用于从细胞培养流体分离微载体的容器制造技术

用于从细胞培养流体分离微载体的容器，该容器相对于本领域中描述的系统提供对含有微载体的细胞培养流体更大的过滤效率。该容器可包括：可包括无菌可折叠袋的第一隔室；提供进入第一隔室的流体路径的入口端口和提供离开第一隔室的流体路径的出口端口；以及第二隔室，该第二隔室与第一隔室的入口端口流体连接并且包括由边界壁限定的多个独立或离散的微载体接收区域，所述边界壁部分或完全地多孔并且具有足以将微载体保留在第二隔室内侧同时允许细胞培养流体穿过第二隔室进入第一隔室的出口端口的孔隙率，在该第一隔室处可收集细胞培养流体。

Containers for separating microcarriers from cell culture fluids

A container for separating microcarriers from cell culture fluids provides greater filtration efficiency for cell culture fluids containing microcarriers than the system described in the art. The container may include: a first compartment of a sterile foldable bag; an inlet port for a fluid path entering the first compartment and an outlet port for a fluid path leaving the first compartment; and a second compartment, which is fluidly connected to the inlet port of the first compartment and includes a plurality of independent or discrete microcarrier receiving areas defined by a boundary wall, said side. The boundary wall is partially or completely porous and has a porosity sufficient to retain the microcarrier on the side of the second compartment while allowing the cell culture fluid to pass through the outlet port of the second compartment into the first compartment, where the cell culture fluid can be collected.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于从细胞培养流体分离微载体的容器相关申请的交叉引用本申请要求2016年11月2日提交的美国临时申请序列号62/416,309的优先权，其公开内容通过引用并入本文。
技术介绍
微载体典型地用于粘附或贴壁依赖性细胞的培养并且被广泛用在用于粘附或贴壁依赖性细胞的培养的制药工业中。微载体可用于培养用于某些生物制剂或疫苗的制造的粘附细胞；或用于培养某些类型的细胞(例如，干细胞)，在这种情况下干细胞本身是预期产物。微载体典型地窝藏允许或促进细胞到微载体上的附着的表面特性或化学性质。生物反应器被用于涉及微载体的粘附细胞的培养。一旦细胞达到某个密度或细胞培养过程完成，则细胞培养流体需要与微载体分离用于细胞培养流体本身(例如，在分泌的治疗性蛋白质的情况下，例如，单克隆抗体)或带有附着到其的细胞的微载体(例如，在干细胞的情况下)的进一步处理。此外，通常期望将微载体从细胞培养流体分离使得微载体可以在灭菌后重复使用。总体上，已描述了若干从微载体移除细胞的方法，例如，通过微载体用胰蛋白酶、EDTA或类似试剂的处理以从微载体释放细胞。还已描述了若干用于从细胞培养流体分离微载体的方法。例如，对于大体积的批量处理，传统的分离方法一直是让微载体沉淀在例如堆叠表面的倾斜沉淀台上或浅容器中。一旦细胞已沉淀，就有可能通过倾析收获大部分上清液并且可通过重复沉淀步骤来加强产物的回收。然而，对于这种方法要求的时间可能对于高效回收来说太长并且产物可能变质。可替代地，已描述了过滤器来从细胞培养溶液分离微载体。例如，一种常规系统包括结合到一次性接收袋中的过滤筛网，由此含有微载体的溶液经由馈送到接收袋中的回路通过横切接收袋壁的配件被转移到接收袋中。将微载体悬浮液跨越柔性接收袋的壁转移的入口配件借助于平面网格片材被分成两个腔室，使得通过入口配件馈送的第一腔室是微载体积聚的地方并且第二腔室接收不含微载体的液体溶液。另一种常规系统包括用于从流体介质分离微载体的过滤器组件，该过滤器组件包括：围绕适于保持流体的无菌隔室的可折叠容器；流体通过其流入隔室中的入口端口；流体通过其流出隔室的出口端口；以及设置在隔室内的过滤器，该过滤器将隔室分成与入口端口流体联接的入口腔室和与出口端口流体联接的出口腔室，并且该过滤器允许介质穿过过滤器同时防止微载体穿过。通过使溶液穿过具有跨越刚性容器延伸的水平筛网的刚性容器，可以实现微载体从包含脱离的细胞的培养溶液的分离。筛网是刚性网格，其允许培养流体穿过但是阻止微载体穿过。然而，当微载体在筛网上积聚时，它们开始堵塞筛网并阻止流体从筛网穿过。一旦筛网被堵塞，该过程就停止直到筛网畅通为止。此外，一旦完成该过程，刚性容器和相关的筛网就必须在其可以被重新使用之前被清洁和消毒。这些过程步骤可能是昂贵且耗时的。贴壁依赖性细胞具有在基质上“扩散”的趋势或需求并且从而相对于细胞数量占据相对大的表面积。这极大地使得用于贴壁依赖性细胞产物的生产的方法复杂。例如，75cm2培养表面可能产生基本上可忽略的1×105-6个细胞、几微克的总湿细胞重量，并且远少于任何有用的药物产品的总湿细胞重量。从而，尽管多年来试图克服平面表面附着的限制，但是在平坦表面上生长贴壁依赖性细胞用于生产一直是高度不切实际的。因此，本领域中需要的是可以减轻以上问题中的一个或多个的方法和/或系统。
技术实现思路
本文中描述的各实施例涉及用于从细胞培养流体分离微载体的容器。相对于本领域中描述的系统，本文中描述的容器提供含有微载体的细胞培养流体的更大的过滤效率。例如，在现有技术的过滤系统(例如，如上描述的过滤系统)的情况下，一旦袋填充有微载体，则微载体的越来越小百分比的表面积与过滤容器(例如，袋或囊)接触，由此减慢或阻碍过滤过程并降低整体过滤效率。本文中描述的容器具有高表面积，导致过滤效率的增加。在一些实施例中，提供了一种用于从细胞培养流体分离微载体的容器，该容器包括：可包括无菌可折叠袋的第一隔室；提供进入第一隔室的流体路径的入口端口和提供离开第一隔室的流体路径的出口端口；以及完全封闭的第二隔室，该第二隔室与第一隔室的入口端口流体连接并且包括部分或完全多孔的边界壁，并且该边界壁具有足以将微载体保留在第二隔室内侧同时允许细胞培养流体穿过第二隔室进入第一隔室的出口端口中的孔隙率，在该第一隔室处可收集细胞培养流体。在某些实施例中，完全封闭的第二隔室具有限定出多个独立或离散的微载体接收区域的多个边界壁。所述区域是独立或离散的，因为一个独立或离散的区域中的微载体不直接与另一个独立区域中的微载体相互作用并且不与另一个独立区域中的微载体接触。在一些实施例中，每个微载体接收区域是囊。在某些实施例中，存在多个完全封闭的隔室，每个完全封闭的隔室与第一隔室的入口端口流体连接并且包括部分或完全多孔的边界壁，并且该边界壁具有足以将微载体保留在第二隔室内侧同时允许细胞培养流体穿过第二隔室进入第一隔室的出口端口的孔隙率，在该第一隔室处可收集细胞培养流体。在一些实施例中，提供了一种用于从细胞培养流体分离微载体的方法，该方法包括：(a)提供包括微载体的细胞培养流体；(b)提供容器，其包括：第一隔室和设置在第一隔室内侧的完全封闭的第二隔室，其中第一隔室包括无菌可折叠袋；提供进入第一隔室的流体路径的入口端口；以及提供离开第一隔室的流体路径的出口端口；并且第二隔室与第一隔室的入口端口流体连接并且包括部分或完全多孔的边界壁，并且该边界壁具有足以将微载体保留在第二隔室内侧同时允许流体穿过第二隔室进入出口端口的孔隙率；边界壁限定出独立或离散的微载体接收区域；以及(c)使包括微载体的细胞培养流体流过第一隔室的入口端口，使得微载体流入完全封闭的第二隔室中，在第二隔室中微载体被捕获并积聚在该第二隔室内侧，并且剩余的细胞培养流体通过第一容器的出口端口流出第二隔室，由此从细胞培养流体分离微载体。在一些实施例中，第二隔室包括多个独立或离散的微载体接收区域，每个微载体接收区域包括为含有微载体的细胞培养流体进入微载体接收区域提供流体路径的顶部、侧壁以及足够多孔以允许细胞培养流体穿过同时将微载体保留在微载体接收区域中的底部。在一些实施例中，第二隔室的多个微载体接收区域被连接到气室(plenum)以形成歧管。气室可由诸如例如聚砜、丙烯酸或聚碳酸酯聚合物的刚性材料构成。可替代地，气室可由诸如例如乙烯基或聚氯乙烯聚合物的柔性材料构成。在一些实施例中，气室将含有微载体的细胞培养流体分布到所述多个微载体接收区域中的每一个。附图说明图1是根据某些实施例的用于分离微载体的容器的示意图；图2是根据另一个实施例的用于分离微载体的容器的示意图；图3是根据某些实施例的用于分离微载体的容器的示意图；以及图4是根据某些实施例的用于分离微载体的容器的另一个示意图。具体实施方式通过参考附图可获得对本文中公开的部件、方法和装置的更完整理解。各图仅是基于方便性和易于展示本公开的示意性表示，并且因此并不旨在指示各装置或其部件的相对大小和尺寸和/或限定或限制各示例性实施例的范围。尽管为了清楚起见在以下描述中使用了特定术语，但是这些术语旨在仅指为了各附图中的说明所选择的各实施例的具体结构，并且不旨在限定或限制本公开的范围。在下面的附图和以下描述中，应理解，相似的附图标记指的是具有相似功能的部件本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于从处理流体分离微载体的容器，其包括：第一隔室；提供进入所述第一隔室的流体路径的入口端口；提供离开所述第一隔室的流体路径的出口端口；以及第二隔室，其被设置在所述第一隔室内侧并与所述第一隔室的入口端口流体连接，所述第二隔室包括多个离散的微载体接收区域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.02 US 62/416,3091.一种用于从处理流体分离微载体的容器，其包括：第一隔室；提供进入所述第一隔室的流体路径的入口端口；提供离开所述第一隔室的流体路径的出口端口；以及第二隔室，其被设置在所述第一隔室内侧并与所述第一隔室的入口端口流体连接，所述第二隔室包括多个离散的微载体接收区域。2.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·莫里西，
申请(专利权)人：EMD密理博公司，
类型：发明
国别省市：美国,US