The invention provides a Cdk5 nano-antibody and a screening method, which relates to the field of bioengineering technology. The Cdk5 nano-antibody has the amino acid sequence shown in SEQ ID No.1. The Cdk5 nano-antibody detection activity provided by the invention is 0.3125ug/ml, and can be used as a scientific nano-antibody for Cdk5 protein detection.
【技术实现步骤摘要】
一种Cdk5纳米抗体和筛选方法
本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种Cdk5纳米抗体和筛选方法。
技术介绍
骆驼科动物(羊驼、骆驼)和软骨鱼体内的一种天然缺失重链但仍然具有生物活性的特异性抗体称单域抗体，单域抗体的抗原结合位点(VHH)具有独立的抗原识别能力，独立表达的VHH又被称为纳米抗体。与传统的四联体抗体相比，单域抗体的主要特点有：分子量小，结构简单，理化性质稳定等。纳米抗体得优良特性使其在多种方面具有优势：在抗体进入机体方面纳米抗体能够穿过动物机体内的一些保护性的屏障进入发病部位发挥作用，如血脑屏障、血睾屏障等；在抗原抗体结合方面能够结合一些隐蔽的抗原表位，特别适用于比较难得到抗体的靶点，如GPCR、离子通道和酶活中心等；在降低生产成本方面纳米抗体结构简单易于体外表达，同时体外表达不易产生包涵体，生产工艺简单；同时纳米抗体的分子量小，结构简单，更有利于进行基因改造，纳米抗体人源化修饰等特性。黑色素瘤是由黑色素细胞癌化形成的一种最具侵袭性的发生于皮肤部位的恶性癌症。细胞周期素依赖性激酶5(cyclindependentkinase5；Cdk5)，属于...
【技术保护点】
1.一种Cdk5纳米抗体，其特征在于，所述Cdk5纳米抗体具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种Cdk5纳米抗体，其特征在于，所述Cdk5纳米抗体具有SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的Cdk5纳米抗体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将黑素瘤纳米抗体库进行第一轮淘洗，得到B16-Cdk5-VHH1；所述第一轮淘洗的Cdk5蛋白的包被浓度为18～22μg/ml；2)将所述步骤1)得到的B16-Cdk5-VHH1依次进行第二轮、第三轮和第四轮淘洗，得到噬菌体液；所述第二轮淘洗的Cdk5蛋白的包被浓度为8～12μg/ml；所述第三轮淘洗的Cdk5蛋白的包被浓度为3～8μg/ml；所述第四轮淘洗的Cdk5蛋白的包被浓度为3～8μg/ml；3)将所述步骤2)得到的噬菌体液与TG1菌液混合、感染后进行培养，得到菌株；4)将所述步骤3)得到的菌株与KM13辅助噬菌体混合、感染，将得到的感染物进行第一振荡培养后进行第一离心，将得到的第一沉淀经液体培养基重悬后进行第二振荡培养后，进行第二离心，将得到的第二上清液与封闭液混合、孵育后进行间接ELISA检测，检测第二上清液同Cdk5蛋白的反应性，以确定所述菌株与Cdk5蛋白具有反应性；所述第一振荡的温度为35～42℃，所述第二振荡的温度为28～32℃；所述第一离心的离心力为1700～1900g，所述第二离心的离心力为2000～2100g；5)将所述步骤4)与Cdk5蛋白具有反应性的菌株进行质粒提取，以所述质粒为模版，用质粒引物对进行PCR扩增，得到纳米抗体VHH片段，将所述纳米抗体VHH片段与表达载体连接，得到重组质粒；所述质粒引物包括质粒上游引物和质粒下游引物，所述质粒上游引物具有SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；所述质粒下游引物具有SEQIDNo.3所示的核苷酸序列；6)将所述步骤5)得到的重组质粒、pBAD18转入大肠杆菌，得到纳米抗体表达菌株，对所述纳米抗体表达菌株进行IPTG诱导后，提取得到诱导后的纳米抗体表达菌株的蛋白，根据蛋白分子量及His-tag标签对所述蛋白进行WesternBlotting鉴定，蛋白分子量为15kDa的蛋白为Cdk5纳米抗体。3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：范瑞文，齐淑慧，董常生，姬凯元，刘博，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西,14
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