硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种ChSaseABC酶蛋白的制备方法，该方法包括：分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和分子伴侣蛋白GroES基因，然后连接上述两个蛋白基因到同一个表达载体，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的重组载体；将所述重组载体转化到宿主细胞中进行表达，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的转化体；以及培养所述转化体，并进行物理破碎处理，制得所述硫酸软骨素ABC酶蛋白。本发明专利技术还提供一种ChSase ABC酶蛋白及其应用。上述ChSase ABC酶蛋白具有高酶活，能够用于生产低分子量硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。

Preparation and Application of Chondroitin Sulfate ABC Enzyme Protein

The present invention provides a method for preparing ChSaseABC enzyme protein. The method comprises cloning the chondroitin sulfate ABC enzyme gene and the molecular chaperone protein GroES gene respectively, then connecting the two protein genes to the same expression vector to obtain the recombinant vector containing the chondroitin sulfate ABC enzyme protein and the molecular chaperone protein GroES, and transforming the recombinant vector into the host fine. The transformant containing the chondroitin sulfate ABC enzyme protein and molecular chaperone protein GroES is obtained by expression in cells, and the transformant is cultured and physically fragmented to prepare the chondroitin sulfate ABC enzyme protein. The invention also provides a ChSase ABC enzyme protein and its application. The above ChSase ABC enzyme proteins have high enzyme activity and can be used to produce low molecular weight chondroitin sulfate. The conditions of chondroitin sulfate production are not high, the method is simple and easy to control.

【技术实现步骤摘要】
硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法及其应用
本专利技术涉及基因工程和发酵工程领域中一种硫酸软骨素ABC酶的制备方法及其应用。
技术介绍
硫酸软骨素裂解酶(chondroitinase或chondroitinsulfateyase，简称为“ChSase”)是一类能将硫酸软骨素、软骨素、透明质酸等糖胺聚糖降解为不饱和二糖(ΔDi及寡糖)的裂解酶。随着对ChSase的深入研究，发现硫酸软骨素ABC酶(简称为“ChSaseABC”)有着广泛的应用价值。科研人员利用ChSaseABC检测硫酸软骨素和生产低分子量硫酸软骨素。鲍伦军，杨建成等用ChSaseABC酶解-高效液相色谱的方法检测鱼翅中的透明质酸，采用ZORBAX糖分析柱，紫外检测波长为226nm，检测到鱼翅中透明质酸的质量分数为0.86-1.96%（鲍伦军等.鱼翅中硫酸软骨素的酶解-高效液相色谱法测定.色谱，2002,20(6):557-559）。朱昱宁，敖雷等同样用酶解高效液相色谱的方法检测CS的含量，采用UltimateXB-NH2柱，紫外检测波长为232nm，流动相为醋酸钠缓冲液(pH5.6)-乙腈(950:50)，流速为1.0mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法，其包括以下步骤：1）重组载体：分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和分子伴侣蛋白GroES基因，然后连接上述两个蛋白基因到同一个表达载体，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的重组载体；2）获得转化体：将所述步骤1）得到的所述重组载体转化到宿主细胞中进行表达，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的转化体；以及3）制备硫酸软骨素ABC酶蛋白：培养所述步骤2）得到的所述转化体，并进行物理破碎处理，制得所述硫酸软骨素ABC酶蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法，其包括以下步骤：1）重组载体：分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和分子伴侣蛋白GroES基因，然后连接上述两个蛋白基因到同一个表达载体，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的重组载体；2）获得转化体：将所述步骤1）得到的所述重组载体转化到宿主细胞中进行表达，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的转化体；以及3）制备硫酸软骨素ABC酶蛋白：培养所述步骤2）得到的所述转化体，并进行物理破碎处理，制得所述硫酸软骨素ABC酶蛋白。2.根据权利要求1所述的硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中所述分子伴侣蛋白GroES基因编码SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤1）包括：分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和分子伴侣蛋白GroES基因，获得两个单独表达的蛋白基因；连接上述两个蛋白基因到同一个所述表达载体，使后续得到的所述重组载体中的分子伴侣蛋白GroES和硫酸软骨素ABC酶蛋白N端连接，或者使后续得到的所述重组载体中的分子伴侣蛋白GroES和硫酸软骨素ABC酶蛋白C端连接，或者使后续得到的所述重组载体中的分子伴侣蛋白GroES和硫酸软骨素ABC酶蛋白具有单独的启动子。4.根据权利要求3所述的硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤2）包括将所述步骤1）得到的三种所述重组载体分别转化到所述宿主细菌中进行表达。5.根据权利要求4所述的硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中采用的所述表达载体为pET15b，使所述两个蛋白基因分别按pET-GroES-RBS-ChSas...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晔，陈振娅，周朝，辛秀兰，袁其朋，
申请(专利权)人：北京电子科技职业学院，
类型：发明
国别省市：北京,11