一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法，通过优化磁珠活化体系，与常用的EDC/NHS体系活化操作相比，更加简单高效。通过使用两种不同捕获性能的抗体以特定的比例混合，显著降低了免疫磁珠的漏检率。通过将制得的免疫磁珠保存在特定组成的保存液中，使免疫磁珠可以在4～8℃保存条件下一年内维持较高的活性，确保了免疫磁珠在保存与使用过程中性能的稳定，为免疫磁珠在实际检测中的应用提供了保障。

Preparation of Salmonella Immunomagnetic Beads

The invention discloses a preparation method of Salmonella immune magnetic beads. By optimizing the magnetic beads activation system, the method is simpler and more efficient than the commonly used EDC/NHS system activation operation. By mixing antibodies with two different capture properties in a specific proportion, the missed detection rate of immunomagnetic beads was significantly reduced. By storing the prepared immunomagnetic beads in a specific composition of the preservation solution, the immunomagnetic beads can maintain a high activity within one year under the condition of preservation at 4-8 C, which ensures the stability of the performance of the immunomagnetic beads in the process of preservation and use, and provides a guarantee for the application of the immunomagnetic beads in practical detection.

【技术实现步骤摘要】
一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种沙门氏菌免疫磁珠制备方法。
技术介绍
沙门氏菌(Salmonella)是最常见的人畜共患致病菌之一，在动物性产品中广泛存在，如肉制品、蛋、奶类等，这些食物广泛分布，因而沙门氏菌引起的食源性疾病爆发时很难溯源。食品中极少数的沙门氏菌即可引发食用者患病，目前全球包括我国国家标准对食品中沙门氏菌的限制都是禁止检出。传统的生化鉴定方法操作较为复杂，耗时长。与传统生化鉴定方法相比，分子学检测方法具有快速、检测限低、准确度高等优势。但分子学检测方法应用的前提是获得不含基因片段扩增抑制因素的高质量DNA模板。通常情况下，实际样本中背景菌的含量远高于目标菌的含量，加之食品基质多样且复杂，给目标菌的分离带来了很大的难度。目前用于食品样本中目标菌分离和富集的方法包括过滤和免疫吸附技术。过滤的方法最大的应用限制是滤膜会被样本基质中的颗粒堵塞，过滤的样本量有限，且样本也会损失从而无法准确定量。免疫吸附技术如免疫磁珠是从复杂的基质如食品、临床、环境样本中分离并富集到目标菌的行之有效的方法。免疫磁珠是对具有超顺磁性的微粒表面进行化学修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法，包括如下步骤：1)将羧基磁珠清洗干净，分散于超纯水中；2)在分散有羧基磁珠的超纯水中加入MIX&GO活化剂，混合均匀，活化磁珠；3)使用MEST缓冲液洗涤活化后的磁珠后，将清洗后活化磁珠分散于MES缓冲液中；4)向MES缓冲液中加入两种抗沙门氏菌抗体，使其反应偶联在磁珠上；5)将偶联后的磁珠用TBST缓冲液洗涤，加入封闭液进行封闭处理；6)封闭完成后，使用TBST缓冲液洗涤封闭后的磁珠，得到沙门氏菌免疫磁珠。

【技术特征摘要】
1.一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法，包括如下步骤：1)将羧基磁珠清洗干净，分散于超纯水中；2)在分散有羧基磁珠的超纯水中加入MIX&GO活化剂，混合均匀，活化磁珠；3)使用MEST缓冲液洗涤活化后的磁珠后，将清洗后活化磁珠分散于MES缓冲液中；4)向MES缓冲液中加入两种抗沙门氏菌抗体，使其反应偶联在磁珠上；5)将偶联后的磁珠用TBST缓冲液洗涤，加入封闭液进行封闭处理；6)封闭完成后，使用TBST缓冲液洗涤封闭后的磁珠，得到沙门氏菌免疫磁珠。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：1)取1mg羧基磁珠放入EP管中，加入1ml超纯水中超声30s，离心去掉上清，清洗干净，最后重悬于100μL超纯水中；2)缓慢加入MIX&GO活化剂100μL，置于混匀仪上室温活化1h；3)活化后加入1mlMEST缓冲液洗涤2遍，重悬于100μLMES缓冲液中；4)缓慢加入抗沙门氏菌抗体，置于混匀仪上室温偶联2h；5)用TBST缓冲液洗涤磁珠，加入1ml封闭液，置于混匀仪上封闭2h；6)封闭完成后，用TBST缓冲液洗涤磁珠，得到沙门氏菌免疫磁珠。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：MEST缓冲液的盐浓度为25mM，p...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲晓莹，蔡芷荷，卢勉飞，万强，徐环，吴清平，李艳嫦，
申请(专利权)人：广东环凯微生物科技有限公司，广东粤微食用菌技术有限公司，广东环凯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44