抗PD-1（CD279）抗体制造技术

本发明专利技术提供新颖抗PD‑1抗体、包括这些新抗体的组合物、编码这些抗体的核酸、及制造与使用其的方法。

Anti-PD-1 (CD279) antibody

The present invention provides novel anti-PD_1 antibodies, combinations of these new antibodies, nucleic acids encoding these antibodies, and methods for manufacturing and using them.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-1(CD279)抗体1.相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2016年9月14日申请的美国临时申请号62/394,314的权益，其内容通过引用以其整体并入本文中。2.序列表本申请含有序列表，该序列表已以ASCII格式以电子方式提交且其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII复本创建于2017年8月10日，命名为381493-327WO_SL.txt且大小为33,195字节。3.
本申请尤其是关于新颖抗PD-1抗体、包括这些新抗体的组合物、编码这些抗体的核酸及制造与使用其的方法。4.
技术介绍
癌症疗法包含广泛范围的治疗性方法，包括手术、放射及化学疗法。尽管各种方法容许医师广泛选择可用治疗来治疗癌症，但现有治疗剂存在许多缺点，诸如缺乏靶向癌细胞超过正常健康细胞的选择性及癌症对治疗产生抗性。与非靶向疗法(诸如，放射治疗)相比，基于靶向治疗剂(其相对于正常细胞优先干扰癌细胞的细胞过程)的最近方法已产生具有较少副作用的化学治疗方案。癌症免疫疗法已经作为补充现存护理标准的有前景的治疗方法出现。参见例如，Miller等人,CancerCell[癌症细胞],27,439-449(2015)。这些免疫治疗方法包括研发用于调节免疫系统以杀死癌细胞的抗体。例如，PD-1(I型细胞表面受体)与其两种配体PD-L1或PD-L2中的任一种的相互作用产生显性负性检查点信号，该信号限制随后的抗原受体驱动的细胞活化。PD-1的配体在各种组织和细胞类型(包括免疫系统的抗原呈递细胞)上差异表达，并且在许多类型的肿瘤细胞上被上调。肿瘤微环境中PD-L1的上调是所提出的肿瘤破坏宿主的保护性抗肿瘤免疫反应的一种机制。针对PD-1的抗体阻断受体与其两种配体中的任一种的相互作用，导致对负性信号传导的抑制。已经证明体外抑制PD-1介导的检查点信号导致延长的抗原特异性T细胞活化。已显示体内PD-1阻断在同系小鼠肿瘤模型和人类临床试验二者中均增强抗肿瘤免疫反应。抗PD-1治疗法已经增强了实体瘤患者的抗肿瘤免疫反应。存在两种已批准和上市的拮抗性抗PD-1单克隆抗体：纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab)其在美国及欧盟获批用于治疗诸如不可切除或转移性黑色素瘤及转移性非小细胞肺癌等疾病。如通过无进展存活和/或整体存活的改善所量测的，用这些药剂治疗患者已产生抗肿瘤反应。在与常规化学疗法相比较的临床试验中，最近发现的未能减缓未接受过治疗的患者群体中晚期肺癌的进展突出了对替代性方法及其他癌症治疗法的需求，以补充现存的治疗性护理标准。5.
技术实现思路
本专利技术提供与PD-1特异性结合的抗PD-1抗体及其结合片段。例示性CDR的氨基酸序列以及例示性抗PD-1抗体的重链及轻链的VH区及VL区的氨基酸序列提供于下文具体实施方式中。本文提供的抗体干扰PD-1受体与其两种配体(PD-L1，SEQIDNO:3；PD-L2，SEQIDNO:4)中的任一种的相互作用，导致负性信号传导的抑制和适应性免疫反应的上调。抗PD-1抗体可包括改变抗体的特性的修饰和/或突变，如本领域已知的诸如延长半衰期、增加或减少ADCC等。本文提供包含编码本专利技术的抗PD-1抗体的核苷酸序列的核酸，以及包含核酸的载体。另外，本文提供用包含编码所披露的抗PD-1抗体的核苷酸序列的载体转化的原核及真核宿主细胞，以及经工程化以表达核苷酸序列的真核(诸如，哺乳动物)宿主细胞。还提供通过培养宿主细胞及回收抗体来制造抗体的方法，且进一步在下文具体实施方式中论述。在另一方面中，本专利技术提供包括本文所描述的抗PD-1抗体的组合物。组合物通常包含一种或多种如本文所描述的抗PD-1抗体和/或其盐、及一种或多种赋形剂、运载体或稀释剂。本专利技术提供用抗PD-1抗体治疗经诊断具有实体瘤或血液恶性肿瘤的受试者(诸如，人类受试者)的方法。该方法通常涉及向受试者施用一定量的本文所描述的可有效地提供治疗益处的抗PD-1抗体。受试者可经诊断患有多种实体瘤或血液恶性肿瘤中的任一种，这些实体瘤或血液恶性肿瘤可以是新近诊断的、复发的、或复发且难治的。通常以一周两次、一周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次或每八周一次静脉内输注来施用抗PD-1抗体。抗PD-1抗体可作为单一治疗剂(单药疗法)施用或辅助通常(但非必需)用于治疗实体瘤或血液恶性肿瘤的那些的其他治疗剂，或与这些其他治疗剂一起施用。治疗剂通常经以其批准剂量、施用途径及施用频率来使用，但可以较低剂量使用。抗PD-1抗体可经由各种施用途径或模式来施用，这些施用途径或模式包括但不限于静脉内输注和/或注射、瘤内注射及皮下注射。施用的量将取决于施用途径、给药时间表、所治疗的癌症类型、所治疗的癌症的阶段、以及如本领域熟知的其他参数，诸如患者的年龄和体重。预计提供治疗益处的具体例示性给药时间表提供于具体实施方式中。6.附图说明图1A-1B显示人类PD-1(SEQIDNO:1)、鼠PD-1(SEQIDNO:2)、人类PD-L1(SEQIDNO:3)和人类PD-L2(SEQIDNO:4)的氨基酸序列。图1A描绘人类和鼠PD-1的序列；图1B描绘人类PD-L1和PD-L2的序列。图2提供本专利技术的例示性抗PD-1抗体中VH区和VL区的氨基酸序列。图3A-3C显示氧化和可变温度条件对例示性人源化抗体Hu12A11.2b1及其在CDR-H3中Kabat99处的点突变的影响。图3A描绘在-80℃、5℃、25℃或40℃下储存30天或在经受氧化条件(1％过氧化氢，“1％HP”；或1％叔丁基过氧化氢，“1％TBHP”)后的Hu12A11.2b1的Jurkat细胞中与PD-1的结合；图3B描绘抗PD-1抗体Hu12A11.2b1、Hu12A11.2b2、Hu12A11.2b3和Hu12A11.2b4的结合；图3C描绘在-80℃、5℃、25℃或40℃孵育30天后，Jurkat细胞中Hu12A11.2b4与PD-1的结合。图4A-4B显示纳武单抗和Hu12A11.2b4在混合白细胞反应(MLR)和破伤风类毒素抗原回忆测定(tetanustoxoidantigenrecallassay)中的生物活性。图4A显示在混合白细胞培养物中用10μg/mL的纳武单抗、Hu12A11.2b4或同种型对照处理后IL-2或干扰素-γ(IFN-γ)水平的增强。图4B显示在破伤风类毒素反应测定中纳武单抗、Hu12A11.2b4或同种型对照对IFN-γ增强的剂量依赖性应答。7.具体实施方式本专利技术是关于特异性结合PD-1的抗体及片段、包含抗体的组合物、编码抗PD-1抗体的多核苷酸、能够制造抗体的宿主细胞、适用于制造抗体及结合片段的方法及组合物、以及使用其的各种方法。如本领域普通技术人员应了解，抗体在本质上为“模块化”的。在本专利技术中，描述构成抗体的各种“模块”的各种具体实施例。作为具体非限制性实例，描述VHCDR、VH链、VLCDR及VL链的各种具体实施例。希望所有具体实施例可彼此组合，如同明确单独地描述各具体组合。7.1.缩写本文所描述的抗体、结合片段、及多核苷酸在多个实施例中是借助于其各别多肽或多核苷酸序列来描述。除非另外指明，否则多肽序列是以N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗PD‑1结合蛋白，其包含(i)包含三个CDR的VH链；及(ii)包含三个CDR的VL链，其中：VH CDR#1是GYTFTHYGMN(SEQ ID NO:11)；VH CDR#2是WVNTYTGEPTYADDFKG(SEQ ID NO:12)；VH CDR#3是EGEGLGFGD(SEQ ID NO:13)；VL CDR#1是RSSQSIVHSHGDTYLE(SEQ ID NO:14)；VL CDR#2是KVSNRFS(SEQ ID NO:15)；及VL CDR#3是FQGSHIPVT(SEQ ID NO:16)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.14 US 62/3943141.一种抗PD-1结合蛋白，其包含(i)包含三个CDR的VH链；及(ii)包含三个CDR的VL链，其中：VHCDR#1是GYTFTHYGMN(SEQIDNO:11)；VHCDR#2是WVNTYTGEPTYADDFKG(SEQIDNO:12)；VHCDR#3是EGEGLGFGD(SEQIDNO:13)；VLCDR#1是RSSQSIVHSHGDTYLE(SEQIDNO:14)；VLCDR#2是KVSNRFS(SEQIDNO:15)；及VLCDR#3是FQGSHIPVT(SEQIDNO:16)。2.如权利要求1所述的抗PD-1结合蛋白，其是人源化的。3.如权利要求2所述的抗PD-1结合蛋白，其包含在序列上对应于SEQIDNO:36的VH链；及在序列上对应于SEQIDNO:42的VL链。4.如权利要求3所述的抗PD-1结合蛋白，其是IgG。5.如权利要求4所述的抗PD-1结合蛋白，其是IgG1。6.如权利要求5所述的抗PD-1结合蛋白，其包含具有氨基酸取代L234A和L235A的变体CH2结构域。7.如权利要求4所述的抗PD-1结合蛋白，其是IgG4。8.如权利要求7所述的抗PD-1结合蛋白，其包含具有氨基酸取代S228P的变体Fc区。9.如权利要求3所述的抗PD-1结合蛋白，其包含κ轻恒定区。10.如权利要求3所述的抗PD-1结合蛋白，其包含在序列上对应于SEQIDNO:51或SEQIDNO:52的重链，及在序列上对应于SEQIDNO:61的轻链。11.如权利要求1所述的抗PD-1结合蛋白，其具有小于约100nM的KD。12.如权利要求11所述的抗PD-1结合蛋白，其具有小于约10nM的KD。13.一种药物组合物，其包含如权利要求1所述的抗PD-1结合蛋白和药学上可接受的运载体。14.一种核酸，其包含编码抗PD-1结合蛋白的核苷酸序列，其中该结合蛋白包含(i)包含三个CDR的VH链；及(ii)包含三个CDR的VL链，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：DEH阿法，FA哈丁，J萨马约亚，
申请(专利权)人：艾伯维生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US