荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法技术

本发明专利技术涉及中药检测技术领域，具体涉及荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法，通过对液相色谱条件、流动相组成及洗脱程序的控制，建立了荆芥非挥发性成分特征图谱；通过选择合适的气相色谱条件，建立了荆芥挥发性成分特征图谱；并标记特征图谱的特征峰；通过对液相色谱洗脱程序的调整对荆芥中的橙皮苷含量进行测定；同时，建立了荆芥的质量控制方法，包括利用前述荆芥特征图谱对荆芥进行评价，并测定橙皮苷的含量，还包括薄层色谱法鉴别、重金属及有害元素检查、农药残留量测定、浸出物测定，从有效性和安全性角度对荆芥进行质量评价，该质量检测方法具有简单快速、稳定可靠、精密度高、重现性好、易于掌握等优点。

Construction of Characteristic Map and Quality Detection Method of Schizonepeta tenuifolia

The invention relates to the field of Chinese medicine detection technology, in particular to the construction method of characteristic atlas and the quality detection method of Schizonepeta tenuifolia. The characteristic Atlas of non-volatile components of Schizonepeta tenuifolia was established by controlling the conditions of liquid chromatography, mobile phase composition and elution procedure; the characteristic Atlas of volatile components of Schizonepeta tenuifolia was established by selecting suitable gas chromatography conditions; and the characteristics of characteristic Atlas The content of hesperidin in Schizonepeta tenuifolia was determined by adjusting the elution procedure of liquid chromatography. At the same time, the quality control method of Schizonepeta tenuifolia was established, including the evaluation of Schizonepeta tenuifolia by using the characteristic Atlas of Schizonepeta tenuifolia and the determination of hesperidin content. It also included TLC identification, heavy metals and harmful elements examination, pesticide residues determination and extract determination. The method is simple, fast, stable and reliable, with high precision, good reproducibility and easy to master.

【技术实现步骤摘要】
荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法
本专利技术涉及中药检测
，具体涉及荆芥的特征图谱的构建方法和质量检测方法。
技术介绍
荆芥，性微温，味辛，具有解表散风、透疹和消疮的功效，用于感冒、头痛、麻疹、风疹和疮疡，是常用的中药药材之一。在对药物的质量日益关注的今天，对中药材的质量监控非常重要。随着色谱技术的发展，荆芥药材质量标准不仅包括简单的性状、鉴别、常规检查和浸出物测定等方面，还包括高效液相指纹图谱的测定。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别手段，是当前符合中药特色的、评价中药真实性、稳定性和一致性的质量控制模式之一。指纹图谱的作用主要是反映复杂成分的中药及其制剂内在质量的均一性和稳定性。色谱专家认为应该分离度越高越好，分出的峰越多越好；信息处理专家也认为给出的数据越多越好。但国际协调会议关于定量分析的精密度和准确度的问题说“分析的结果并非越精密越准确越好，而是达到分析对象的要求即可”，即指纹图谱的峰不是越多越好，而是达到构成指纹特征的目的即可，而作为药物，在保证安全性的基础上，能够监测有效成分就已经达到目的。据报道，荆芥主要有效成分有挥发油、多种黄酮类化合物、单萜苷等，其中挥发油主要成分为胡薄荷酮、薄荷酮，可作为挥发油的代表物质；黄酮类成分中橙皮苷含量较高，且具有一定的药理作用。现有中国文献“HPLC法同时测定荆芥配方颗粒中4种成分的含量”(JournalofChineseMedicinalMaterials，2016年10月，第39卷第10期2285-2287)公开了一种使用高效液相色谱法检测荆芥配方颗粒中主要有效成分咖啡酸、橙皮苷、迷迭香酸和胡薄荷酮的含量，该方法能通过有效成分含量的测定提供一种荆芥产品全面有效的质量控制。但是上述方法使用的是配方颗粒，并没有从原材料荆芥药材或饮片来从源头控制，而有效成分成分胡薄荷酮一部分存在非挥发性成分中，还有一部分存在于挥发油中，而且薄荷酮也是荆芥的有效成分，薄荷酮则主要存在于挥发油中，因此该法并不能从对荆芥有效成分进行全面的质量控制。而进一步改进荆芥药材的质量控制，除了有效成分，重金属及有害元素、农药残留量等安全性指标在实际应用过程中具有重要的影响，影响用药安全，因此，结合安全性控制的中药质量控制将使中药有效性的控制更具现实意义，建立荆芥全面、有效和安全的质量控制方法。
技术实现思路
因此，本专利技术要解决的第一个技术问题在于克服现有技术中荆芥特征图谱所涉及的有效成分不够全面的缺陷，从而提供一种荆芥特征图谱的构建方法，该特征图谱构建方法包括非挥发性有效成分特征图谱和挥发性有效成分特征图谱的构建，对荆芥有效成分的特征色谱峰的构建更全面。本专利技术要解决的第二个技术问题是克服现有技术不能从有效性和安全性两个方面对荆芥进行全面质量控制的缺陷，建立了一种荆芥质量检测方法。本专利技术公开了一种荆芥特征图谱的构建方法，包括非挥发性成分特征图谱的构建方法和挥发性成分特征图谱的构建方法：A、所述非挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液I的制备：取荆芥供试样品制备供试品溶液Ⅰ；参照物溶液I的制备：取荆芥对照药材制备对照药材参照物溶液I；取橙皮苷对照品制备对照品参照物溶液I；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.2％的磷酸水溶液为流动相B进行洗脱；测定法：分别精密吸取参照物溶液I与供试品溶液I，注入液相色谱仪，测定，即得；和B、所述挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液II的制备：取由荆芥供试样品制备的挥发油，制备供试品溶液II；参照物溶液II的制备：取胡薄荷酮和薄荷酮分别制备对照品的参照物溶液II；色谱条件与系统适用性试验：照气相色谱法测定，以N2为载气，以PEG为固定相，控制进样口温度、检测器温度、柱温和流速；测定法：分别精密吸取参照物溶液II与供试品溶液II，注入气相色谱仪，测定，即得。优选的，还包括对照特征图谱的构建，利用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对得到的至少15批供试品溶液I特征图谱进行分析，生成非挥发性成分对照特征图谱；和/或利用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对得到的至少15批供试品溶液II的气相特征图谱进行分析，生成挥发性成分对照特征图谱。优选的，所述非挥发性成分特征图谱包括6个特征峰，特征峰为：1号峰为橙皮苷，2号峰为迷迭香酸，3号峰、4号峰、5号峰为共有特征峰，6号峰为胡薄荷酮；以1号峰为参照峰，各峰号相对保留时间分别为：1号峰：1.00；2号峰：1.07；3号峰：1.09；4号峰：1.20；5号峰：1.25；6号峰：1.64；和/或所述挥发性成分特征图谱包括3个特征峰，特征峰为：1号峰为薄荷酮，2号峰为胡薄荷酮，3号峰为共有特征峰；以2号峰为参照峰，各峰号相对保留时间分别为：1号峰：0.67；2号峰：1.00；3号峰：1.50。优选的，在所述非挥发性成分特征图谱的构建方法中，洗脱方式选择梯度洗脱方式，梯度洗脱程序为：0-15min，流动相A：流动相B的体积比为8-12％：92-88％→12-16％：88-84％；15-40min，流动相A：流动相B的体积比为12-16％：88-84％→24-28％：76-72％；40-55min，流动相A：流动相B的体积比为24-28％：76-72％→58-62％：42-38％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为58-62％：42-38％→83-87％：17-13％；60-65min，流动相A：流动相B的体积比为83-87％：17-13％→83-87％：17-13％；优选的，所述梯度洗脱程序为：0-15min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；15-40min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→26％：74％；40-55min，流动相A：流动相B的体积比为26％：74％→60％：40％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为60％：40％→85％：15％；60-65min，流动相A：流动相B的体积比为85％：15％→85％：15％；优选的，色谱条件为：柱温为25-40℃；流速为0.8-1.2ml/min；检测波长为278-288nm；优选的，色谱条件为：柱温为40℃；流速为1ml/min；检测波长为283nm。优选的，在所述挥发性成分特征图谱的构建方法中，控制柱温呈梯度升温，所述梯度升温程序为：初始温度为55-65℃，保持1-3min；温度从55-65℃升至115-125℃，然后保持4-6min，升温速率为1.5-2.5℃/min；温度从115-125℃升至155-165℃，升温速率为2.5-3.5℃/min；温度从155-165℃升至235-245℃，升温速率为4.5-5.5℃/min；优选的，所述梯度升温程序为：初始温度为60℃，保持2min；温度从60℃升至120℃，保持5min，升温速率为2℃/min；温度从120℃升至160℃，升温速率为3℃/min；温度从160℃升至240℃，升温速率为5℃/min；优选的，进样口温度为245-255℃，检测器温度为245-255℃，总流量3.5-3.9ml/min；优选的，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，包括非挥发性成分特征图谱的构建方法和挥发性成分特征图谱的构建方法：A、所述非挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液I的制备：取荆芥供试样品制备供试品溶液Ⅰ；参照物溶液I的制备：取荆芥对照药材制备对照药材参照物溶液I；取橙皮苷对照品制备对照品参照物溶液I；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.2％的磷酸水溶液为流动相B进行洗脱；测定法：分别精密吸取参照物溶液I与供试品溶液I，注入液相色谱仪，测定，即得；和B、所述挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液II的制备：取由荆芥供试样品制备的挥发油，制备供试品溶液II；参照物溶液II的制备：取胡薄荷酮和薄荷酮分别制备对照品的参照物溶液II；色谱条件与系统适用性试验：照气相色谱法测定，以N2为载气，以PEG为固定相，控制进样口温度、检测器温度、柱温和流速；测定法：分别精密吸取参照物溶液II与供试品溶液II，注入气相色谱仪，测定，即得。

【技术特征摘要】
1.一种荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，包括非挥发性成分特征图谱的构建方法和挥发性成分特征图谱的构建方法：A、所述非挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液I的制备：取荆芥供试样品制备供试品溶液Ⅰ；参照物溶液I的制备：取荆芥对照药材制备对照药材参照物溶液I；取橙皮苷对照品制备对照品参照物溶液I；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.2％的磷酸水溶液为流动相B进行洗脱；测定法：分别精密吸取参照物溶液I与供试品溶液I，注入液相色谱仪，测定，即得；和B、所述挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液II的制备：取由荆芥供试样品制备的挥发油，制备供试品溶液II；参照物溶液II的制备：取胡薄荷酮和薄荷酮分别制备对照品的参照物溶液II；色谱条件与系统适用性试验：照气相色谱法测定，以N2为载气，以PEG为固定相，控制进样口温度、检测器温度、柱温和流速；测定法：分别精密吸取参照物溶液II与供试品溶液II，注入气相色谱仪，测定，即得。2.根据权利要求1所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，还包括对照特征图谱的构建，利用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对得到的至少15批供试品溶液I特征图谱进行分析，生成非挥发性成分对照特征图谱；和/或利用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对得到的至少15批供试品溶液II的气相特征图谱进行分析，生成挥发性成分对照特征图谱。3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述非挥发性成分特征图谱包括6个特征峰，特征峰为：1号峰为橙皮苷，2号峰为迷迭香酸，3号峰、4号峰、5号峰为共有特征峰，6号峰为胡薄荷酮；和/或所述挥发性成分特征图谱包括3个特征峰，特征峰为：1号峰为薄荷酮，2号峰为胡薄荷酮，3号峰为共有特征峰。4.根据权利要求1-3任一项所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，在所述非挥发性成分特征图谱的构建方法中，洗脱方式选择梯度洗脱方式，梯度洗脱程序为：0-15min，流动相A：流动相B的体积比为8-12％：92-88％→12-16％：88-84％；15-40min，流动相A：流动相B的体积比为12-16％：88-84％→24-28％：76-72％；40-55min，流动相A：流动相B的体积比为24-28％：76-72％→58-62％：42-38％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为58-62％：42-38％→83-87％：17-13％；60-65min，流动相A：流动相B的体积比为83-87％：17-13％→83-87％：17-13％；优选的，所述梯度洗脱程序为：0-15min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；15-40min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→26％：74％；40-55min，流动相A：流动相B的体积比为26％：74％→60％：40％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为60％：40％→85％：15％；60-65min，流动相A：流动相B的体积比为85％：15％→85％：15％；优选的，色谱条件为：柱温为25-40℃；流速为0.8-1.2ml/min；检测波长为278-288nm；优选的，色谱条件为：柱温为40℃；流速为1ml/min；检测波长为283nm。5.根据权利要求1-4任一项所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，在所述挥发性成分特征图谱的构建方法中，控制柱温呈梯度升温，所述梯度升温程序为：初始温度为55-65℃，保持1-3min；温度从55-65℃升至115-125℃，然后保持4-6min，升温速率为1.5-2.5℃/min；温度从115-125℃升至155-165℃，升温速率为2.5-3.5℃/min；温度从155-165℃升至235-245℃，升温速率为4.5-5.5℃/min；优选的，所述梯度升温程序为：初始温度为60℃，保持2min；温度从60℃升至120℃，保持5min，升温速率为2℃/min；温度从120℃升至160℃，升温速率为3℃/min；温度从160℃升至240℃，升温速率为5℃/min；优选的，进样口温度为245-255℃，检测器温度为245-255℃，总流量3.5-3.9ml/min；优选的，进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，总流量3.7ml/min。6.根据权利要求1-5任一项所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液Ⅰ或对照药材参照物溶液I的制备方法包括：取荆芥供试样品或荆芥对照药材制成粉末，精密称取0.5-1g，加溶剂15-30ml，密塞，进行提取处理，放冷，用所述溶剂补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过，取续滤液，即得供...

【专利技术属性】
技术研发人员：迟玉明，姚璐，王淑英，储兆铮，李铮，颜士华，
申请(专利权)人：北京中研同仁堂医药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11