一种肿瘤干细胞分型定量检测卡及其制备方法和使用方法技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤干细胞分型定量检测卡及其制备方法和使用方法，包括底卡和面卡，所述底卡上设有：所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；通过微通道与加样区连接的废液区；所述述结合区、检测区、废液区的底部均并联有微通道；结合区及检测区底部并联的微通道均连接时间阀。本发明专利技术通过微流控技术控制待测样品的流速和流量，具有同一种标志物的肿瘤干细胞通过一条微通道进入检测区，避免相互干扰，从而减少误差，增加反应灵敏度；将待测样品制备成水包水微液滴，增大检测限度。

A Quantitative Detection Card for Tumor Stem Cell Typing and Its Preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤干细胞分型定量检测卡及其制备方法和使用方法
本专利技术涉及微流控技术和免疫荧光微球免疫层析技术相结合的
，具体涉及一种肿瘤干细胞分型定量检测卡及其制备方法和使用方法。
技术介绍
近年来随着生物和医学技术的发展，在肝癌组织、肺癌组织、乳腺癌以及直肠癌等多种恶性肿瘤组织中均可以分离出肿瘤干细胞(cancerstemcells，CSCs)。肿瘤干细胞是参与调控癌细胞增殖与自我更新，以及维持肿瘤生长的一类在肿瘤组织中含量很少的细胞。肿瘤干细胞和正常组织干细胞在特征上存在诸多的相似性，包括自我更新、多向分化、细胞周期较长等。微流控技术(Microfludics)是指在至少有一维为微米甚至纳米尺度的低维通道结构中控制体积为皮升至纳升的流体进行流动并传质、传热的技术。实现微流控操控的主要方法就是将流体限制在一个微米甚至纳米尺度的通道中，流体在微流控的微通道中具有独特的流体性质，如层流、液滴等等。当微通道在微米甚至纳米尺度时，微通道表面积与其内部体积比很大，通道的结构、形状和壁面性质都对流体的流动状态产生极大影响。因此，微流控可以实现一系列常规方法难以完成的微加工和微操作。时间阀的作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤干细胞分型定量检测卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；通过微通道与加样区连接的废液区；所述结合区、检测区、废液区的底部均并联有微通道；结合区及检测区底部并联的微通道均连接时间阀；所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤干细胞分型定量检测卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；通过微通道与加样区连接的废液区；所述结合区、检测区、废液区的底部均并联有微通道；结合区及检测区底部并联的微通道均连接时间阀；所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。2.根据权利要求1所述的肿瘤干细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述结合区和检测区均为6个，结合区A、B、C、D、E、F分别喷涂有荧光微球A标记的抗CD133抗体、荧光微球B标记的抗CD90抗体、荧光微球C标记的抗CD44抗体、荧光微球D标记的抗CD24抗体、荧光微球E标记的抗pan-CK抗体、荧光微球F标记的抗ALDH1抗体；检测区A、B、C、D、E、F分别包被有抗CD133抗体、抗CD90抗体、抗CD44抗体、抗CD24抗体、抗pan-CK抗体、抗ALDH1抗体。3.根据权利要求1或2所述的肿瘤干细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述加样区覆盖圆形滤纸；所述检测区覆盖长方形滤纸条；所述圆形滤纸直径为1.5-2.0cm、孔径为1-3μm；所述长方形滤纸条直径为2cm×7cm。4.根据权利要求1或2所述的肿瘤干细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述微通道通过软光刻技术和微流控芯片技术制备，所述微通道孔径为10-15μm；所述时间阀孔径为8μm。5.根据权利要求1或2所述的肿瘤干细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述的底卡和面卡材质为PDMS；所述底卡和面卡的背面扣合连接。6.根据权利要求1-5任意一项所述的肿瘤干细胞分型定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)底卡的制备：(1-1)制图；(1-2)掩模；(1-3)光刻；(1-4)再铸模；(1-5)软光刻；(2)在底卡的结合区分别喷涂荧光微球标记的抗体；(3)在底卡的检测区分别包被抗体；(4)将直径1.5-2.0cm、孔径为1-3μm的圆形滤纸覆盖在加样区，直径为2cm×7cm的长方形滤纸条覆盖检测区；(5)将所述底卡和面卡的背面扣合连接。7.根据权利要求6所述的肿瘤干细胞分型定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括以下步骤：(1-1)制图：微通道图形按照设计通过绘图软件绘制掩膜版图；(1-2)掩模：制成掩膜版图后，打印在透明胶片上制...

【专利技术属性】
技术研发人员：周辉，
申请(专利权)人：周辉，
类型：发明
国别省市：安徽,34