一种定量检测脱氧核糖核酸中有机磷和无机磷的方法技术

本发明专利技术提供一种定量检测脱氧核糖核酸中有机磷和无机磷的方法，通过结合HPLC的分离能力和ICP‑MS的定量能力对DNA分子中的有机磷和无机磷进行了分离和定量检测，优化液质联用的条件参数，各步骤各条件相互配合，解决了普通ICP‑MS定磷法对DNA准确定量时无法区分有机磷和无机磷的难题，大大提升了DNA定磷法定量DNA浓度的准确度和保障了DNA浓度的量值溯源到国际SI单位，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

A Method for Quantitative Detection of Organophosphorus and Inorganic Phosphorus in Deoxyribonucleic Acid

The invention provides a method for quantitative detection of organic phosphorus and inorganic phosphorus in deoxyribonucleic acid. Organic phosphorus and inorganic phosphorus in DNA molecule are separated and quantitatively detected by combining the separation ability of HPLC and the quantitative ability of ICP_MS. The conditions of liquid chromatography-mass spectrometry are optimized, and the conditions of each step cooperate with each other. The method solves the problem that the common ICP_MS phosphorus determination method cannot accurately quantify DNA. The difficulty of separating organophosphorus and inorganic phosphorus greatly improves the accuracy of DNA concentration determination by DNA phosphorus method and ensures that the quantity of DNA concentration can be traced back to the international SI unit, which has broad application prospects and huge market value.

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测脱氧核糖核酸中有机磷和无机磷的方法
本专利技术属于生物化学交叉领域，涉及一种定量检测脱氧核糖核酸中有机磷和无机磷的方法。
技术介绍
脱氧核糖核酸(DNA)是分子结构复杂的有机化合物，作为染色体的一个成分而存在于细胞核内，功能为储藏遗传信息，包括寡聚核苷酸、长链DNA、质粒DNA，基因组DNA等，在基因工程领域具有广阔且深入的应用。寡核苷酸，是一类只有20个以下碱基的短链核苷酸的总称(包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸)，寡核苷酸可以很容易地和它们的互补对连结，所以常用来作为探针确定DNA或RNA的结构，经常用于基因芯片、电泳、荧光原位杂交等过程中；基因组DNA是由一个生物的所有基因的集合体组成，从细胞的结构上分析，基因存在于细胞核内，基因组DNA与组蛋白紧密结合形成染色质；质粒DNA是游离于染色体外的小型(1-200kb)的共价、闭合、环状的双链DNA分子，能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。DNA定量在分子生物学领域有广泛的需求，如进行克隆文库构建时的酶切和连接操作，以及对DNA进行测序时，为了得到良好的后续实验结果，都需要对DNA的浓度进行准确测定。常用的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测脱氧核糖核酸中有机磷和无机磷的方法，其特征在于，所述方法采用液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用；其中，所述液相色谱的色谱柱包括分子排阻色谱柱。

【技术特征摘要】
1.一种定量检测脱氧核糖核酸中有机磷和无机磷的方法，其特征在于，所述方法采用液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用；其中，所述液相色谱的色谱柱包括分子排阻色谱柱。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分子排阻色谱柱的孔径大小为10nm-50nm。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的流动相包括磷酸盐缓冲液和/或Tris缓冲液，优选为Tris缓冲液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Tris缓冲液的pH为6.0-8.0；优选地，所述Tris缓冲液的浓度为5mM-100mM。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.5mL/min-2.0mL/min。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的进样体积为5μL-50μL。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件为：检测230nm-280nm处的紫外吸收值。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述电感耦合等离子体质谱的射频发射功率为1400W-1600W；优选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：闻艳丽，杨雪，李妍，刘刚，梁文，李兰英，王乐乐，罗超，许丽，
申请(专利权)人：上海市计量测试技术研究院中国上海测试中心，华东国家计量测试中心，上海市计量器具强制检定中心，
类型：发明
国别省市：上海,31