一种犬瘟热病毒复制缺陷毒株及其构建方法技术

本发明专利技术涉及一种犬瘟热病毒的犬瘟热病毒复制缺陷株的拯救及验证，该系统包含：转录质粒，所述转录质粒pCI‑CDV‑SD16F能够表达所述犬瘟热病毒流行毒株SD16F的基因组全长cDNA序列，经定点突变后的pCI‑CDV‑SD16F‑M质粒为不表达M蛋白的重组质粒；和一个或多个辅助质粒，所述辅助质粒能够表达所述犬瘟热病毒SD16F流行毒株的核蛋白(NP)、磷蛋白(P)和大聚合酶蛋白(L)；可稳定表达SD16F M蛋白的Vero‑SLAM‑M细胞系。通过上述反向遗传操作系统，成功的拯救出重组复制缺陷犬瘟热病毒。本研究所述的犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷毒株为新型犬瘟热基因工程生物防治制剂的研制创造了便利条件及犬瘟热病毒相关基础研究提供了极佳的技术平台。

A Canine Distemper Virus Replication Deficiency Strain and Its Construction Method

The present invention relates to the rescue and validation of a canine distemper virus replication defective strain. The system includes: a transcription plasmid, the transcription plasmid pCI CDV SD16F, which can express the full-length DNA sequence of the genome of the canine distemper virus epidemic strain SD16F, a recombinant plasmid of pCI CDV SDF M after site mutation, which does not express M protein, and one or more auxiliary plasmids. The auxiliary plasmid can express the nucleoprotein (NP), phosphoprotein (P) and large polymerase protein (L) of the SD16F epidemic strain of canine distemper virus, and can stably express the Vero SLAM M cell line of SD16F M protein. The recombinant replication-deficient canine distemper virus was successfully rescued by the above reverse genetic operation system. The replication-deficient strains of canine distemper virus in this study provide an excellent technical platform for the development of new canine distemper genetic engineering biological control agents and basic research of canine distemper virus.

【技术实现步骤摘要】
一种犬瘟热病毒复制缺陷毒株及其构建方法
本专利技术属于病毒反向遗传操作
，具体涉及一种犬瘟热病毒复制缺陷毒株及其构建方法。
技术介绍
犬瘟热(Caninedistemper,CD)是一种可导致多种动物共患的高度接触性传染病，由副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)中的犬瘟热病毒(Caninedistempervirus,CDV)感染所引起的。在自然条件下，最为易感的动物以犬科、鼬科、猫科等肉食兽为主，感染后的死亡率极高。CDV为有囊膜的单股负链RNA病毒，主要编码有6个结构蛋白，分别是核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质膜蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素蛋白(H)和大聚合酶蛋白(L)。免疫接种是目前防制犬瘟热的主要手段，灭活苗对CDV强毒攻击不能提供完全的保护，因此，弱毒活疫苗被广泛应用于犬和经济动物犬瘟热的防制。商品化犬瘟热弱毒疫苗的疫苗毒株多是通过将分离的强毒株经异种动物(雪貂等)、鸡胚或细胞连续传代以致弱，如CDV/R-20/8株、Onderstepoort株等，但是这种致弱方法获得的弱毒株存在毒力返强的风险，而且疫苗株对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷毒株的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)在转录质粒中插入不表达M蛋白的犬瘟热病毒基因组全长cDNA序列，获得重组质粒；2)构建辅助质粒，所述辅助质粒能够表达犬瘟热病毒的核蛋白NP、磷蛋白P及大聚合酶蛋白L；3)构建表达犬瘟热病毒M蛋白的细胞系，所述的细胞系为Vero‑SLAM‑M细胞系；4)使用重组质粒和辅助质粒共转染表达犬瘟热病毒M蛋白的细胞，从转染细胞的细胞悬液中拯救出重组犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷株。

【技术特征摘要】
1.一种构建犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷毒株的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)在转录质粒中插入不表达M蛋白的犬瘟热病毒基因组全长cDNA序列，获得重组质粒；2)构建辅助质粒，所述辅助质粒能够表达犬瘟热病毒的核蛋白NP、磷蛋白P及大聚合酶蛋白L；3)构建表达犬瘟热病毒M蛋白的细胞系，所述的细胞系为Vero-SLAM-M细胞系；4)使用重组质粒和辅助质粒共转染表达犬瘟热病毒M蛋白的细胞，从转染细胞的细胞悬液中拯救出重组犬瘟热病毒流行毒株复制缺陷株。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中所述的不表达M蛋白，是在M基因起始密码子处进行碱基定点突变，将A碱基突变为C。3.一种用于制备犬瘟热病毒复制缺...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄娟，单虎，林佳旭，秦志华，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37