一种产氧纳米脂质体的制备方法技术

本发明专利技术一种产氧纳米脂质体的制备方法，在非极性有机溶剂中，加入大豆卵磷脂和果胶溶液，利用过碳酸钠溶液与氢氧化钙溶液在低温下反应，生成过氧化物，而氢氧化钙溶液与果胶溶液又可发生交联反应，在过氧化物外包裹一层果胶钙凝胶膜，其通过在卵磷脂‑非极性有机溶剂中，涡旋超声混合，反相蒸发后，加水涡旋超声后做成产氧脂质体；制备得到的产氧纳米脂质体的产氧量高，在冷冻条件下可长期保存，性能稳定性高，在室温下的有效的释放氧的时间高达55h～60h。

A preparation method of oxygen-producing nanoliposomes

The invention relates to a preparation method of an oxygen producing nano liposome. In a non-polar organic solvent, soybean lecithin and pectin solution are added, and sodium peroxide solution and calcium hydroxide solution are used to react at low temperature to form peroxide, while calcium hydroxide solution and pectin solution can produce cross-linking reaction, and a pectin calcium gel film is coated outside the peroxide through the lecithin. In non-polar organic solvents, the oxygen-producing liposomes were prepared by mixing with vortex ultrasound, evaporating in reverse phase, adding water and vortex ultrasound. The oxygen-producing nanoliposomes prepared by this method have high oxygen yield, long-term preservation under freezing conditions, high stability and effective oxygen release time at room temperature as high as 55h-60h.

【技术实现步骤摘要】
一种产氧纳米脂质体的制备方法
本专利技术涉及脂质体的制备
，具体涉及一种产氧纳米脂质体的制备方法。
技术介绍
脂质体是指将药物包封于类脂质双分子层形成的薄膜中间所制成的超微型球状药物载体制剂，由于其结构类似生物膜，可包封水溶性和脂溶性药物，具有减少药物剂量，降低毒性，延缓释放，改变药物体内分布，并具有靶向治疗效应，提高药物疗效。肿瘤治疗是当今的未解难题，是医学界一直面临的一个重大挑战。药物治疗是肿瘤治疗的一个重要手段，传统抗肿瘤药物虽取得一定的疗效，但其造成的过敏反应、骨髓造血系统抑制、脱发等毒副作用，极大限制了其在临床应用，成为临床治疗的难题之一。如何提高肿瘤治疗的疗效是当今医学一个亟待解决的问题。缺氧是实体肿瘤微环境的一个重要特征，在缺氧环境下，肿瘤细胞通过改变代谢方式来促进肿瘤细胞的转移,抑制机体抗肿瘤免疫反应。肿瘤核心中的缺氧环境会引起抵抗，抗癌疗法，通过改善缺氧肿瘤的氧分压或提高其活性氧浓度，有望成为提高恶性实体肿瘤疗效的有效途径。现有研究制备出的可产氧的纳米脂质体，安全性性能差，稳定性不高，还不能满足提高恶性实体肿瘤疗效的需求，需要进一步提高。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种产氧量高、性能稳定、可实现缓控放氧的产氧纳米脂质体的制备方法。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种产氧纳米脂质体的制备方法，包括以下步骤：（1）在非极性有机溶剂中加入大豆卵磷脂，涡旋，并于超声波下混合4min～6min，得到混和液，每毫升非极性有机溶剂中大豆卵磷脂的加入量为10mg～40mg；（2）在混和液中加入20mg/ml～30mg/ml的果胶溶液，搅拌35min～45min，并于超声波下混合18min～25min，得到混悬液，所述果胶溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:100；（3）在混悬液中加入10mg/ml～20mg/ml的过碳酸钠溶液，涡旋，并于10℃～15℃下超声波混合18min～25min，得到混合搅拌液，所述过碳酸钠溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:100；（4）在混合搅拌液中加入1.4mg/ml～1.8mg/ml的氢氧化钙溶液，在10℃～15℃下搅拌8min～12min,并于10℃～15℃下超声波混合18min～25min，得到氢氧化钙溶液混和液，所述氢氧化钙溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为9～11:100；（5）将氢氧化钙溶液混和液于2℃～4℃下，静置1.8h～2.2h，涡旋，并于超声波下混合28min～33min，得到低温混合物；（6）将低温混合物放入圆底烧瓶内旋转蒸发，以去除非极性有机溶剂，得到旋转蒸发产物；（7）在旋转蒸发产物中加入超纯水，并于超声波下混合，得到旋转蒸发产物混合液，所述超纯水与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:1；（8）将旋转蒸发产物混合液倒入离心管中，加入超纯水，并于超声波下混合18min～25min，再于温度为10℃～15℃、转速为4000r/min～6000r/min的条件下离心8min～12min，取上层清液，即得所述产氧纳米脂质体。进一步地，所述步骤（1）中的非极性有机溶剂为氯仿、环已烷、乙醚、苯、三氯甲烷、正己烷中的一种或多种。进一步地，所述步骤（1）中在非极性有机溶剂中加入大豆卵磷脂，涡旋，并于超声波下混合5min，得到混和液，每毫升非极性有机溶剂中大豆卵磷脂的加入量为14mg。进一步地，所述步骤（2）中在混和液中加入25mg/ml的果胶溶液，搅拌40min，并于超声波下混合20min，得到混悬液，所述果胶溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为1:100。进一步地，所述步骤（3）中在混悬液中加入15mg/ml的过碳酸钠溶液，涡旋，并于12℃下超声波混合20min，得到混合搅拌液，所述过碳酸钠溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为1:100。进一步地，所述步骤（4）中在混合搅拌液中加入1.6mg/ml的氢氧化钙溶液，在12℃下搅拌10min,并于12℃下超声波混合20min，得到氢氧化钙溶液混和液，所述氢氧化钙溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为10:100。进一步地，所述步骤（5）中将氢氧化钙溶液混和液于3℃下，静置2h，涡旋，并于超声波下混合30min，得到低温混合物。进一步地，所述步骤（7）中在旋转蒸发产物中加入超纯水，并于超声波下混合，得到旋转蒸发产物混合液，所述超纯水与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为1:1。进一步地，所述步骤（8）中将旋转蒸发产物混合液倒入离心管中，加入超纯水，并于超声波下混合20min，再于温度为12℃、转速为5000r/min的条件下离心10min，取上层清液，即得所述产氧纳米脂质体。本专利技术还提供一种制备得到的产氧纳米脂质体在实体肿瘤细胞上的应用。本专利技术一种产氧纳米脂质体的制备方法，原理为：在非极性有机溶剂中，加入大豆卵磷脂和果胶溶液，利用过碳酸钠溶液与氢氧化钙溶液在低温下反应，生成过氧化物，而氢氧化钙溶液与果胶溶液又可发生交联反应，在过氧化物外包裹一层果胶钙凝胶膜，其通过在卵磷脂-非极性有机溶剂中，涡旋超声混合，反相蒸发后，加水涡旋超声后做成产氧脂质体。本专利技术一种产氧纳米脂质体的制备方法的有益效果为：1）制备工艺简单，可重复性高，制备难度小，易于推广应用；2）制备得到的产氧纳米脂质体的产氧量高，在冷冻条件下可长期保存，室温下有效的释放氧的时间高达55h～60h，性能稳定性高；3）使用的原料成分简单无毒，安全性能高。具体实施方式本专利技术一种产氧纳米脂质体的制备方法中的非极性有机溶剂可以是氯仿、环已烷、乙醚、苯、三氯甲烷、正己烷等中的一种或多种。下面的实施例仅以非极性有机溶剂为其中的几种为例，可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本专利技术，但不可以以任何方式限制本专利技术。实施例1一种产氧纳米脂质体的制备方法，包括以下步骤：（1）在环己烷中加入大豆卵磷脂，涡旋，并于超声波下混合4min，得到混和液，每毫升有环己烷中大豆卵磷脂的加入量为10mg；（2）在混和液中加入20mg/ml的果胶溶液，搅拌35min，并于超声波下混合18min得到混悬液，所述果胶溶液与步骤（1）中的环己烷的体积比为0.8:100；（3）在混悬液中加入10mg/ml的过碳酸钠溶液，涡旋，并于10℃下超声波混合18min，得到混合搅拌液，所述过碳酸钠溶液与步骤（1）中的环己烷的体积比为0.8:100；（4）在混合搅拌液中加入1.4mg/ml的氢氧化钙溶液，在10℃下搅拌8min,并于10℃下超声波混合18min，得到氢氧化钙溶液混和液，所述氢氧化钙溶液与步骤（1）中的环己烷的体积比为9:100；（5）将氢氧化钙溶液混和液于2℃下，静置1.8h，涡旋，并于超声波下混合28min，得到低温混合物；（6）将低温混合物放入圆底烧瓶内旋转蒸发，以去除环己烷，得到旋转蒸发产物；（7）在旋转蒸发产物中加入超纯水，并于超声波下混合，得到旋转蒸发产物混合液，所述超纯水与步骤（1）中的环己烷的体积比为0.8:1；（8）将旋转蒸发产物混合液倒入离心管中，加入超纯水，并于超声波下混合18min，再于温度为10℃、转速为4000r/min的条件下离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产氧纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在非极性有机溶剂中加入大豆卵磷脂，涡旋，并于超声波下混合4min～6min，得到混和液，每毫升非极性有机溶剂中大豆卵磷脂的加入量为10mg～40mg；（2）在混和液中加入20mg/ml～30mg/ml的果胶溶液，搅拌35min～45min，并于超声波下混合18min～25min，得到混悬液，所述果胶溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:100；（3）在混悬液中加入10mg/ml～20mg/ml的过碳酸钠溶液，涡旋，并于10℃～15℃下超声波混合18min～25min，得到混合搅拌液，所述过碳酸钠溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:100；（4）在混合搅拌液中加入1.4mg/ml～1.8mg/ml的氢氧化钙溶液，在10℃～15℃下搅拌8min～12min,并于10℃～15℃下超声波混合18min～25min，得到氢氧化钙溶液混和液，所述氢氧化钙溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为9～11:100；（5）将氢氧化钙溶液混和液于2℃～4℃下，静置1.8h～2.2h，涡旋，并于超声波下混合28min～33min，得到低温混合物；（6）将低温混合物放入圆底烧瓶内旋转蒸发，以去除非极性有机溶剂，得到旋转蒸发产物；（7）在旋转蒸发产物中加入超纯水，并于超声波下混合，得到旋转蒸发产物混合液，所述超纯水与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:1；（8）将旋转蒸发产物混合液倒入离心管中，加入超纯水，并于超声波下混合18min～25min，再于温度为10℃～15℃、转速为4000r/min～6000r/min的条件下离心8min～12min，取上层清液，即得所述产氧纳米脂质体。...

【技术特征摘要】
1.一种产氧纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在非极性有机溶剂中加入大豆卵磷脂，涡旋，并于超声波下混合4min～6min，得到混和液，每毫升非极性有机溶剂中大豆卵磷脂的加入量为10mg～40mg；（2）在混和液中加入20mg/ml～30mg/ml的果胶溶液，搅拌35min～45min，并于超声波下混合18min～25min，得到混悬液，所述果胶溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:100；（3）在混悬液中加入10mg/ml～20mg/ml的过碳酸钠溶液，涡旋，并于10℃～15℃下超声波混合18min～25min，得到混合搅拌液，所述过碳酸钠溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:100；（4）在混合搅拌液中加入1.4mg/ml～1.8mg/ml的氢氧化钙溶液，在10℃～15℃下搅拌8min～12min,并于10℃～15℃下超声波混合18min～25min，得到氢氧化钙溶液混和液，所述氢氧化钙溶液与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为9～11:100；（5）将氢氧化钙溶液混和液于2℃～4℃下，静置1.8h～2.2h，涡旋，并于超声波下混合28min～33min，得到低温混合物；（6）将低温混合物放入圆底烧瓶内旋转蒸发，以去除非极性有机溶剂，得到旋转蒸发产物；（7）在旋转蒸发产物中加入超纯水，并于超声波下混合，得到旋转蒸发产物混合液，所述超纯水与步骤（1）中的非极性有机溶剂的体积比为0.8～1.2:1；（8）将旋转蒸发产物混合液倒入离心管中，加入超纯水，并于超声波下混合18min～25min，再于温度为10℃～15℃、转速为4000r/min～6000r/min的条件下离心8min～12min，取上层清液，即得所述产氧纳米脂质体。2.根据权利要求1所述的一种产氧纳米脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的非极性有机溶剂为氯仿、环已烷、乙醚、苯、三氯甲烷、正己烷中的一种或多种。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂国朝，张军华，王友东，罗平，
申请(专利权)人：玉林师范学院，
类型：发明
国别省市：广西,45