The invention belongs to the field of immunoassay and biosensor technology, and provides a preparation method of a sandwich electrochemical immunosensor for cardiac troponin. The invention uses gold-silver core-shell nanocubic functionalized graphene oxide doped with nitrogen and sulfur as catalytic material, after incubation with detection antibody as marker, and gold-nanocubic functionalized graphene oxide as electrode modification material, thereby realizing the detection of cardiac troponin cTnI with high sensitivity, strong specificity, low detection limit and cardiac troponin. Early detection has important scientific significance and application value.
【技术实现步骤摘要】
一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法
本专利技术属于免疫分析和生物传感技术领，涉及一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法。具体是采用金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯作为催化材料标记检测抗体，同时利用金纳米立方功能化的氧化石墨烯作为电极修饰材料，从而实现了对心肌肌钙蛋白的灵敏检测。
技术介绍
心肌肌钙蛋白是目前认为较好的心肌损害标志物，可用于诊断心肌梗塞，正常人血液中的心肌肌钙蛋白水平在0.5ng/mL以下，在发生心肌梗塞后6-9小时，血液中心肌肌钙蛋白的含量出现增高并持续数天。因此，实现心肌肌钙蛋白的灵敏检测，可以使病患得到及时诊断和救治，大大加快了病患接受进一步治疗的进程，对心肌梗塞的临床诊断具有重要意义。目前，对于心肌肌钙蛋白的检测方法有很多，如酶联免疫吸附法，免疫荧光法等，但这些方法在检测过程中需要大型仪器设备，操作复杂，检测耗时长，以及存在放射性污染等问题，因此，专利技术一种特异性强，灵敏度高，检测速度快，操作简便的心肌肌钙蛋白免疫传感器十分重要。电化学免疫传感器依靠抗原与其相应抗体的特异性结合，已经广泛应用于各类生物...
【技术保护点】
1.一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备金纳米立方功能化的氧化石墨烯分散液；（2）制备金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯标记检测抗体分散液；（3）制备检测心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器；（4）制作检测心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的工作曲线。
【技术特征摘要】
1.一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备金纳米立方功能化的氧化石墨烯分散液；（2）制备金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯标记检测抗体分散液；（3）制备检测心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器；（4）制作检测心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的工作曲线。2.如权利要求1所述的一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）制备金纳米立方功能化的氧化石墨烯分散液，步骤如下：（1）金纳米立方分散液的制备配制10mL含0.25mM氯金酸和75mM十六烷基三甲基溴化铵的混合液于50mL的圆底烧瓶中，在磁力搅拌下迅速加入0.5~0.7mL、10mM新配制的冰硼氢化钠溶液，于27°C水浴中搅拌3小时，制得金纳米粒子水溶胶；量取1.0mL上述制备的金纳米粒子水溶胶用超纯水稀释至100mL作为金晶种分散液；在50mL离心管中依次加入0.1mL、10mM氯金酸溶液，2.0mL、0.2M十六烷基三甲基溴化铵溶液，1.5mL、0.1M抗坏血酸，0.3~0.5mL上述制备的金晶种分散液，超纯水稀释至25mL，在恒温振荡培养箱中于27°C振荡8小时，得到金纳米立方混合液；离心，超纯水洗涤3次，沉淀物重新分散于25mL超纯水中，制得金纳米立方分散液；（2）氧化石墨烯的制备称取1.5~2.5g石墨粉，在搅拌下加入96mL浓硫酸，反应20分钟后加入10~14g高锰酸钾，在冰水浴下搅拌1.5小时，加热至55°C反应5小时，依次缓慢加入100mL超纯水和10mL双氧水，搅拌30分钟后离心分离，在冷冻干燥机中于-50°C冻干12小时，制得氧化石墨烯；（3）金纳米立方功能化的氧化石墨烯分散液的制备称取10~20mg氧化石墨烯加入20mL上述制备的金纳米立方分散液中，在室温下超声2小时，离心分离，制得金纳米立方功能化的氧化石墨烯分散液。3.如权利要求1所述的一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）制备金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯标记检测抗体分散液，步骤如下：（1）金银核壳纳米立方分散液的制备根据权利要求2（1）的步骤制备25mL金纳米立方分散液，后依次加入1.0~3.0mL、0.1M新配制的抗坏血酸和1.0mL、10mM硝酸银，于60°C的水浴中反应12小时；用体积比为3：1的超纯水与丙酮的混合液离心洗涤3次，所得沉淀物重新分散在20mL超纯水中，制得金银核壳纳米立方分散液；（2）氮硫双掺杂氧化石墨烯的制备称取15~25mg氧化石墨烯加入20mL超纯水中，超声分散，加入20~40mg硫脲，超声5分钟，转移到高压反应釜中，于180°C反应12小时；自然冷却至室温，超纯水洗涤至中性，在冷冻干燥机中于-50°C冻干8小时，制得氮硫双掺杂氧化石墨烯；（3）金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯的制备称取...
【专利技术属性】
技术研发人员：李月云，吕慧，李新进，徐振，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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