小球藻多糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种小球藻多糖的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤一、将对数期球藻种接种至培养基中，进行培养；步骤二、培养至稳定期后，将培养液进行离心分离，收集沉淀，得藻泥；步骤三、向步骤二得到的藻泥中加入3倍重量的无水乙醇，随后置于4℃冰箱中过夜，然后进行离心分离，收集沉淀，并置于60℃的烘箱中烘干，得藻粉；步骤四、取步骤三得到的藻粉，提取小球藻多糖。本发明专利技术通过优化培养基中各种营养盐的配比，达到提高球藻多糖产率、增强球藻多糖抗氧化活性、提升球藻多糖对自由基的清除能力，且本发明专利技术的制备方法简单，可操作性较强。

Preparation of Chlorella polysaccharides

The invention discloses a preparation method of Chlorella polysaccharides, which is characterized by the following steps: step 1, inoculate several phases of Chlorella species into the culture medium for culture; step 2, centrifuge the culture medium after culture to a stable stage, collect and precipitate, and obtain algae sludge; step 3, add 3 times the weight of anhydrous ethanol to the algae sludge obtained in step 2, and then add 3 times the weight of anhydrous ethanol to the algae sludge. The algae powder was obtained by centrifugal separation, precipitation collection and drying in an oven at 60 C. The algae powder obtained in step 4 and step 3 was used to extract Chlorella polysaccharides. By optimizing the proportions of various nutrients in the culture medium, the invention can improve the yield of the polysaccharide, enhance the antioxidant activity of the polysaccharide, and enhance the scavenging ability of the polysaccharide to free radicals. The preparation method of the invention is simple and has strong operability.

【技术实现步骤摘要】
小球藻多糖的制备方法
本专利技术涉及藻类
更具体地说，本专利技术涉及一种小球藻多糖的制备方法。
技术介绍
小球藻(Chlorellasp.)是一类普生性单细胞绿藻，生态类型多样，分布广泛，在海水、淡水中均有分布。小球藻体内含有丰富的高价值生物活性物质，因此在医药、食品饲料添加剂、化妆品、能源等领域具有广泛的应用价值。并有“药物藻类”的美称。多糖是小球藻活性提取物中重要组成部分之一，大量研究表明小球藻多糖具有调节机体免疫活性、抗肿瘤、减轻重金属离子对机体的毒害等作用。此外小球藻多糖还可以清除各种自由基以保护机体，起到一定的抗氧化作用。现有的小球藻多糖的提取技术大多存在工艺复杂、产糖效率、收率纯度低、得到的小球藻多糖的活性较低等缺陷，需对工艺进行进一步地改进。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种小球藻多糖的制备方法，其通过优化培养基中各种营养盐的配比，达到提高球藻多糖产率、增强球藻多糖抗氧化活性、提升球藻多糖对自由基的清除能力，且本专利技术的制备方法简单，可操作性较强。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种小球藻多糖的制备方法，其包括以下步骤：步骤一、将对数期球藻种接种至培养基中，进行培养；培养基为BG-11培养基，培养基中MgSO4·7H2O的浓度为112.5mg/L，K2HPO4浓度为60mg/L，NaNO3浓度为1.2g/L；步骤二、培养至稳定期后，将培养液进行离心分离，收集沉淀，得藻泥；步骤三、向步骤二得到的藻泥中加入3倍重量的无水乙醇，随后置于4℃冰箱中过夜，然后进行离心分离，收集沉淀，并置于60℃的烘箱中烘干，得藻粉；步骤四、取步骤三得到的藻粉，提取小球藻多糖。优选的是，所述的小球藻多糖的制备方法，步骤四具体为：向步骤三得到的藻粉中加入提取液，超声振荡处理20min，然后将藻粉和提取液的混合物置于80℃的水浴中加热，2h后取出，冷却至室温后离心分离，取上层清液，向上层清液中加入3倍体积的无水乙醇，并置于4℃的冰箱中，静置一夜后取出并离心收集沉淀，并向该沉淀中加入质量分数为3％的三氯乙酸溶液，充分搅匀至沉淀不再溶解，于4℃下离心，取上清液，得多糖提取物，将多糖提取物过0.45um的微孔过滤膜，收集滤液，向滤液中加入3倍体积的无水乙醇，置于4℃的冰箱中，静置一夜后取出并离心收集沉淀，并冷冻干燥，即得小球藻多糖。优选的是，所述的小球藻多糖的制备方法，培养基中加入有浓度分别为0.5mg/L和0.1μg/L的维生素B1和维生素B12。优选的是，所述的小球藻多糖的制备方法，步骤一中，接种培养条件为：光照强度2000lux，暗光比：12/12，温度为24±1℃。优选的是，所述的小球藻多糖的制备方法，步骤四中的提取液为体积分数为4％的NaOH水溶液，干藻粉与NaOH的物料比为1:25。优选的是，所述的小球藻多糖的制备方法，步骤四中，超声振荡的功率为80w。优选的是，所述的小球藻多糖的制备方法，步骤一～步骤四中的离心处理的转速均为4800r/min。优选的是，所述的小球藻多糖的制备方法，球藻种为小球藻EC04或小球藻DC01。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术通过优化培养基中各种营养盐的配比，达到提高球藻多糖产率、增强球藻多糖抗氧化活性、提升球藻多糖对自由基的清除能力，且本专利技术的制备方法简单，可操作性较强。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为葡萄糖浓度的标准曲线；图2为营养盐MgSO4·7H20单因素实验结果；图3为营养盐K2HPO4单因素实验结果；图4为营养盐NaNO3单因素实验结果；图5为维生素B1单因素优化结果；图6为维生素B12单因素优化结果；图7为小球藻多糖的紫外扫描结果；图8为小球藻多糖的红外光谱分析结果；图9为小球藻多糖对DPPH·的清除率；图10为小球藻多糖对·OH的清除率。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。<实施例1>本专利技术提供一种小球藻多糖的制备方法，其包括以下步骤：步骤一、将对数期球藻种接种至培养基中，进行培养；培养基为BG-11培养基，培养基中MgSO4·7H2O的浓度为112.5mg/L，K2HPO4浓度为60mg/L，NaNO3浓度为1.2g/L；培养基中加入有浓度分别为0.5mg/L和0.1μg/L的维生素B1和维生素B12；接种培养条件为：光照强度2000lux，暗光比：12/12，温度为24±1℃；步骤二、培养至稳定期后，将培养液进行离心分离，收集沉淀，得藻泥；步骤三、向步骤二得到的藻泥中加入3倍重量的无水乙醇，随后置于4℃冰箱中过夜，然后进行离心分离，收集沉淀，并置于60℃的烘箱中烘干，得藻粉；步骤四、取步骤三得到的藻粉，提取小球藻多糖，具体为：向步骤三得到的藻粉中加入提取液，超声振荡处理20min，然后将藻粉和提取液的混合物置于80℃的水浴中加热，2h后取出，冷却至室温后离心分离，取上层清液，向上层清液中加入3倍体积的无水乙醇，并置于4℃的冰箱中，静置一夜后取出并离心收集沉淀，并向该沉淀中加入质量分数为3％的三氯乙酸溶液，充分搅匀至沉淀不再溶解，于4℃下离心，取上清液，得多糖提取物，将多糖提取物过0.45um的微孔过滤膜，收集滤液，向滤液中加入3倍体积的无水乙醇，置于4℃的冰箱中，静置一夜后取出并离心收集沉淀，并冷冻干燥，即得小球藻多糖；其中，球藻种为小球藻EC04；步骤一～步骤四中的离心处理的转速均为4800r/min；步骤四中，提取液为体积分数为4％的NaOH水溶液，干藻粉与NaOH的物料比为1:25；超声振荡的功率为80w。<实施例2>本专利技术提供一种小球藻多糖的制备方法，其包括以下步骤：步骤一、将对数期球藻种接种至培养基中，进行培养；培养基为BG-11培养基，培养基中MgSO4·7H2O的浓度为112.5mg/L，K2HPO4浓度为60mg/L，NaNO3浓度为1.2g/L；培养基中加入有浓度分别为0.5mg/L和0.1μg/L的维生素B1和维生素B12；接种培养条件为：光照强度2000lux，暗光比：12/12，温度为24±1℃；步骤二、培养至稳定期后，将培养液进行离心分离，收集沉淀，得藻泥；步骤三、向步骤二得到的藻泥中加入3倍重量的无水乙醇，随后置于4℃冰箱中过夜，然后进行离心分离，收集沉淀，并置于60℃的烘箱中烘干，得藻粉；步骤四、取步骤三得到的藻粉，提取小球藻多糖，具体为：向步骤三得到的藻粉中加入提取液，超声振荡处理20min，然后将藻粉和提取液的混合物置于80℃的水浴中加热，2h后取出，冷却至室温后离心分离，取上层清液，向上层清液中加入3倍体积的无水乙醇，并置于4℃的冰箱中，静置一夜后取出并离心收集沉淀，并向该沉淀中加入质量分数为3％的三氯乙酸溶液，充分搅匀至沉淀不再本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.小球藻多糖的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤一、将对数期球藻种接种至培养基中，进行培养；培养基为BG‑11培养基，培养基中MgSO4·7H2O的浓度为112.5mg/L，K2HPO4浓度为60mg/L，NaNO3浓度为1.2g/L；步骤二、培养至稳定期后，将培养液进行离心分离，收集沉淀，得藻泥；步骤三、向步骤二得到的藻泥中加入3倍重量的无水乙醇，随后置于4℃冰箱中过夜，然后进行离心分离，收集沉淀，并置于60℃的烘箱中烘干，得藻粉；步骤四、取步骤三得到的藻粉，提取小球藻多糖。

【技术特征摘要】
1.小球藻多糖的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤一、将对数期球藻种接种至培养基中，进行培养；培养基为BG-11培养基，培养基中MgSO4·7H2O的浓度为112.5mg/L，K2HPO4浓度为60mg/L，NaNO3浓度为1.2g/L；步骤二、培养至稳定期后，将培养液进行离心分离，收集沉淀，得藻泥；步骤三、向步骤二得到的藻泥中加入3倍重量的无水乙醇，随后置于4℃冰箱中过夜，然后进行离心分离，收集沉淀，并置于60℃的烘箱中烘干，得藻粉；步骤四、取步骤三得到的藻粉，提取小球藻多糖。2.如权利要求1所述的小球藻多糖的制备方法，其特征在于，步骤四具体为：向步骤三得到的藻粉中加入提取液，超声振荡处理20min，然后将藻粉和提取液的混合物置于80℃的水浴中加热，2h后取出，冷却至室温后离心分离，取上层清液，向上层清液中加入3倍体积的无水乙醇，并置于4℃的冰箱中，静置一夜后取出并离心收集沉淀，并向该沉淀中加入质量分数为3％的三氯乙酸溶液，充分搅匀至沉淀不再溶解，于4℃下离心，取上清液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘红全，杨海燕，李洁琼，黄小燕，王逸飞，陈丹雯，莫李红，罗远康，黄柳资，许钟涛，乃欢，禤金彩，龙寒，
申请(专利权)人：广西民族大学，
类型：发明
国别省市：广西,45