一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法技术

本发明专利技术属于生物催化领域，具体涉及一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法。本发明专利技术以PVA和卡拉胶为包埋基材，活性碳为添加剂，固定产磷酸化酶的大肠杆菌，得到固定化大肠杆菌；在制备胸苷的反应中，以固定化大肠杆菌为催化剂，以磷酸盐缓冲液为溶剂，2‑脱氧‑α‑D‑核糖‑1‑磷酸二环己基胺盐和胸腺嘧啶为反应底物，生产胸苷。本发明专利技术采用固定化大肠杆菌制备胸苷，较好的提高了菌体对底物的耐受性，其稳定性得到提高，使得制备胸苷的收率提高；结果表明，经提纯后，胸苷纯度可达97％以上，收率达90％以上；经过6批次反应后，固定化大肠杆菌无明显活力损失。

A Method for Preparing Thymidine by Immobilized Escherichia coli

The invention belongs to the field of biocatalysis, in particular to a method for preparing thymidine by immobilizing E. coli. In the preparation of thymidine, the immobilized Escherichia coli is obtained by immobilizing the phosphorylase-producing Escherichia coli with PVA and carrageenan as the embedding substrate, active carbon as the additive, immobilized Escherichia coli as the catalyst, phosphate buffer as the solvent, 2_deoxy_alpha_D_ribose_1_phosphoric dicyclohexylamine salt and thymidine as the reaction substrate. The method adopts immobilized E. coli to prepare thymidine, which improves the tolerance of bacteria to substrates, improves its stability and improves the yield of thymidine preparation. The results show that after purification, the purity of thymidine can reach 97% and the yield can reach 90%. After six batches of reactions, the immobilized E. coli has no obvious loss of viability.

【技术实现步骤摘要】
一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法
本专利技术属于生物催化领域，具体涉及一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法。
技术介绍
胸苷是抗艾滋病药物齐多夫定和叠氮胸苷的重要前体物质，在抗病毒、抗肿瘤方面起到了不可替代的作用。目前胸苷的生产方法主要有四种：化学合成法，发酵法，酶法以及化学酶法。利用化学合成法来合成胸苷有多种途径，但是利用化学合成法合成胸苷有不少缺点：形成的胸苷其糖苷键缺乏立体专一性，原料不易得到，胸苷收率也非常低，而且生产过程中有大量废水产生，环境污染大(中国专利技术专利，CN103450302B；CN102863493B)。发酵法虽然能够大规模且单一地生产胸苷，但由于菌体活力低，产率较低(中国专利技术专利，CN105950689A)。酶法是以胸腺嘧啶碱基和2’-脱氧核苷为原料，以菌体或酶为催化介质，催化得到胸苷，但是菌体或酶易于受到底物的抑制，限制了其产率(徐渊，酶法生物合成胸苷和胞苷工艺的研究，硕士学位论文，浙江工业大学，2009)。化学酶法合成胸苷是先用化学法合成中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己基胺盐，然后与胸腺嘧啶作为底物，利用大肠杆菌核苷磷酸化酶催化作用合成胸苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法，其特征在于，以固定化大肠杆菌为催化剂、2‑脱氧‑α‑D‑核糖‑1‑磷酸二环己基胺盐和胸腺嘧啶为底物、磷酸盐缓冲液为溶剂，反应合成胸苷，具体步骤包括如下：(1)将2‑脱氧‑α‑D‑核糖‑1‑磷酸二环己基胺盐和胸腺嘧啶溶于磷酸盐缓冲液中，再加入固定化大肠杆菌，进行反应，然后将固定化大肠杆菌进行分离，得到反应液；(2)将所述反应液依次经过冷藏、过滤、减压蒸干和提纯，得到胸苷。

【技术特征摘要】
1.一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法，其特征在于，以固定化大肠杆菌为催化剂、2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己基胺盐和胸腺嘧啶为底物、磷酸盐缓冲液为溶剂，反应合成胸苷，具体步骤包括如下：(1)将2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己基胺盐和胸腺嘧啶溶于磷酸盐缓冲液中，再加入固定化大肠杆菌，进行反应，然后将固定化大肠杆菌进行分离，得到反应液；(2)将所述反应液依次经过冷藏、过滤、减压蒸干和提纯，得到胸苷。2.根据权利要求1所述的一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法，其特征在于，所述2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己基胺盐溶于磷酸盐缓冲液后的摩尔浓度为100～150mM，所述胸腺嘧啶溶于磷酸盐缓冲液后的摩尔浓度为400～600mM，所述固定化大肠杆菌的质量浓度为为200～600g/L。3.根据权利要求1所述的一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.5～9.5。4.根据权利要求1所述的一种固定化大肠杆菌制备胸苷的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH值为8。5.根据权利要求1所述的一种固定化大肠杆菌制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁国斌，汪斌，贡洁，翁居轼，杨凤丽，陈舟，叶招莲，刘维桥，
申请(专利权)人：江苏理工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32