The invention discloses a method for three-dimensional culture of olfactory stem cells. The method is to isolate olfactory stem cells directly from mouse olfactory epithelium and obtain mature olfactory sensory neurons in three-dimensional culture in vitro. In vitro cultivation of olfactory stem cells can solve olfactory-related diseases such as olfactory impairment and loss of olfactory sense, and provide ideas for clinical treatment of olfactory diseases.
【技术实现步骤摘要】
嗅觉干细胞三维培养方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种嗅觉干细胞三维培养的方法。
技术介绍
嗅觉是哺乳动物的重要感觉系统。哺乳动物的嗅觉系统包括三个部分:鼻腔和嗅上皮、嗅球以及嗅觉中枢。嗅上皮神经元直接暴露于外界环境,易因物理、化学、生物等各种因素引起损伤,导致嗅觉功能减退。嗅上皮中除了有神经元外，还有支持细胞、微绒毛细胞、鲍曼氏腺和基底细胞。其中，支持细胞特异性表达生物转化酶和细胞角蛋白8和角蛋白18，SUS4可特异性标记支持细胞；基底细胞包括球形基底细胞和水平基底细胞，前者特异性标记物为Lgr5，后者表达角蛋白5和角蛋白14。嗅上皮干细胞能自我更新和定向分化，产生嗅上皮内几乎所有的细胞类型。嗅神经元的寿命为30～90天。新生神经元由基底细胞分化而来,补充衰老死亡的神经元,从而维持嗅上皮细胞的内稳态。OMP可特异性标记成熟的嗅觉感受器神经元。球形基底细胞从嗅上皮基底部向顶部迁移,神经树突逐渐向嗅上皮鼻腔面生长,在黏膜表面形成树突小结；同时神经轴突穿过基底膜进入黏膜下层,向嗅球方向生长,在嗅球的嗅小球层与僧帽细胞的树突形成突触连接,进一步分化为成熟嗅神经...
【技术保护点】
1.一种嗅觉干细胞三维培养的方法，将体外分离的小鼠嗅觉干细胞培养在含有基质胶的完全培养基中，培养7‑14天以获得具有活性的成熟嗅感觉神经元。
【技术特征摘要】
1.一种嗅觉干细胞三维培养的方法，将体外分离的小鼠嗅觉干细胞培养在含有基质胶的完全培养基中，培养7-14天以获得具有活性的成熟嗅感觉神经元。2.根据权利要求1所述一种嗅觉干细胞三维培养的方法，其特征在于：所述的完全培养基为在基础培养基中添加生长因子，细胞凋亡抑制剂，R-spondin、wnt3a以及Noggin。3.根据权利要求2所述一种嗅觉干细胞三维培养的方法，其特征在于：所述基础培养基为DMEM/F12培养基(LifeTechnologies)。4.根据权利要求2所述一种嗅觉干细胞三维培养的方法，其特征在于：所述培养添加剂为Glutamax(LifeTechnologies)。5.根据权利要求2所述一种嗅觉干细胞三维培养的方法，其特征在于：所述生长因子为bFGF(20ng/mL，LifeTechnolog...
【专利技术属性】
技术研发人员：余逸群，张秀娟，任雯雯，王丽，余洪猛，
申请(专利权)人：复旦大学附属眼耳鼻喉科医院，
类型：发明
国别省市：上海,31
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