一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法技术

本发明专利技术属于玉米黄曲霉穗腐病抗性技术领域，公开了一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。本发明专利技术具有鉴定周期短、鉴定成本低、结果准确的特点。

A Rapid Indoor Identification Method for Maize Disease Resistance

【技术实现步骤摘要】
一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法
本专利技术属于玉米黄曲霉穗腐病抗性鉴定
，具体涉及一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法。
技术介绍
玉米穗腐病是一个与人类健康关系密切的玉米病害。全世界各地玉米生产地区都有发生。这个病害的真菌复合体可以产生几种真菌毒素(mycotoxin)，如黄曲霉毒素和伏马毒素等影响人和动物健康的化学物质。曲霉菌中的黄曲霉菌(Aflavus)不仅为害玉米等多种粮食，还产生有毒代谢产物黄曲霉毒素，引起人和家畜、家禽中毒。医学研究表明，长时间食用含低浓度黄曲霉毒素的食物被认为是导致肝癌，胃癌，肠癌等疾病的主要原因。玉米果穗及籽粒均可受害，症状为被害果穗或籽粒出现黄色、黄绿色、黄褐色霉层，即病原菌的菌丝体、分生孢子梗和分生孢子。病粒无光泽，不饱满，腐烂，内部空虚，常为交织的菌丝和孢子所充塞。果穗病部苞叶常被密集的菌丝贯穿，黏结在一起贴于果穗上不易剥离。玉米一旦感染该病害，引起的黄曲霉毒素积累问题，会导致食品污染、饲料污染，并且通过食物链进入人体，进而引起人体病变。玉米中的毒素超标使饲料生产厂家不愿收购本地玉米来作为饲料加工原料，致使本地玉米商品率和价格低下。目前，药剂防治对该病害基本无效。因此，种植抗病品种是解决该病害最经济有效的途径。抗病品种的筛选需要简单、易行、准确的抗性鉴定技术。然而，现有的玉米黄曲霉穗腐病抗性鉴定技术一般为大田人工接种技术，通过玉米品种在大田种植的条件下，在玉米果穗吐丝期用带菌针刺伤籽粒接种，待到果穗成熟收获时进行抗性水平调查进行鉴定；现有技术的缺陷为需要在田间种植玉米品种，工作量大、成本高、周期长，鉴定结果受气候条件影响大。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术目的在于提供一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法。本专利技术所采用的技术方案为：一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。进一步的，所述步骤A包括：将黄曲霉菌种接种于PDA平板上，恒温培养出黄曲霉孢子，用无菌水与所述黄曲霉孢子混合后得到黄曲霉菌孢子悬浮液。进一步的，所述步骤A中恒温的温度为20℃-25℃；所述黄曲霉菌孢子悬浮液中黄曲霉孢子的数量为1×105个/mL-1×107个/mL。进一步的，所述步骤B包括：对各供试玉米品种的每个籽粒进行消毒处理、无菌水清洗、灭菌滤纸沥干后得到多种消毒的供试玉米品种样品。进一步的，所述步骤B的消毒处理包括将各供试玉米品种的每个籽粒先后用酒精、次氯酸钠浸泡的步骤。进一步的，所述步骤B中酒精的质量分数为75％，次氯酸钠的质量分数为3％；各供试玉米品种的每个籽粒用酒精浸泡的时间为30s；各供试玉米品种的每个籽粒用次氯酸钠浸泡的时间为3min。进一步的，所述步骤C的具体步骤：吸取定量黄曲霉菌孢子悬浮液润湿灭菌滤纸，得到润湿滤纸；将供试玉米样品的每个籽粒放在润湿滤纸上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种。进一步的，所述步骤C中恒温培养的温度为20℃-25℃；所述步骤C润湿一张灭菌滤纸吸取的黄曲霉菌孢子悬浮液的体积为5mL；每张润湿滤纸放置的籽粒数量为10粒。本专利技术的有益效果为：本专利技术的一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法采用室内鉴定的方式，避免了大田鉴定需要种植在田间的用地费用、栽培管理费用的成本；本专利技术的鉴定方法的鉴定周期为1周，与大田鉴定一季需要4个月相比，大大减少了时间周期；本专利技术的鉴定方法在室内恒温培养箱中培养，避免了田间气候条件不稳定造成的发病不充分等导致的结果不准确的误差；本专利技术可大大减少田间鉴定产生的大量黄曲霉菌，减少对环境的污染。本专利技术节约了人力、物力成本，操作简单，鉴定结果更加稳定、可信。从而本专利技术具有鉴定周期短、鉴定成本低和结果准确的特点。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步阐释。一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。进一步的，所述步骤A包括：将黄曲霉菌种接种于PDA平板上，恒温培养出黄曲霉孢子，用无菌水与所述黄曲霉孢子混合后得到黄曲霉菌孢子悬浮液。进一步的，所述步骤A中恒温的温度为20℃-25℃；所述黄曲霉菌孢子悬浮液中黄曲霉孢子的数量为1×105个/mL-1×107个/mL。进一步的，所述步骤B包括：对各供试玉米品种的每个籽粒进行消毒处理、无菌水清洗、灭菌滤纸沥干后得到多种消毒的供试玉米品种样品。进一步的，所述步骤B的消毒处理包括将各供试玉米品种的每个籽粒先后用酒精、次氯酸钠浸泡的步骤。进一步的，所述步骤B中酒精的质量分数为75％，次氯酸钠的质量分数为3％；各供试玉米品种的每个籽粒用酒精浸泡的时间为30s；各供试玉米品种的每个籽粒用次氯酸钠浸泡的时间为3min。进一步的，所述步骤C的具体步骤：吸取定量黄曲霉菌孢子悬浮液润湿灭菌滤纸，得到润湿滤纸；将供试玉米样品的每个籽粒放在润湿滤纸上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种。进一步的，所述步骤C中恒温培养的温度为20℃-25℃；所述步骤C润湿一张灭菌滤纸吸取的黄曲霉菌孢子悬浮液的体积为5mL；每张润湿滤纸放置的籽粒数量为10粒。实施例1一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。实施例2一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。所述步骤A包括：将黄曲霉菌种接种于PDA平板上，恒温培养出黄曲霉孢子，用无菌水与所述黄曲霉孢子混合后得到黄曲霉菌孢子悬浮液。本专利技术中的PDA为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(马铃薯200g，葡萄糖15g，琼脂粉18g，水1000mL)，通过PDA平板接种黄曲霉菌种后培养出黄曲霉孢子作为后续接种步骤使用。实施例3一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，其特征在于：包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。

【技术特征摘要】
1.一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，其特征在于：包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。2.根据权利要求1所述的一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，其特征在于：所述步骤A包括：将黄曲霉菌种接种于PDA平板上，恒温培养出黄曲霉孢子，用无菌水与所述黄曲霉孢子混合后得到黄曲霉菌孢子悬浮液。3.根据权利要求2所述的一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，其特征在于：所述步骤A中恒温的温度为20℃-25℃；所述黄曲霉菌孢子悬浮液中黄曲霉孢子的数量为1×105个/mL-1×107个/mL。4.根据权利要求3所述的一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，其特征在于：所述步骤B包括：对各供试玉米品种的每个籽粒进行消毒处理、无菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹成佳，李晓，杨晓蓉，崔丽娜，章振羽，张海燕，向运佳，郑双丽，杨芳英，
申请(专利权)人：四川省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：四川,51