一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法技术

本发明专利技术公开一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法，其包括步骤一、样品的前处理：精确称取样品和对照品制备成待测液；将过夜培养的菌种培养物进行菌落计数；取过夜培养的菌种培养物，分别制成含样品和抗生素对照品的含菌待测液、不含抗生素的含菌待测液；步骤二、进样分析及结果判读：上述含菌待测液分别密封于玻璃西林瓶中并放置于平衡好的微量热仪内，当仪器基线稳定后开始计时，仪器自动记录各反应器中的热量变化；记录各含菌待测液在热谱图上出现热量最高峰的时间，以计算获得热谱图参数值作为效价评价标准。本发明专利技术所述的等温微量热方法可用于实时测定抗生素的体外抑菌活性，在快速测定抗生素效价方面具有较好的应用前景。

An Isothermal Microcalorimetry Method for the Analysis of Bacteriostatic Effect of Ceftriaxone Sodium in Vitro

The invention discloses an isothermal microcalorimetric method for analyzing the bacteriostasis effect of ceftriaxone sodium in vitro, which includes steps 1: sample pretreatment: accurately weighing samples and reference materials to prepare the liquid to be tested; counting bacterial colonies of overnight cultures; taking overnight cultures of bacterial strains to make the liquid containing samples and antibiotic reference materials, respectively, and without antibiotics. Steps 2: Sampling analysis and result interpretation: The above-mentioned bacterium-containing liquids are sealed in glass cillin bottles and placed in a well-balanced microcalorimeter. When the baseline of the instrument is stable, the instrument automatically records the heat changes in each reactor; Records the time when the peak of heat appears on the thermogram of each bacterium-containing liquids to calculate and obtain the thermogram parameters. Values are used as the criteria for evaluating potency. The isothermal microcalorimetry method of the invention can be used for real-time determination of antibiotic in vitro bacteriostatic activity, and has good application prospect in rapid determination of antibiotic titer.

【技术实现步骤摘要】
一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法。
技术介绍
头孢曲松钠(CeftriaxoneSodium，CS)是第三代头孢类抗生素，具有抗菌谱广、半衰期长和组织穿透力强等特点，在临床上被广泛应用。CS固体粉末有三种亚晶型和两种结构对映体，使得不同工艺制备的CS在临床上的效果存在较明显差异，需要开发相关分析方法，评价CS真实抑菌效果。目前，直接评价抗生素体外生物活性的现有技术之一是抗生素微生物检定法。该方法具体可分为管碟法、浊度法、化学发光法和免疫分析法等，其中前两种方法被《中国药典》收载，也被世界主要国家和地区的药典收载作为法定检验方法使用。然而，现行《中国药典》2015年版CS各论规定的检验方法不能反映其生物活性差异，现有技术中传统的效价测定方法存在操作复杂、影响因素多、受药物溶解性和扩散率影响大等问题。另外，目前许多抗生素药物的效价评价也使用高效液相色谱法(HPLC法)，如郑风敏等发表的论文《HPLC法测定注射用头孢曲松钠中头孢曲松的含量》。但是，从原理上来说，HPLC法仅能从化学性质上分析抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、样品的前处理；(a)精确称取样品和对照品，用磷酸盐缓冲液稀释成预定浓度的储备液；取一定量的储备液加入到培养基中，充分混匀，稀释成预定浓度的抗生素待测液；(b)将过夜培养的菌种培养物进行菌落计数；(c)取过夜培养的菌种培养物，加入抗生素待测液中，分别制成含样品和含抗生素对照品的含菌待测液，结合菌落计数结果，计算此时待测液中的菌液浓度；(d)取过夜培养的菌种培养物，加入培养基中，制备不含抗生素的含菌待测液。步骤二、进样分析及结果判读；(1)取步骤(c)和步骤(d)获得的含菌待测液分别密封于玻璃西林瓶中并放置于平衡...

【技术特征摘要】
1.一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、样品的前处理；(a)精确称取样品和对照品，用磷酸盐缓冲液稀释成预定浓度的储备液；取一定量的储备液加入到培养基中，充分混匀，稀释成预定浓度的抗生素待测液；(b)将过夜培养的菌种培养物进行菌落计数；(c)取过夜培养的菌种培养物，加入抗生素待测液中，分别制成含样品和含抗生素对照品的含菌待测液，结合菌落计数结果，计算此时待测液中的菌液浓度；(d)取过夜培养的菌种培养物，加入培养基中，制备不含抗生素的含菌待测液。步骤二、进样分析及结果判读；(1)取步骤(c)和步骤(d)获得的含菌待测液分别密封于玻璃西林瓶中并放置于平衡好的微量热仪内，当基线稳定后开始计时，仪器自动记录各反应器中的热量变化；(2)记录各含菌待测液在热谱图上出现热量最高峰的时间，以计算获得热谱图参数值作为效价评价标准。2.根据权利要求1所述的一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法，其特征在于，在所述步骤(a)中，所述储备液的浓度为10mg/mL，所述培养基为5mLIII号培养基，所述抗生素待测液的浓度范围为0.25mg·mL-1～0.8mg·mL-1。3.根据权利要求1所述的一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法，其特征在于，在所述步骤(b)中，所述菌种培养物为金黄色葡萄球菌培养物，所述菌落计数方法采用《中国药典》2015年版通则1105所列方法。4.根据权利要求1所述的一种分析头孢曲松钠体外抑菌效果的等温微量热方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，所述菌种培养物的用量为5μL，所述抗生素待测液的用量为5mL，所述菌液浓度的范围为101...

【专利技术属性】
技术研发人员：范一灵，王伟霞，闻宏亮，范迪，秦峰，刘浩，
申请(专利权)人：上海市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：上海,31