乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用制造技术

本发明专利技术涉及乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用。本发明专利技术所述的应用是提取收集到的乳头溢液中的DNA，进行肿瘤相关基因的检测，其中，肿瘤相关基因的检测可采用基因芯片技术。与采用血液样本检测肿瘤相关基因相比较，乳头溢液目的成分浓度高，用量少，一般用量为500‑800μL即可完成检测，准确性高，而且取材方便快捷、无创伤、临床应用方便；与采用新鲜肿瘤组织和石蜡包埋组织检测肿瘤相关基因相比较，乳头溢液检测到的突变信息更全面，能够避免由穿刺活检引起的血道和淋巴道播散和转移风险，有效克服因异质性造成的检测偏差。

Application of nipple discharge in detection of cancer-related genes

The invention relates to the application of nipple discharge in detecting cancer-related genes. The application of the present invention is to extract the collected DNA from nipple discharge and carry out the detection of tumor-related genes, in which gene chip technology can be used for the detection of tumor-related genes. Compared with the detection of tumor-related genes by blood samples, the concentration of the target components in nipple discharge is high and the dosage is low. The detection can be completed with a general dosage of 500_800 ugL, with high accuracy, convenience, non-invasive and convenient clinical application. Compared with the detection of tumor-related genes by fresh tumor tissues and paraffin-embedded tissues, the mutation information detected by nipple discharge is more accurate. More comprehensive, it can avoid the risk of dissemination and metastasis of blood and lymphatic tracts caused by puncture biopsy, and effectively overcome the detection bias caused by heterogeneity.

【技术实现步骤摘要】
乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用
本专利技术涉及乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用，属于生物医学

技术介绍
现有癌基因、药物靶向基因检测的方法主要有两种方法：①血液检测：抽取病人10-20mL外周血液提取DNA进行检测，外周血液检测需要血液量多，而且血液检测之所以能检测到相关基因，是因为肿瘤细胞突破腺体的基底膜，到达血液中，发生全身转移后，才能在血液循环中检测出肿瘤相关基因，如果病人肿瘤生长没有突破腺体的基底膜，即便肿瘤是恶性，恶性程度很高，血液中也不会检测到肿瘤相关基因。所以，通过血液检测出基因的变化，已经是到了肿瘤的晚期才能实现，并且已经发生了血行转移；②用病人手术切下的肿瘤组织提取DNA进行检测。用组织检测的方法有不同的缺点，首先，无论用新鲜肿瘤组织或石蜡包埋组织检测，都是在手术切除以后进行，因此，不能够提前预知病人肿瘤的良恶性，也无法作为筛选肿瘤的方法，如果用石蜡包埋组织，因为组织经过前期的固定、脱水、包埋等处理，在一定程度上可能会造成DNA的损伤，也就可能会影响检测结果的准确性；其次，用穿刺活检肿瘤组织提取DNA进行检测，为乳腺恶性肿瘤需要做手术前化疗(新辅助治疗)提供诊断依据，但是穿刺取组织会损伤血管、淋巴管，可能增加恶性肿瘤血行播散和转移的风险，另外，乳腺肿瘤具有异质性，即肿瘤细胞之间具有不同的基因和表型，取肿瘤局部组织进行检测具有一定局限性。乳头溢液是发生良性或恶性病变的乳腺导管上皮细胞的分泌物和脱落的乳腺导管上皮细胞进入乳腺导管混合而成的液体，或者是发生良性或恶性病变的乳腺导管上皮细胞的分泌物、脱落的乳腺导管上皮细胞和被肿瘤组织破坏的毛细血管流出的血液成分进入乳腺导管混合而成的液体。目前，国内临床上对于乳头溢液的检查项目仅限于蛋白水平的癌胚抗原、癌抗原以及细胞涂片的检测，而采用乳头溢液检测肿瘤相关基因却鲜有报道。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用，通过按压病变区域乳腺腺叶，将分泌物通过输乳管、乳头挤压出来，收集后提取其中的DNA成分检测肿瘤相关基因，能够比较全面地反应整个肿瘤基因变化的情况。本专利技术的技术方案如下：乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用，其特征在于，所述应用是提取收集到的乳头溢液中的DNA，进行肿瘤相关基因的检测。根据本专利技术优选的，所述乳头溢液按照以下步骤收集：1)用医用酒精棉球对患者乳头进行擦拭，去除乳头表面细胞碎屑；2)对患侧乳房进行人工按压，自乳房四周向乳头按压，按压时适当用力，避免过度用力按压造成乳管损伤，使液体溢出，即得乳头溢液。根据本专利技术优选的，所述收集到的乳头溢液≥20μL，进一步优选的，所述收集到的乳头溢液为500-800μL。根据本专利技术优选的，所述乳头溢液中的DNA按照本领域常规方法进行提取。根据本专利技术优选的，所述肿瘤相关基因的检测采用基因芯片技术。进一步优选的，所述基因芯片技术是将提取到的DNA质控合格后采用基因芯片捕获肿瘤相关基因，测序后剔除测序数据中的低质量序列和接头序列，进行突变检出，得出乳头溢液中肿瘤相关基因。进一步优选的，所述肿瘤相关基因包括已报道的肿瘤药物相关基因、原癌基因、抑癌基因以及人群突变频率较高基因的热点外显子区域。进一步优选的，所述突变检出是指将单碱基变异(SNV)、小片段插入/缺失(SmallIndel)、拷贝数变异(CNV)、融合基因变异和胚系变异检出。本专利技术中的乳头溢液仅指人的乳头溢液。本专利技术适用于已报道的现有肿瘤基因。有益效果：乳头溢液是发生良性或恶性病变的乳腺导管上皮细胞的分泌物和脱落的乳腺导管上皮细胞进入乳腺导管混合而成的液体，或者是发生良性或恶性病变的乳腺导管上皮细胞的分泌物、脱落的乳腺导管上皮细胞和被肿瘤组织破坏的毛细血管流出的血液成分进入乳腺导管混合而成的液体。与采用血液样本检测肿瘤相关基因相比较，乳头溢液目的成分浓度高，用量少，准确性高，而且取材方便快捷、无创伤、临床应用方便；与采用新鲜肿瘤组织和石蜡包埋组织检测肿瘤相关基因相比较，乳头溢液检测到的突变信息更全面，能够避免由穿刺活检引起的血道和淋巴道播散和转移风险，有效克服因异质性造成的检测偏差。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作出进一步的说明，但是本专利技术的保护范围并不仅限于此。实施例中，乳头溢液的收集由受过系统训练的外科医生进行。实施例中基因芯片技术检测肿瘤相关基因由吉因加公司提供技术支持。实施例中基因芯片检测的相关基因包括：1、体细胞变异基因检测表表1.288个包含全部外显子区域基因表2.38个包含内含子、启动子、融合断点区域基因ALKBCL2L11BRAFBRCA1BRD4CD74EGFREML4ERGETV6EZRFGFR1FGFR2FGFR3KIF5BKITMAML2METMSH2MYCMYCL1NCOA4NOTCH2NTRK1NTRK2NTRK3PDGFRAPMS2PPARGRAF1RETROS1RSPO2SLC34A2TERTTFE3TMPRSS2TPM3表3.728个包含部分外显子区的基因2、胚系变异基因检测表表4.胚系变异检测基因ATMBRCA1BRCA2MLH1MLH3MSH2MSH3MSH6PALB2PMS1PMS2实施例中未详细说明的，均按照本领域常规操作进行。实施例1乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用，临床诊断为右乳导管内癌的患者，收集其乳头溢液，提取DNA，进行肿瘤相关基因的检测，具体步骤如下：(1)临床诊断为右乳导管内癌的患者，用医用酒精棉球对患者乳头进行擦拭，去除乳头表面细胞碎屑，对患侧乳房进行人工按压，自乳房四周向乳头按压，按压时适当用力，避免过度用力按压造成乳管损伤，使液体溢出，收集乳头溢液300μL，存储于液氮中备用；(2)提取步骤(1)收集到的乳头溢液中的DNA，质控合格后采用基因芯片捕获肿瘤相关基因；其中，基因芯片包括已报道的肿瘤药物相关基因、原癌基因、抑癌基因以及人群突变频率较高基因的热点外显子区域；(3)将步骤(2)捕获到的肿瘤相关基因进行双末端测序，剔除测序数据中的低质量序列和接头序列，进行突变检出，检出的突变类型包括单碱基变异(SNV)、小片段插入/缺失(SmallIndel)、拷贝数变异(CNV)、融合基因变异和胚系变异，得出乳头溢液中肿瘤相关基因。检测结果如表5-6所示。采用乳头溢液检测肿瘤相关基因，共检测出11个体细胞变异和0个胚系变异。ERBB2(又名HER2/neu)基因编码受体酪氨酸激酶Her2，属于表皮生长因子受体家族(EGFR)，ERBB2基因的扩增或过度表达会导致细胞过度增殖而形成肿瘤，乳头溢液检测结果显示，患者ERBB2基因的突变频率为5.3，提示的靶向药物为拉帕替尼、来那替尼、曲妥珠单抗、吡咯替尼、T-DM1、帕妥珠单抗、阿法替尼。FGFR4是FGFR酪氨酸激酶家族中的一员，在生理状态下，FGFR4信号通路被严格控制，而FGFR4信号失调导致癌症的发生发展、增殖、存活及转移，FGFR4的突变与肿瘤密切相关，乳头溢液的检测结果显示，患者FGFR4基因的突变频率为3.1，提示的靶向药物为帕那替尼。表5乳头溢液中突变的检测结果表6乳头溢液检测结果的靶向药物提示注：*标记的是检测本癌种中获批的药物，其余为跨癌种药物。乳头溢液检测出的1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用，其特征在于，所述应用是提取收集到的乳头溢液中的DNA，进行肿瘤相关基因的检测。

【技术特征摘要】
1.乳头溢液在检测肿瘤相关基因中的应用，其特征在于，所述应用是提取收集到的乳头溢液中的DNA，进行肿瘤相关基因的检测。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述乳头溢液按照以下步骤收集：1)用医用酒精棉球对患者乳头进行擦拭，去除乳头表面细胞碎屑；2)对患侧乳房进行人工按压，自乳房四周向乳头按压，按压时适当用力，避免过度用力按压造成乳管损伤，使液体溢出，即得乳头溢液。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述收集到的乳头溢液≥20μL。4.如权利要求1所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：马榕，王建丽，朱江，王亚文，赵松，张凯，
申请(专利权)人：马榕，
类型：发明
国别省市：山东,37