一种提取谷子种子总RNA的方法技术

本发明专利技术涉及一种提取谷子种子总RNA的方法，包括以下步骤；（1）将0.1 g液氮研磨的谷子种子细粉中加入0.7 mL的RNA提取缓冲液，所述提取缓冲液成分为：Tris‑HCl、PVP、β‑巯基乙醇依次加入水配制而成；（2）取上清加1 mL的RNAiso Plus；（3）取上清再加入氯仿并混合均匀；（4）取上层液转移至另一新离心管中，加入等体积的异丙醇；（5）弃上清，加乙醇洗涤沉淀后室温干燥，加入RNase‑free水溶解，得到RNA提取液。本发明专利技术提取谷子种子总RNA的方法，提高了RNA的质量和浓度，减少了蛋白质和盐离子污染，解决了谷子RNA提取质量差的问题。

A Method for Extracting Total RNA from Millet Seeds

The present invention relates to a method for extracting total RNA from millet seeds, which includes the following steps: (1) adding 0.7 mL RNA extraction buffer into 0.1 g liquid nitrogen ground millet seed powder, and the components of the extraction buffer are as follows: Tris HCl, PVP, beta mercaptoethanol is prepared by adding water in turn; (2) extracting 1 mL RNA ISO Plus from supernatant; (3) extracting supernatant and adding chloroform and mixing. (4) Transfer supernatant to another new centrifugal tube and add isopropanol of equal volume; (5) Discard supernatant, wash and precipitate with ethanol, then dry at room temperature, add RNase The method for extracting total RNA from millet seeds improves the quality and concentration of RNA, reduces the pollution of protein and salt ions, and solves the problem of poor quality of millet RNA extraction.

【技术实现步骤摘要】
一种提取谷子种子总RNA的方法
本专利技术涉及生物化学
，具体涉及一种提取谷子种子总RNA的方法。
技术介绍
谷子是中国北方的一种小杂粮，谷粒的营养价值很高，含丰富的蛋白质、脂肪和维生素，随着人们生活方式的变化，市场上对谷子的需求不断增加，种子活力的保持和萌发成苗决定着植物种类的繁衍和和生存能力以及生态系统的建成，更直接影响作物的产量。由于种子萌发，特别是小粒种子（如谷子）的萌发更容易受到环境胁迫、机械伤害和病虫害的影响，种子萌发被认为是植物生活周期中最重要和最脆弱的阶段，因此研究种子萌发的分子机制有助于提高作物的产量，具有重要的经济和生态意义。从植物种子中提取纯度高、完整性好的RNA是进行基因动态表达、cDNA合成、RNA序列分析、基因克隆、构建cDNA文库、体外翻译等分子生物学试验的前提。但谷子中含有较多的蛋白质、多糖和脂质，这些物质会干扰或降解RNA，从而影响RNA的产量和质量。多糖表现出与RNA相似的物理化学性质，并与RNA提取物共沉淀和污染。蛋白质和脂类也会干扰RNA分离提取，干扰RT-PCR，从而影响基因表达研究。目前常用的谷子RNA提取法主要为RNAisoPlus本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提取谷子种子总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤；（1）将0.1 g液氮研磨的谷子种子细粉中加入0.7 mL的RNA提取缓冲液，所述提取缓冲液为Tris‑HCl、PVP、β‑巯基乙醇依次加入水配制而成，上述组分的体积比为：1M Tris‑HCl：10% w/vPVP：β‑巯基乙醇：水=5：5：1：39，混匀静置15 min，12000g ，4℃离心10 min；（2）取上清加1 mL的RNAiso Plus，混匀室温静置10min，12 000g，4℃离心5 min；（3）取上清再加入步骤2中RNAiso Plus1/5体积的氯仿并混合均匀，室温静置5 min，12 000 g，4...

【技术特征摘要】
1.一种提取谷子种子总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤；（1）将0.1g液氮研磨的谷子种子细粉中加入0.7mL的RNA提取缓冲液，所述提取缓冲液为Tris-HCl、PVP、β-巯基乙醇依次加入水配制而成，上述组分的体积比为：1MTris-HCl：10%w/vPVP：β-巯基乙醇：水=5：5：1：39，混匀静置15min，12000g，4℃离心10min；（2）取上清加1mL的RNAisoPlus，混匀室温静置10min，12000g，4℃离心5min；（3）取上清再加入步骤2中RNAisoPlus1/5体积的氯仿并混合均匀，...

【专利技术属性】
技术研发人员：温银元，王金荣，许冰霞，尹美强，裴帅帅，柯贞进，赵娟，王计平，冯文新，王玉国，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西,14