具有同源基因。斑马鱼类在性别分化的过程中展现出一定的可塑性，同时有着很强的调节机制。miRNAs和FSH/cAMP/MAPK/Sox9信号通路可以调节脊椎动物性腺的发育和性别分化，然而具体的调控网络不清晰，通过一种斑马鱼体外投影注射技术，可以通过外源注射基因对斑马鱼的性腺分化进行调控。目前已知向6个月的雄性斑马鱼外源注射Sox9a外源基因只会增加精巢中精子的密度，减少精母细胞的数量。这种简单的注射方法存在了功能性单一，使用范围局限的缺点。促进性腺增生，特别是卵泡再生的报道不多。综上所述，现有技术存在的问题是：每次注射的外源基因单一，只能够向某个方向定向调控斑马鱼精巢的分化情况。注射单种外源基因时，斑马鱼精巢分化的程度低，效果不显著。还没有很好方法促进卵泡新生。解决上述技术问题的意义：本专利技术提供了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改良注射混合液，其特征在于，所述改良注射混合液由转染脂质体载体、外源质粒和外源miRNAs溶液组成；按质量比例转染脂质体载体：Sox9a/b外源质粒：外源miRNAs溶液＝＝2:1:1；所述外源miRNAs溶液为外源miR141、外源miR‑734、外源miR430a、外源miR218a中的一种或多种混合物。

【技术特征摘要】
1.一种改良注射混合液，其特征在于，所述改良注射混合液由转染脂质体载体、外源质粒和外源miRNAs溶液组成；按质量比例转染脂质体载体：Sox9a/b外源质粒：外源miRNAs溶液＝＝2:1:1；所述外源miRNAs溶液为外源miR141、外源miR-734、外源miR430a、外源miR218a中的一种或多种混合物。2.如权利要求1所述的改良注射混合液，其特征在于，Sox9a+miR430a组合促进精母细胞增生的改良注射混合液按照质量比例转染脂质体载体：Sox9a外源质粒：外源miR430a＝2:1:1的比例配置。3.如权利要求1所述的改良注射混合液，其特征在于，Sox9a+miR141+miR734组合促进类卵巢向精巢转化的改良注射混合液按照质量比例转染脂质体载体：Sox9a外源质粒：外源miR141：外源miR-734＝4:2:1:1的比例配置。4.如权利要求1所述的改良注射混合液，其特征在于，Sox9b+miR218a组合促进初级卵泡增生的改良注射混合液按照质量比例转染脂质体载体：Sox9b外源质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：严继舟，杜新路，郭会萍，王成辉，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31