一种检测鸡白细胞介素12含量的方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种检测鸡白细胞介素12含量的方法及其专用试剂盒。本发明专利技术利用chIL‑12单克隆抗体建立了针对chIL‑12在蛋白水平上的双夹心ELISA检测方法。通过实验证明：本发明专利技术的抗chIL‑12单克隆抗体具有良好的特异性和亲和力，能够准确地反映出血清或细胞上清中chIL‑12的含量，且本发明专利技术的检测方法快捷、高效又准确，解决了现有技术中采用荧光定量PCR检测方法带来的操作繁琐，耗时耗力，易受操作及其他外部条件影响等问题，不仅有助于评价chIL‑12在机体内的动态变化水平，为疾病的预防和治理提供很好的参考，而且有助于了解鸡类传染性疾病的发生、发展、转归情况及机体保护性免疫反应的动态。

A Method for Detecting Chicken Interleukin 12 Content and Its Special Kit

The invention discloses a method for detecting Chicken Interleukin 12 content and a special kit thereof. The invention establishes a double sandwich ELISA detection method for chIL 12 at protein level by using chIL 12 monoclonal antibody. Experiments show that the anti-chIL 12 monoclonal antibody of the invention has good specificity and affinity, can accurately reflect the content of chIL 12 in serum or cell supernatant, and the detection method of the invention is fast, efficient and accurate, which solves the complicated operation, time-consuming and labor-consuming, and is easy to be operated and other external strips brought about by the fluorescence quantitative PCR detection method in the prior art. These problems not only help to evaluate the dynamic changes of chIL 12 in vivo, provide a good reference for disease prevention and treatment, but also help to understand the occurrence, development, prognosis of chicken infectious diseases and the dynamics of protective immune response.

【技术实现步骤摘要】
一种检测鸡白细胞介素12含量的方法及其专用试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测鸡白细胞介素12(chIL-12)含量的方法及其专用试剂盒。
技术介绍
白细胞介素12(Interleukin-12，IL-12)是B细胞、巨噬细胞以及中性粒细胞等在受到各种刺激时释放的一种细胞因子。IL-12是目前所发现的细胞因子中对体内免疫活性细胞诱导和调节作用最强、范围最广的一种细胞因子。IL-12有多种生物学功能，在肿瘤、病毒性疾病及寄生虫病的免疫治疗中发挥重要的作用。单克隆抗体技术是利用在体外培养能大量无限增殖但不能分泌特异性抗体的骨髓瘤细胞和能产生特异性抗体但在体外不能无限增殖的B淋巴细胞进行细胞融合，获得既能够无限增值又能够分泌抗体的杂交瘤细胞。只有融合的杂交瘤细胞能够在选择培养基中存活和增殖，又经过三次亚克隆及间接ELISA方法的筛选，最终获得能分泌特异性识别单一抗原表位抗体的杂交瘤细胞，经小鼠腹腔内培养，即可无限制地大量获得单克隆抗体。夹心ELISA是利用纯化的抗体包被酶标板，洗涤后加入待检测的抗原，洗涤后加入酶标抗体进行反应，最后加入底物显色的一种酶联免疫吸附试验，该方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗chIL‑12的单克隆抗体，其结合chIL‑12氨基酸序列的第1‑98位或第99‑197位；所述chIL‑12氨基酸序列如序列表中序列2所示。

【技术特征摘要】
1.抗chIL-12的单克隆抗体，其结合chIL-12氨基酸序列的第1-98位或第99-197位；所述chIL-12氨基酸序列如序列表中序列2所示。2.抗chIL-12的单克隆抗体，是由保藏号为CGMCCNo.15893的杂交瘤细胞株LHK-1分泌的或由保藏号为CGMCCNo.15894的杂交瘤细胞株LHK-2分泌的。3.一株分泌抗chIL-12的单克隆抗体的杂交瘤细胞株LHK-1，其保藏号为CGMCCNo.15893。4.一株分泌抗chIL-12的单克隆抗体的杂交瘤细胞株LHK-2，其保藏号为CGMCCNo.15894。5.一种检测或辅助检测待测样品中chIL-12含量的酶联免疫试剂盒，其包括权利要求1或2所述的单克隆抗体和/或权利要求3或4所述的杂交瘤细胞株。6.权利要求1或2所述的单克隆抗体或权利要求3或4所述的杂交瘤细胞株或权利要求5所述的酶联免疫试剂盒在检测或辅助检测待测样品中chIL-12含量中的应用；或，权利要求1或2所述的单克隆抗体或权利要求3或4所述的杂交瘤细胞株在制备检测或辅助检测待测样品中chIL-12含量的产品中的应用。7.一种检测或辅助检测待测样品中chIL-12含量的方法，是以权利要求1所述的单克隆抗体为检测抗体、权利要求2所述的单克隆抗体为包被抗体的双抗体夹心ELISA检测方法。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：(1)将权利要求2所述的单克隆抗体包被到酶标板上，洗涤；(2)封闭(1)得到的酶标板，洗涤；(3)向(2)得到的酶标板中加入chIL-12标准品或待测样品，孵育，洗涤；(4)向(3)得到的酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑世军，刘海坤，王永强，李晓齐，曹红，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11