用于预测放射治疗后发生乳房晚期效应的风险的体外方法技术

本发明专利技术涉及一种新的诊断方法和计算器，其通过使用放射诱导的晚期效应使用T淋巴细胞凋亡(RILA)和临床参数来用于预测在放射治疗(RT)后受试者中发生乳房晚期效应(BLE)的风险，所述乳房晚期效应被定义为萎缩性皮肤、毛细血管扩张、硬结(纤维化)、坏死或溃疡。本发明专利技术还涉及用于实施该方法的诊断试剂盒和列线图。

An in vitro method for predicting the risk of late breast effects after radiotherapy

The present invention relates to a new diagnostic method and calculator, which uses T lymphocyte apoptosis (RILA) and clinical parameters to predict the risk of late breast effect (BLE) in subjects after radiotherapy (RT), defined as atrophic skin, telangiectasia, sclerosis (fibrosis), necrosis or ulcer. The invention also relates to a diagnostic kit and a line diagram for implementing the method.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预测放射治疗后发生乳房晚期效应的风险的体外方法
本专利技术涉及一种新的诊断方法和计算器，其通过使用放射诱导的晚期效应使用T淋巴细胞凋亡(RILA)和临床参数来用于预测在放射治疗(RT)后受试者中发生乳房晚期效应(BLE)的风险，所述乳房晚期效应被定义为萎缩性皮肤、毛细血管扩张、硬结(纤维化)、坏死或溃疡。本专利技术还涉及用于实施该方法的诊断试剂盒和列线图(nomogram)。
技术介绍
治疗目的RT后严重但也适度的毒性，例如乳癌后的不良美容结果，可对生活质量产生负面影响，并对随后的心理结果产生显著影响(Al-Ghazal，Fallowfield等人，1999)。已知许多因素会增加放射毒性的风险，包括内在放射敏感性(Azria，Betz等人，2012)。虽然已知患者群体的毒性风险，但是在治疗前很难确定个体的正常组织放射敏感性。因此，目前的实践标准通常根据标准建议的临床情况规定放射剂量，而不考虑被照射个体的基因型或表型。在这方面，Azria等人(Azria，Riou等人，2015)显示基于RILA的流式细胞术评估的放射敏感性测定可以显著地预测个体之间乳纤维化的差异，并且可以用作对RT潜在的高反应性患者的快速筛查。在高RILA值和小于≥2级(lessgrade≥2)乳纤维化的情况下发现阴性预测值(Ozsahin，Crompton等人，2005)。此外，在低RILA值的患者中观察到所有严重的乳纤维化(≥2级)。进一步，这些结果用多中心试验证实，显示在高RILA值和小于≥2级乳纤维化的情况下阴性预测值为91％(Azria，Riou等人，2015)。然而，基于RILA的这种放射敏感性测定的预测在灵敏度和可靠性方面表现出一些限制。单独考虑，RILA在灵敏度和特异性方面不具备高预测能力。因此，迫切需要开发一种诊断预测在RT后发生BLE的风险的具有增强的灵敏度和可靠性的方法。Azria等人2015年的出版物在一项前瞻性多中心试验中评估了RILA作为辅助乳放射治疗后乳纤维化的独立预测因子的作用。但在多变量分析中，急性效应与RILA或其他临床相关参数之间未发现相关性。特别地，如该现有技术中所公开的，对纤维化和复发的多变量回归分析中，吸烟参数是不显著的。本专利技术现在提供了一种用于预测发生乳房晚期效应(BLE)的概率的新诊断方法，其中RILA与临床参数组合，特别是与吸烟习惯和辅助激素疗法组合，具有改善的对患者发生BLE风险的全局评估。如在说明性实施例中进一步公开所示，20％患有RILA(放射诱导的CD8T-淋巴细胞凋亡)而没有任何其他组合临床参数的患者是被认为在3年时没有任何BLE或复发风险的患者(BLE风险约为2-3％)，而使用根据本专利技术的新的体外诊断方法，组合RILA和临床参数特别是吸烟习惯和辅助激素疗法，发生BLE的风险主要为16％。对于12％患有RILA(BLE风险约为5％)而没有任何其他组合临床参数的患者，当与吸烟临床参数组合时，BLE的风险将主要为8％，甚至当与吸烟和辅助激素疗法组合时，BLE的风险将主要为22％。这些数据显示了根据本专利技术的组合方法的兴趣和效率，以优化对患者的BLE风险的全局评估。
技术实现思路
本专利技术涉及一种用于诊断受试者放射治疗后发生乳房晚期效应(BLE)的风险的体外方法，其包括以下步骤：a、从所述受试者的生物样品中确定至少一种生化标记物的值；b、确定至少两个临床参数的水平；c、通过多变量Cox函数组合所述数据以获得最终值(endvalue)以确定发生BLE的风险(概率)；其中，通过以下方法获得来自所述多变量Cox函数的多变量Cox回归：i)通过组合所述生化标记物和所述临床参数构建多变量Cox回归；和ii)分析所述多变量Cox回归以评估生化标记物和临床参数的独立判别值。根据本专利技术的“用于诊断发生BLE的风险(预测概率)的体外方法”，这意味着全局方法包括体外(RILA测定)或离体(用先前在患者上评估的临床参数获得的多变量cox回归模型)管理数据分析的步骤。特别地，本专利技术涉及一种用于诊断受试者放射治疗后发生乳房晚期效应的风险的体外方法，其包括以下步骤：a、从所述受试者的生物样品，优选所述受试者的血液样品中确定与评估受试者中放射毒性风险增加相关的至少一种生化标记物的值，所述生化标记物特别选自RILA、放射敏感性蛋白质和/或基因；b、确定与评估受试者中放射毒性风险增加相关的至少两个临床参数的水平，所述临床参数特别选自年龄、乳房体积、辅助激素疗法、加强(boost)、淋巴结照射(nodeirradiation)和吸烟；c、通过多变量Cox函数组合所述数据以获得最终值以确定发生BLE的风险；其中，通过以下方法获得来自所述多变量Cox函数的多变量Cox回归：i)通过组合所述生化标记物和所述临床参数构建多变量Cox回归；和ii)分析所述多变量Cox回归以评估生化标记物和临床参数的独立判别值。在一个优选的实施方案中，所述至少一种生化标记物包含RILA，并且所述至少两种临床参数为吸烟习惯和辅助激素疗法。有利地，所述至少一种生化标记物RILA基于放射治疗(RT)后CD4和/或CD8，优选CD8的应答。在一个特定实施方案中，所述至少一种生化标记物与放射敏感性蛋白质和/或基因组合使用。在一个特定实施方案中，所述至少一种生化标记物与放射敏感性蛋白质(优选选自AK2、HSPA8、ANX1、APEX1和ID2)组合使用。在另一个特定实施方案中，所述至少一种生化标记物与放射敏感性基因(优选选自TGFβ、SOD2、TNFα、XRCC1)组合使用。在一个特定实施方案中，所述至少一种生化标记物与至少一种放射敏感性蛋白质，特别是至少两种放射敏感性蛋白质，更特别是至少三种放射敏感性蛋白质，更特别是至少四种放射敏感性蛋白质，甚至更特别地选自AK2、HSPA8、ANX1、APEX1和ID2的五种放射敏感性蛋白质，组合使用。详细描述定义“乳房晚期效应(BreastLateEffect，BLE)”是指放射治疗(RT)后受试者的萎缩性皮肤、毛细血管扩张、硬结(纤维化)，坏死或溃疡。“硬结”和“纤维化”是同义词(临床与医学语义学)。“受试者”是指人。“生物样品”特别是指血液样品，优选含有白细胞的全血提取物、含有淋巴细胞的全血提取物和含有T淋巴细胞的全血提取物。“临床参数”是指与评估受试者中放射毒性风险增加相关的任何临床参数，特别是选自年龄、乳房体积、辅助激素疗法、加强(补充剂量的照射)、淋巴结照射和吸烟，如表1中进一步公开所示。根据本专利技术的临床参数优选选自吸烟习惯、辅助激素疗法及其组合。“吸烟习惯”是指如下定义的吸烟患者或非吸烟患者。吸烟患者被定义为持续每日吸烟者、间歇性吸烟者或非每日吸烟者(在多变量Cox函数中给定值＝1)，而非吸烟患者被定义为偶尔吸烟者或从不每日吸烟者(在多变量Cox函数中给定值＝0)。术语“每日吸烟者”定义了目前每日吸烟的受试者。术语“间歇性吸烟者”被定义为不是每日吸烟(DiFranza等人,2007；Lindstrom,Isacsson,&theMalmoShoulder-NeckStudyGroup,2002)或在前一个月的1至15天中吸烟(McCarthy,Zhou,&Hser,2001)。术语“非每日本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诊断受试者放射治疗后发生乳房晚期效应(BLE)的风险的体外方法，包括以下步骤：a、从所述受试者的生物样品，优选所述受试者的血液样品中确定与评估受试者中放射毒性风险增加相关的至少一种生化标记物的值，所述生化标记物特别选自RILA、放射敏感性蛋白质和/或基因；b、确定与评估受试者中放射毒性风险增加相关的至少两个临床参数的水平，所述临床参数特别选自年龄、乳房体积、辅助激素疗法、加强、淋巴结照射和吸烟；c、通过多变量Cox函数组合所述数据以获得最终值以确定发生BLE的风险；其中，通过以下方法获得来自所述多变量Cox函数的多变量Cox回归：i)通过组合所述生化标记物和所述临床参数构建多变量Cox回归；和ii)分析所述多变量Cox回归以评估生化标记物和临床参数的独立判别值。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.31 EP 16306097.31.一种用于诊断受试者放射治疗后发生乳房晚期效应(BLE)的风险的体外方法，包括以下步骤：a、从所述受试者的生物样品，优选所述受试者的血液样品中确定与评估受试者中放射毒性风险增加相关的至少一种生化标记物的值，所述生化标记物特别选自RILA、放射敏感性蛋白质和/或基因；b、确定与评估受试者中放射毒性风险增加相关的至少两个临床参数的水平，所述临床参数特别选自年龄、乳房体积、辅助激素疗法、加强、淋巴结照射和吸烟；c、通过多变量Cox函数组合所述数据以获得最终值以确定发生BLE的风险；其中，通过以下方法获得来自所述多变量Cox函数的多变量Cox回归：i)通过组合所述生化标记物和所述临床参数构建多变量Cox回归；和ii)分析所述多变量Cox回归以评估生化标记物和临床参数的独立判别值。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种生化标记物包含RILA，其基于放射治疗(RT)后CD4和/或CD8的应答，优选基于放射治疗(RT)后CD8的应答。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少两个临床参数至少为吸烟习惯和辅助激素疗法。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述生化标记物与放射敏感性蛋白质和/或基因组合使用。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述放射敏感性蛋白质选自AK2、HSPA8、ANX1、APEX1和ID2。6.根据权利要求4所述的方法，其中所述放射敏感性基因选自TGFβ、SOD2、TNFα和XRCC1。7.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述多变量Cox函数包括：危害(经历BLE)＝基准危害*exp(β1*RILA+β2*(辅助激素疗法[0＝否；1＝是])+β3*(吸烟习惯[0＝否；1＝是])，其中：β1介于-0.077和-0.010之间；β2介于0.283和1.980之间；β3介于-0.063和0.965之间。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·阿兹利亚，S·古尔古，
申请(专利权)人：蒙彼利埃癌症区域研究所，蒙彼利埃大学，
类型：发明
国别省市：法国,FR