一种检测红豆杉属植物基因表达水平的试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种检测红豆杉属植物基因表达水平的试剂盒和方法，具体地，公开了一种检测曼地亚红豆杉（Taxus×media）在不同处理下基因表达水平变化的试剂盒及其方法。在本发明专利技术中，所述试剂盒包括检测内参基因的引物对或引物对组合，所述内参基因选自SAND、ARP2、RBCL、GAPDH1、Actin、18S rRNA、GAPDH2和TBC41或其组合。本发明专利技术提供的适合红豆杉属标志物基因表达研究的内参基因，为开展红豆杉属植物的功能基因表达分析提供参考依据。

A Kit and Method for Detecting Gene Expression Level of Taxus

The invention discloses a kit and method for detecting gene expression level of Taxus plants. Specifically, the kit and method for detecting gene expression level changes of Taxus * media under different treatments are disclosed. In the present invention, the kit includes primer pairs or primer pair combinations for detecting internal reference genes, which are selected from SAND, ARP2, RBCL, GAPDH1, Actin, 18S rRNA, GAPDH2 and TBC41 or their combinations. The internal reference gene provided by the invention is suitable for the study of gene expression of Taxus markers, and provides a reference basis for carrying out functional gene expression analysis of Taxus plants.

【技术实现步骤摘要】
一种检测红豆杉属植物基因表达水平的试剂盒和方法
本专利技术属于植物分子生物学领域，具体地，涉及一种检测红豆杉属植物基因表达水平的试剂盒和方法，更具体地，涉及一种检测曼地亚红豆杉(Taxus×media)在经过不同处理后基因表达水平的试剂盒及其方法。
技术介绍
实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性强的特点，广泛应用于检测基因的表达水平。为了保证实验结果的准确、可靠，除了合理的实验和引物设计外，其它的实验步骤都要严格对待，如提取的RNA质量、聚合酶的扩增效率、cDNA的合成以及在做定量时操作的准确性和防止污染等[1]。此外，选择合适的内参基因也是正确反映目的基因表达水平的一个重要前提，如ACT，GAPDH，18SrRNA和TUB等已被选为内参基因用于荧光定量PCR中[2-5]，然而，研究结果表明，恒定表达的基因并不存在[6,7]，也不存在适合所有植物，组织或实验处理的内参基因，因此，应根据物种和实验条件选择合适的内参基因。如：Mallona等[8]的研究证明EF1α适合作为矮牵牛Mitchell品系的内参基因，CYP适合作为V30品系的内参基因，而GAPDH在这两个品系中均不稳定。蒋婷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测红豆杉属植物在经过处理后目标基因表达水平变化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括能够特异性扩增内参基因的引物对，所述内参基因选自SAND、ARP2、RBCL和GAPDH1基因中的至少一种。

【技术特征摘要】
1.一种检测红豆杉属植物在经过处理后目标基因表达水平变化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括能够特异性扩增内参基因的引物对，所述内参基因选自SAND、ARP2、RBCL和GAPDH1基因中的至少一种。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，能够特异性扩增SAND基因的引物对序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示；能够特异性扩增ARP2基因的引物对序列如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示；能够特异性扩增RBCL基因的引物对序列如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示；能够特异性扩增GAPDH1基因的引物对序列如SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，任选地，所述经过处理是指经过ABA处理，所述内参基因为RBCL和GAPDH1；任选地，所述经过处理是指经过MeJA处理，所述内参基因为SAND和GAPDH1；任选地，所述经过处理是指经过SA处理，所述内参基因为ARP2和GAPDH1。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括能够特异性扩增Actin、18SrRNA、GAPDH2和TBC41基因的引物对中的至少一种。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，能够特异性扩增Actin基因的引物对序列如SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示；能够特异性扩增18SrRNA基因的引物对序列如SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示；能够特异性扩增GAPDH2基因的引物对序列如SEQIDNO:13和SEQIDNO:14所示；能够特异性扩增TBC41基因的引物对序列如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨艳芳，邱德有，张恺恺，陈段芬，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11