miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用制造技术

本发明专利技术提供了miR‑218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用，属于乳腺癌的分子药物技术领域；本发明专利技术中，所述miR‑218能够显著增加乳腺癌细胞对紫杉醇和阿霉素的敏感性；另外，所述miR218能够靶向下调DAAM1基因的表达，通过靶向下调DAAM1基因的表达，抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。因此，本发明专利技术所提供的核酸序列作为一种新型小核酸类的抗肿瘤药物，既能增强乳腺癌对化疗药物的敏感性，又能抑制肿瘤的增殖与侵袭，具有良好的应用前景。

Application of microRNA-218 in preparation of chemosensitizer for breast cancer

The invention provides the application of microRNA218 in the preparation of Chemosensitizers for breast cancer, belonging to the technical field of molecular medicine for breast cancer; in the invention, the microRNA218 can significantly increase the sensitivity of breast cancer cells to paclitaxel and adriamycin; in addition, the microRNA8 can target down-regulate the expression of DAAM1 gene, and inhibit breast cancer fineness by targeting down-regulate the expression of DAAM1 gene. Cell proliferation and invasiveness. Therefore, the nucleic acid sequence provided by the invention, as a new type of small nucleic acid antineoplastic drug, can not only enhance the sensitivity of breast cancer to chemotherapeutic drugs, but also inhibit the proliferation and invasion of tumors, and has good application prospects.

【技术实现步骤摘要】
miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用
本专利技术属于乳腺癌的分子药物
，尤其涉及miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用。
技术介绍
microRNA(miRNA)是一类内源性非编码的短链RNA片段，长度一般为17-23个核苷酸。存在于人类基因组中的miRNAs约有1000种，占基因总数的2％，却可对人体中超过30％的基因起到调控作用。近年来，miRNA与肿瘤的关系已成为现阶段肿瘤学基础研究的一个热点，miRNA可作为肿瘤诊断、治疗及预后的标志物。miR-218是一种存在于人体内的微小RNA，定位于人染色体中12p13.1，包含21核苷酸，其序列为“UUGUGCUUGAUCUAACCAUGU”。miR-218具有和其他miRNAs相似的形成机制：首先在RNA聚合酶II作用下形成pri-miR-218，进而被Drosha核糖核酸酶酶切，形成大概为70nt的茎环结构pre-miR-218。在核转运因子Exportin-5的作用下，pre-miR-218抵达细胞质，由Dicer剪切，形成一个不完全配对的RNA双螺旋-miR-218，最后降解为单链miR-218，通过与其靶基因结合沉默靶基因发挥作用。在正常的生理过程中，miR-218通过影响靶基因的表达参与多种信号转导通路的调控，从而调节正常的生理过程。乳腺癌是目前世界范围内女性最常见的恶性肿瘤，严重危害女性的生命健康。美国肿瘤学会预测，2019年美国将有超过27.1万乳腺癌新发病例，占女性恶性肿瘤新发病例的30％，稳居各类型肿瘤发病率的第一位；超过4万的死亡病例，位居第二(Siegel,R.L.；Miller,K.D.；Jemal,A.,Cancerstatistics,2019.CACancerJClin69(2019)7-34.)。虽然乳腺癌的诊疗方法取得了很大的进步，但已发生淋巴结或远端转移的进展期乳腺癌仍具有较高的死亡风险。在乳腺癌的术后，经常采用化疗的方法，为了增强化疗的效果，通常使用化疗增敏剂，但是目前的化疗增敏剂种类较少，总体增敏效果不理想。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用，增加乳腺癌化疗药物增敏剂的种类，提高增敏效果。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用。优选的，所述miR-218的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。优选的，所述化疗药物包括紫杉醇。优选的，所述化疗药物包括阿霉素。优选的，所述miR-218在化疗药物增敏剂中的浓度为50～150nmol/L。本专利技术提供了miR-218在制备靶向下调DAAM1基因表达的药物中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用，本专利技术中，所述miR-218能够显著增加乳腺癌细胞对紫杉醇和阿霉素的敏感性；另外，所述miR-218能够靶向下调DAAM1基因的表达，通过靶向下调DAAM1基因的表达，抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。附图说明图1为miR-218在正常乳腺组织和乳腺癌标本中表达情况，其中(A)为乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织中miR-218表达量的比较，(B)为在35例癌与癌旁配对的组织中，癌组织中miR-218的表达量比较，(C)为无淋巴结转移的乳腺癌和已发生转移的癌组织中miR-218的表达量比较，(D)为大小不同的肿瘤组织中miR-218的表达量比较；图2为miR-218直接靶向下调DAAM1基因；其中(A)为miR-218与DAAM1基因的3’-UTR的结合区域示意图，(B)为DAAM1-3’-UTR转染组和DAAM1-3’-UTR-del转染组的荧光素酶活性比较，(C)为在miR-218和DAAM1-3’-UTR共转染组中，荧光素酶活性明显下调，(D)为过表达miR-218的MDA-MB-231细胞中，DAAM1蛋白的表达水平；图3为过表达miR-218对乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力的影响；其中，(A)为显微镜视图，(B)为(A)的统计结果图；图4为miR-218对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的抑制情况；图5为miR-218对乳腺癌MDA-MB-231、SUM1315细胞的化疗药物的敏感性的影响，其中A～E分别为紫杉醇、阿霉素、环磷酰胺、多西他赛和山奈酚。具体实施方式本专利技术提供了miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用。本专利技术中，所述miR-218还包括miR-218的前体和类似物；本专利技术中，所述miR-218的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，具体为UUGUGCUUGAUCUAACCAUGU。本专利技术对所述miR-218的来源没有特殊限定，采用化学合成获得或通过构建真核细胞表达载体进行表达获得。本专利技术中，所述化疗药物包括常规的乳腺癌化疗药物，优选为紫杉醇或阿霉素。本专利技术中，所述乳腺癌化疗药物增敏剂优选的以miR-218为唯一活性成分，也可以包括其他miR-218可接受的活性成分或辅料。在本专利技术中，所述miR-218在化疗药物增敏剂中的浓度优选为50～150nmol/L，更优选为80～120nmol/L，最优选为100nmol/L。在本专利技术中，所述miR-218能够靶向下调DAAM1基因表达，细胞中过表达miR-218能有效降低其靶标基因DAAM1的蛋白表达，明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭和增殖能力，而过表达DAAM1基因可以部分挽救miR-218对乳腺癌细胞侵袭和增值能力的抑制。miR-218作为紫杉醇或阿霉素的化疗增敏剂，以提高化疗药对乳腺癌的治疗效果，具有很好的实际应用价值。下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例11.细胞培养乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、SUM1315均购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。三株乳腺癌细胞均培养在含10％(V/V)胎牛血清(FBS)的Dulbecco’s培养基中，培养基添加100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素，所有细胞均放置于含5％CO2的37℃培养箱内，2～3天传代一次。2.乳腺癌细胞及组织中微小RNA的提取纯化本次研究共纳入123名病例，均为2014年至2017年南京医科大学第一附属医院确诊为乳腺癌并实施手术的患者。我们收集了123例乳腺癌组织和35例相邻的正常组织。使用Trizol试剂提取乳腺癌细胞以及乳腺癌临床标本中的总RNA，使用mirVanaTMmiRNAIsolation(Ambion,Austin,TX)试剂盒提取并纯化微小RNA，并将其溶于无RNase的水中，通过测定OD260、OD280数值，并经琼脂糖凝胶电泳确定提取的微小RNA含量和质量。3.实时定量PCR分析用SYBRPremixExTaqTM试剂盒(TaKaRa,Dalian，China)在AppliedBiosystems7500实时定量PCR系统上进行。使用ΔCt法对miRNA的表达量进行分析：首先，测定每个样品在荧光阈值水平上的循环次数。接下来，通过计算ΔCt值显示miR-218的Ct值与U6的Ct值之间的差别(ΔCt＝Ct(miR-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR‑218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-218在制备乳腺癌化疗药物增敏剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-218的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化疗药物包括紫杉醇。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅杰，朱一超，严婷，张永杰，徐步捷，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32