The invention discloses a preparation method of xanthine oxidase for clinical detection. The method comprises the following steps: step 1, introducing three genes xdhA, xdhB and xdhC into E. coli, and co-expressing three genes in E. coli to obtain xanthine dehydrogenase; step 2, treating the xanthine dehydrogenase with sulfhydryl specific modifier to obtain clinical detection. Xanthine oxidase. In this method, xanthine oxidase was prepared by recombinant E. coli fermentation. It has the advantages of high expression, simple purification process, high purification yield and low production cost.
【技术实现步骤摘要】
一种临床检测用黄嘌呤氧化酶的制备方法
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种临床检测用黄嘌呤氧化酶的制备方法。
技术介绍
黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XOD)是广泛存在于生物体内的嘌呤代谢途径关键酶，主要催化次黄嘌呤氧化生成黄嘌呤，进一步氧化黄嘌呤生成尿酸。XOD属于黄素蛋白氧化酶类中较为复杂的多亚基蛋白，其底物催化机理复杂，除需辅因子FAD，还需钼蝶呤及铁硫簇辅因子，XOD催化的最终电子受体为O2。目前，XOD在医疗诊断酶、食品检测、工业催化及环境保护中都有广泛的应用价值。在医疗诊断领域XOD可用于测定次黄嘌呤和黄嘌呤水平、血清无机磷含量、5'-核苷酸酶及血清超氧化物歧化酶酶活力等。因此，对黄嘌呤氧化酶XOD制备方法的研究，具有重要理论意义和应用价值。目前，国内外使用的XOD主要从牛奶中进行提取，来源单一，生产成本较高，同时由于黄嘌呤氧化酶的含量和质量受不同地域和不同品种奶牛的影响，在应用上对其限制很大。因此，XOD大规模低成本生产方法的研究可以为我国创造巨大的经济和社会效益。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术...
【技术保护点】
1.一种临床检测用黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一、将xdhA、xdhB和xdhC三个基因导入大肠杆菌中，三个基因在大肠杆菌中共表达，得到黄嘌呤脱氢酶；步骤二、将所述黄嘌呤脱氢酶使用巯基特异性修饰剂处理，得到临床检测用黄嘌呤氧化酶。
【技术特征摘要】
1.一种临床检测用黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一、将xdhA、xdhB和xdhC三个基因导入大肠杆菌中，三个基因在大肠杆菌中共表达，得到黄嘌呤脱氢酶；步骤二、将所述黄嘌呤脱氢酶使用巯基特异性修饰剂处理，得到临床检测用黄嘌呤氧化酶。2.根据权利要求1所述的一种临床检测用黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述步骤一的具体过程如下：将xdhA和xdhC基因连接到大肠杆菌共表达载体pETDuet-1，构建重组质粒pETDuet-1-xdhA-xdhC，同时将xdhB基因连接到大肠杆菌表达载体pACYCDuet-1，构建重组质粒pACYCDuet-1-xdhB；然后将上述...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹春丽，杜国荣，张九东，
申请(专利权)人：西安文理学院，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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