The invention belongs to the field of immunoassay and biosensor technology, and provides a preparation method and application of a sandwich immunosensor labeled with graphene oxide doped with nitrogen and sulfur. The invention utilizes thionine and gold platinum core-shell dendritic nanoparticles functionalized by Nitrogen-Sulfur double-doped graphene oxide as catalytic material, and after incubation with detection antibody as marker, and uses gold nanorod functionalized polydopamine as electrode modification material. The sandwich electrochemical immunosensor has realized the quantitative detection of cardiac troponin cTnI and cTnT by differential pulse voltammetry. It has high sensitivity, strong specificity and low detection limit. It has important scientific significance and application value for the early detection of cardiac troponin.
【技术实现步骤摘要】
一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用
本专利技术属于免疫分析和生物传感技术领，涉及一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用硫堇与金铂核壳枝晶状纳米粒子功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯作为催化材料标记检测抗体，同时利用金纳米棒功能化的聚多巴胺作为电极修饰材料，通过差分脉冲伏安法实现了对心肌肌钙蛋白的灵敏检测。
技术介绍
急性心肌梗塞（AMI）作为危害人类生命和健康的第一杀手，具有发病急，死亡率高的特点。心肌肌钙蛋白是目前认为较好的心肌损害标志物，对于AMI的早期诊断和治疗具有重要作用。因此，研制出一种灵敏度高，特异性好，临床诊断符合率高，检测快捷方便的方法，可以实现心肌肌钙蛋白的灵敏检测。目前，对于心肌肌钙蛋白的检测方法有很多，如酶联免疫吸附法，免疫荧光法等，但这些方法在检测过程中需要大型仪器设备，操作复杂，检测耗时长，以及存在放射性污染等问题，因此，专利技术一种特异性强，灵敏度高，检测速度快，操作简便的心肌肌钙蛋白免疫传感器十分重要。电化学免疫传感器依靠抗原与其相应抗体的特异性结合，已经广泛应用于各种生物标志...
【技术保护点】
1.一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）取6.0 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的金纳米棒功能化的聚多巴胺分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）将6.0 µL、8.0 ~ 12 µg/mL的标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中晾干；（4）继续将3.0 µL、0.8 ~ 1.2 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；（5）滴加...
【技术特征摘要】
1.一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将直径为3.0~5.0mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）取6.0µL、1.0~3.0mg/mL的金纳米棒功能化的聚多巴胺分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）将6.0µL、8.0~12µg/mL的标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干；（4）继续将3.0µL、0.8~1.2mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干；（5）滴加6.0µL、0.00005~200ng/mL的一系列不同浓度的标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干；（6）将6.0µL、2.5~3.5mg/mL硫堇与金铂核壳枝晶状纳米粒子功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯标记检测抗体分散液滴至电极表面，置于4°C冰箱中孵化40min，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干，制得一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器。2.如权利要求1所述的一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述金纳米棒功能化的聚多巴胺分散液的制备，包括以下步骤：（1）金纳米棒分散液的制备取0.1mL、25mM氯金酸溶液，加入4.9mL超纯水，与5.0mL、0.2M十六烷基三甲基溴化铵的水溶液混合；随后，在磁力搅拌下迅速加入1.0mL、6.0mM新配制的冰硼氢化钠溶液，室温下静置30min，制得金晶种分散液；称取7.0g十六烷基三甲基溴化铵和1.234g油酸钠溶解在250mL超纯水中，超声至完全溶解后，30°C下反应15min；在磁力搅拌下加入250mL、1.0mM氯金酸溶液，反应90min，依次加入1.0~1.5mL抗坏血酸和0.3~0.5mL上述制备的金晶种分散液，反应1min，在30°C下静置12h，得到金纳米棒混合液，超纯水离心洗涤3次，重新分散于10mL超纯水中，制得金纳米棒分散液；（2）金纳米棒功能化的聚多巴胺分散液的制备在50mL离心管中依次加入10~20mg多巴胺，10mL、10mM、pH为8.5的Tris-HCl缓冲液，5.0mL上述制备的金纳米棒分散液，室温下振荡8h，超纯水离心洗涤3次，制得金纳米棒功能化的聚多巴胺分散液。3.如权利要求1所述的一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述硫堇与金铂核壳枝晶状纳米粒子功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯标记检测抗体分散液的制备，包括以下步骤：（1）氮硫双掺杂氧化石墨烯的制备称取15~25mg氧化石墨烯加入20mL超纯水中，超声分散，加入20~40mg硫脲，超声5min，转移到聚四氟乙烯高压反应釜中，于180°C反应12h；自然冷却至室温...
【专利技术属性】
技术研发人员：李月云，吕慧，李新进，徐振，陈磊，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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