【技术实现步骤摘要】
一种循环肿瘤细胞分型定量检测卡及其制备方法和使用方法
本专利技术涉及微流控技术和免疫荧光微球免疫层析技术相结合的
，具体涉及一种循环肿瘤细胞分型定量检测卡及其制备方法和使用方法。
技术介绍
多年来，癌症一直是威胁人类健康的主要杀手，我国虽是发展中国家，但疾病谱已经发生转变，癌症死亡人数为220.5万，约占全球癌症死亡人数的四分之一，我国已成为世界第一癌症大国。近年来我国每年新发病例约为160万，死亡高达130万，平均每死亡5个人中，就有一人死于癌症。而且，随着工业化、城镇化、环境污染、不良生活习惯与不合理生活方式的普遍存在，我国肿瘤发病率正以每年3％-5％的速度提高，尤其是肺癌、肝癌、乳腺癌、结直肠癌等。癌症不仅严重威胁着国民的生命与健康，而且给家庭、社会、国家造成了沉重的负担，是一个非常突出而又迫切需要解决的社会公共卫生难题。癌症患者外周血液中极其微量的循环肿瘤细胞(CTCs)，被视作肿瘤诊断十分理想的生物标志物，对疾病的早期诊断、预测治疗反应以及疾病进展、开展个体化治疗等方面的研究和应用具有重要价值。但是，由于在1毫升血液中只存在几十个甚至几个循环肿瘤细...
【技术保护点】
1.一种循环肿瘤细胞分型定量检测卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；所述结合区及检测区的底部均并联有微通道；所述微通道连接时间阀；所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。
【技术特征摘要】
1.一种循环肿瘤细胞分型定量检测卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；所述结合区及检测区的底部均并联有微通道；所述微通道连接时间阀；所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述结合区和检测区均为9个，结合区A、B、C、D、E、F、G、H、I分别喷涂有荧光微球A标记的抗EpCAM抗体、荧光微球B标记的抗CK18抗体、荧光微球C标记的抗EMA抗体、荧光微球D标记的抗N-cadherin抗体、荧光微球E标记的抗TAG12抗体、荧光微球F标记的抗SnaⅠ1抗体、荧光微球G标记的抗Survivin抗体、荧光微球H标记的抗Vimentin抗体、荧光微球I标记的抗Twist1抗体；检测区A、B、C、D、E、F、G、H、I分别包被有抗EpCAM抗体、抗CK18抗体、抗EMA抗体、抗N-cadherin抗体、抗TAG12抗体、抗SnaⅠ1抗体、抗Survivin抗体、抗Vimentin抗体、抗Twist1抗体。3.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述加样区覆盖圆形滤纸；所述圆形滤纸直径为1.5-2.0cm、孔径为1-3μm。4.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述微通道通过软光刻技术和微流控芯片技术制备，所述微通道孔径为10-15μm；所述时间阀孔径为8μm。5.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡，其特征在于，所述的底卡和面卡材质为PMA；所述底卡和面卡的背面扣合连接。6.根据权利要求1-5任意一项所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)底卡的制备：(1-1)制图；(1-2)掩模；(1-3)光刻；(1-4)再铸模；(1-5)软光刻；(2)在底卡的结合区分别喷涂荧光微球标记的抗体；(3)在底卡的检测区分别包被抗体；(4)在加样区覆盖滤纸；(5)将所述底卡和面卡的背面扣合连接。7.根据权利要求6所述的循环肿瘤细胞分型定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括以下步骤：(1-1)制图：微通道图形按照设计通过绘图软件绘制掩膜版图；(1-2)掩模：制成掩膜版图后，打印在透明胶...
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