The invention provides a breeding method for controlling the sex of pigs, a method for constructing clonal cells of breeding boars and its application. The breeding method of controlling the sex of pigs can inhibit the expression of Sry gene during the sex differentiation of pigs embryos containing Y chromosome, thus obtaining pigs with female characteristics. In this technical scheme, by inhibiting the expression of Sr gene in porcine embryos containing Y chromosome at the stage of sex differentiation, pigs with female characteristics can be obtained, so that all the offspring of pigs with female signs can be bred. Instead of separating the semen collected from breeding boars, the technical scheme directly controls the fertilized eggs so that they do not differentiate into male signs, effectively controls the characteristics of similar pigs, and avoids the trouble of castration of boars in the process of raising pigs.
【技术实现步骤摘要】
控制猪只性别的育种方法、种公猪克隆细胞构建方法及应用
本专利技术属于基因工程
,具体涉及一种对种公猪进行生育控制细胞系的构建方法,以及通过该构建方法获得的种公猪实现全雌子代的育种方法。
技术介绍
公猪肉含有粪臭素和雄烯酮,公猪好斗难饲养,因此,须在小公猪时进行阉割,不利于集约化生产。国外为鲜肉上市,主要采用免疫去势。国内活猪出售,免疫去势后公猪尚存睾丸残迹,不好出售或售价较低。猪的性控精液生产存在着一系列的难题,包括:1.分离效率低(单位时间分离量);2.猪精液冷冻保存技术不成熟;3.分离猪精液对稀释比和温度敏感;4.分离猪精受孕率低等等。猪性控精液不能获得产业上的推广应用,所面临的技术难题很多,主要是物种的特异性决定的,且短期内不能获得重大突破,因此业内目前尚无好的解决方案。
技术实现思路
基于现有技术在猪的性控精液存在难以突破的难题的情况,本技术方案提出利用转基因技术实现对猪的性别进行生育控制。控制猪只性别的育种方法,在含有Y染色体的猪只胚胎的性别分化期抑制其Sry基因表达,从而获得雌性性征的猪只。进一步,所述抑制Sry基因表达的方法为:利用Cre/LoxP重组酶系统对含有Y染色体的猪只胚胎中的Sry基因进行敲除。进一步,所述敲除Sry基因的方法为:(a1)对种公猪的细胞进行编辑,使该细胞的Sry基因的上、下游分别引入方向相同的LoxP序列,获得供体细胞;(a2)以供体细胞进行克隆,获得基因重组种公猪;(a3)采集基因重组种公猪的精液,进行人工授精,获得所述含有Y染色体的猪只胚胎;(a4)对处于性别分化期的所述含有Y染色体的猪只胚胎添加Cre酶,敲除 ...
【技术保护点】
1.控制猪只性别的育种方法,其特征在于,在含有Y染色体的猪只胚胎的性别分化期抑制其Sry基因表达,从而获得雌性性征的猪只。
【技术特征摘要】
1.控制猪只性别的育种方法,其特征在于,在含有Y染色体的猪只胚胎的性别分化期抑制其Sry基因表达,从而获得雌性性征的猪只。2.根据权利要求1所述的控制猪只性别的育种方法,其特征在于,抑制Sry基因表达的方法为:利用Cre/LoxP重组酶系统对含有Y染色体的猪只胚胎中的Sry基因进行敲除。3.根据权利要求2所述的控制猪只性别的育种方法,其特征在于,敲除Sry基因的方法为:(a1)对种公猪的细胞进行编辑,使该细胞的Sry基因的上、下游分别引入方向相同的LoxP序列,获得供体细胞;(a2)以供体细胞进行克隆,获得基因重组种公猪;(a3)采集基因重组种公猪的精液,进行人工授精,获得所述含有Y染色体的猪只胚胎;(a4)对处于性别分化期的所述含有Y染色体的猪只胚胎添加Cre酶,敲除Sry基因。4.根据权利要求2所述的控制猪只性别的育种方法,其特征在于,敲除Sry基因的方法为:(b1)将含有LoxP位点的gRNA-Sry基因供体载体和Cas9mRNA共注射到受精猪卵子中;(b2)培育步骤(b1)所得的受精卵,获得基因重组种公猪;(b3)采集基因重组种公猪的精液,进行人工授精,获得所述含有Y染色体的猪只胚胎;(b4)对处于性别分化期的所述含有Y染色体的猪只胚胎添加Cre酶,敲除Sry基因。5.种公猪克隆细胞构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)获取种公猪成纤维细胞,经接种培养后进行传代培养;(2)将如SEQID№1所示序列片段与如SEQID№2所示序列片段分别接入含有Cas9载体中,分别获得可对Sry基因上游插入LoxP位点的打靶载体和可对Sry基因下游插入LoxP位点的打靶载体;(3)取步骤(1)传代培养获得的成纤维细胞,将步骤(2)制得的...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘燊,邓赣奇,杨雪珍,邹海燕,赵云翔,
申请(专利权)人:佛山科学技术学院,
类型:发明
国别省市:广东,44
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