本发明专利技术提供了一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基及其使用方法，属于微生物培养基技术领域。所述培养基的组分包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖、N‑乙酰葡糖胺、氯化钠和磷酸氢二钠。采用本发明专利技术的培养基能够培养得到嗜黏蛋白阿克曼氏菌功能性研究所需的菌量，培养基的组分来源安全，不存在潜在的生物危险。
A Culture Medium for Mucinophilic Ackermania and Its Application
The invention provides a culture medium for culturing mucophilic Ackermania and a method for its use, which belongs to the technical field of microbial culture medium. The components of the culture medium include soybean peptone, threonine, glucose, N acetylglucosamine, sodium chloride and disodium hydrogen phosphate. The culture medium of the invention can cultivate the amount of bacteria needed for functional research of Ackermania mucophilica, and the component source of the culture medium is safe, and there is no potential biological hazard.
【技术实现步骤摘要】
一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基及其使用方法
本专利技术属于微生物培养基
，尤其涉及一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基及其使用方法。
技术介绍
肥胖及其相关的代谢性疾病如糖尿病和心血管疾病已经对公众健康造成重大威胁。我国的形势尤为严峻，现有1亿多糖尿病病人，同时有近5亿人群处于糖尿病前期。因此，研究预防和治疗这类疾病的措施显得尤为重要。肠道菌群与人类健康密切相关，肥胖和胰岛素抵抗是代谢性疾病早期的两个重要特征，肠道菌群在代谢性疾病的发生和进展中起重要作用。肠道菌群的改变，炎症和肠道屏障功能破坏是肥胖和2型糖尿病的重要特征。现有的研究主要集中在分类学上的属、科甚至门水平，精确到种水平和菌株水平的研究较少。研究人体肠道中各种菌株与代谢性疾病的关系，可以发现具有预测和诊断价值的生物标志物，并为进行有效干预提供新靶点。现有的研究表明，肠道共生菌Akkermansiamuciniphila可能就是一种这样的功能菌。嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansiamuciniphila是目前疣微菌门中第一种被分离的肠道厌氧菌，于2004年分离成功。最新研究发现，Akkermansia属的Akkermansiamuciniphila(以下简称Akk)可能是衡量肠道微生态是否平衡的重要标志微生物之一。Akk为具有调节血糖稳态等特性的功能菌，在健康人肠道中广泛存在。它具有降解黏蛋白的特性，是生活在宿主肠黏膜黏液表面中的一种重要微生物。因Akk所具有的这些代谢改善的作用，很多学者都将其称为下一代益生菌。考虑到Akk作为一种新型候选益生菌，以其为主要成分的微生物制剂必定具有广大的发展前景和推广市场，甚至目前国外已经有进行Akk人体试食的实验研究。但是，在实现Akk的市场应用之前，还有许多问题需要解决。Akk合成培养基的优化就是这样一个必需而且至关重要的内容。目前国内外对于Akk的培养大都依赖于由牛脑心浸液琼脂干粉和猪胃黏蛋白配制而成的培养基。虽然培养的效果尚可，但是成本较高，而且脑心浸液琼脂干粉和黏蛋白都来自于动物，可能会携带未知的病毒和其他危险成分，这种来源的培养基成分的安全性无法得到充分保障。已经有文献报道(PlovierH,EverardA,DruartC,etal.ApurifiedmembraneproteinfromAkkermansiamuciniphilaorthepasteurizedbacteriumimprovesmetabolisminobeseanddiabeticmice.[J].NatureMedicine,2016,23(1):107.)的Akk合成培养基成分包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖和N-乙酰葡糖胺。但是用该文献报道的培养基进行Akk的扩增培养，均未获得成功，不能够培养得到Akk菌。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基及其使用方法，采用本专利技术提供的培养基能够培养得到嗜黏蛋白阿克曼氏菌，而且培养得到的菌量能够满足功能性研究的所需。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基，所述培养基的组分包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖、N-乙酰葡糖胺、氯化钠和磷酸氢二钠。优选的，所述培养基以水为溶剂，每升包括：20～45mmol葡萄糖、12～32g大豆蛋白胨、3～8g苏氨酸、20～35mmolN-乙酰葡糖胺、4～6g氯化钠和2～3.5g磷酸氢二钠。优选的，所述培养基以水为溶剂，每升包括：25～40mmol葡萄糖、16～28g大豆蛋白胨、4～7g苏氨酸、25～30mmolN-乙酰葡糖胺、4.5～5.5g氯化钠和2.5～3g磷酸氢二钠。优选的，所述培养基以水为溶剂，每升包括：30～35mmol葡萄糖、20～24g大豆蛋白胨、5～6g苏氨酸、35mmolN-乙酰葡糖胺、5g氯化钠和2.6～2.8g磷酸氢二钠。本专利技术还提供了上述技术方案所述的培养基的使用方法，包括：将所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌液接种于上述技术方案所述的培养基中，进行厌氧培养。优选的，所述厌氧培养使用的仪器包括厌氧箱，所述厌氧箱中包括85％CO2、10％N2和5％H2。优选的，所述菌液中嗜黏蛋白阿克曼氏菌的含量为2.6×108cfu/mL。优选的，所述菌液的接种量为100μL/200μL。优选的，所述厌氧培养的温度为35～40℃。优选的，所述厌氧培养的时间为3～4d。本专利技术提供了一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基，所述培养基的组分包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖、N-乙酰葡糖胺、氯化钠和磷酸氢二钠。现有技术中的培养基中含有大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖和N-乙酰葡糖胺，不能够培养得到嗜黏蛋白阿克曼氏菌，本专利技术在现有的基础上添加了氯化钠和磷酸氢二钠，解决了现有培养基中缺少缓冲物质导致嗜黏蛋白阿克曼氏菌无法生长的弊端，添加氯化钠和磷酸氢二钠后，能够使嗜黏蛋白阿克曼氏菌正常生长，能够得到进行该菌的功能性研究时所需的菌量。附图说明图1为嗜黏蛋白阿克曼氏菌的镜下形态结果；图2为嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌落形态和纯度结果；图3为嗜黏蛋白阿克曼氏菌的扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后的成像结果；图4为等体积的黏蛋白培养基和本专利技术提供的培养基在接种等量Akk后在相同环境中培养相同时间后，取出离心所得到的细菌沉淀图，其中左边的离心管为黏蛋白培养基培养得到的结果，右边的离心管为本专利技术的培养基培养得到的结果；图5为等体积的黏蛋白培养基和本专利技术提供的培养基在接种等量Akk后在相同环境中培养相同时间后，经离心后使用等体积的无菌PBS重悬，对菌液进行活菌染色并计数的图，其中，左上为未经接种的本专利技术培养基作为阴性对照，右上为Akk在本专利技术的培养基中培养后进行的活菌染色，左下为未经接种的黏蛋白培养基作为阴性对照，右下为Akk在黏蛋白培养基中培养后进行的活菌染色。具体实施方式本专利技术提供了一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基，所述培养基的组分包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖、N-乙酰葡糖胺、氯化钠和磷酸氢二钠。在本专利技术中，所述培养基以水为溶剂，每升优选包括：20～45mmol葡萄糖、12～32g大豆蛋白胨、3～8g苏氨酸、20～35mmolN-乙酰葡糖胺、4～6g氯化钠和2～3.5g磷酸氢二钠；可选的包括：25～40mmol葡萄糖、16～28g大豆蛋白胨、4～7g苏氨酸、25～30mmolN-乙酰葡糖胺、4.5～5.5g氯化钠和2.5～3g磷酸氢二钠；可选的包括：30～35mmol葡萄糖、20～24g大豆蛋白胨、5～6g苏氨酸、35mmolN-乙酰葡糖胺、5g氯化钠和2.6～2.8g磷酸氢二钠。在本专利技术中，所述氯化钠和磷酸氢二钠作为培养基的缓冲物质，解决了在含有大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖和N-乙酰葡糖胺的培养基中不能够得到嗜黏蛋白阿克曼氏菌的弊端，能够得到该菌。在本专利技术中，当所述每升培养基中的氯化钠的浓度高于6g时，不利于嗜黏蛋白阿克曼氏菌的生长。本专利技术还提供了上述技术方案所述的培养基的使用方法，包括：将所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌液接种于上述技术方案所述的培养基中，进行厌氧培养。在本专利技术中，所述厌氧培养优选在85％CO2、10％N2和5％H2下进行，所述厌氧培养使用的仪器优选为厌氧箱。在本专利技术中，所述厌本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基，所述培养基的组分包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖和N‑乙酰葡糖胺，其特征在于，还包括氯化钠和磷酸氢二钠。
【技术特征摘要】
1.一种培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌的培养基，所述培养基的组分包括大豆蛋白胨、苏氨酸、葡萄糖和N-乙酰葡糖胺，其特征在于，还包括氯化钠和磷酸氢二钠。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基以水为溶剂，每升包括：20～45mmol葡萄糖、12～32g大豆蛋白胨、3～8g苏氨酸、20～35mmolN-乙酰葡糖胺、4～6g氯化钠和2～3.5g磷酸氢二钠。3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述培养基以水为溶剂，每升包括：25～40mmol葡萄糖、16～28g大豆蛋白胨、4～7g苏氨酸、25～30mmolN-乙酰葡糖胺、4.5～5.5g氯化钠和2.5～3g磷酸氢二钠。4.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述培养基以水为溶剂，每升包括：30～35mmol葡萄糖、20～24g大豆蛋白胨、5～...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭永正，邓露露，易江丰，
申请(专利权)人：广州康泽医疗科技有限公司，彭永正，
类型：发明
国别省市：广东,44
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