Gardenia jasminoides contains more than one kind of bioactive substance. The effective ingredient of Gardenia jasminoides is iridoid terpenoids, and the highest content is gardenoside, also known as geniposide. As gardenia fruit is the only natural source of gardenoside, gardenoside is completely dependent on Gardenia fruit. Screening gardenia-producing cells by plant cell engineering for large-scale culture is one of the effective ways to solve the shortage of Gardenia source. At present, there is no report on the production of gardenoside by cell culture. The invention effectively solves the contradiction between the growth of Gardenia cells and the decrease of gardenoside content, and can obtain fresh cells rich in gardenoside in a short time. The content of gardenoside in cultured cells is several times that of gardenoside in seed cells, and is not affected and restricted by natural conditions.
【技术实现步骤摘要】
通过组织培养获得栀子苷的方法
本专利技术是生物
,特别涉及一种采用植物细胞培养技术生产栀子苷的方法。
技术介绍
栀子为茜草科植物栀子Gardeniajasmi-noidesEllis的干燥成熟果实,具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、消肿止痛等作用,栀子苷是栀子的次生代谢产物,其化学结构为环烯醚萜的葡萄糖苷。栀子中含40余种生物活性物质,主要为环烯醚萜类和挥发油类,而国内外公认的栀子有效成分为环烯醚萜类物质,其中含量最高的为栀子苷,又称为京尼平苷,其苷元为京尼平。朱文佩等以不同成熟度的栀子果实为样品,采用高效液相色谱法测定,为确定最适采收期奠定基础,结果表明不同成熟度果实样品的栀子苷含量随成熟度提高而下降。这与何国振等报道的不同成熟期栀子果实中栀子苷含量变化结果一致;吴小燕等研究表明栀皮和栀仁中主要活性成分的分布是有一定特征规律的,其中环烯醚萜苷类的代表性成分栀子苷富集于栀仁(种子)中。由于栀子是栀子果实是栀子苷主要天然获得来源,栀子苷的获取完全依赖于栀子果实,而栀子苷的含量与栀子果实成熟度呈负相关,因此通过天然途径获取栀子苷成本较高,而且产量不稳定。通过植物细胞工程筛选产栀子细胞进行规模化培养是解决栀子来源短缺的有效途径之一。早在1989年,日本科学家就进行了栀子组织培养生产次生代谢产物的研究,而国内对栀子愈伤组织获得初生代谢产物和次生代谢产物的研究起步较晚。在获取初生代谢产物方面,石若夫等筛选出适宜栀子多糖合成的悬浮细胞株及培养条件。在获取次生代谢产物方面,钟青萍等筛选出适宜栀子愈伤组织生长和栀子黄色素产生的培养基。陈书安等为解决藏红花资源短缺问题 ...
【技术保护点】
1.通过细胞培养获得栀子苷的方法,包括如下步骤:A.栀子坐果期,当栀子果实的直径为2‑3mm时,用浓度为0.6‑1.2%的秋水仙素溶液处理栀子果,处理时长24‑36小时,处理结束后,用清水对存活的果实进行喷雾淋洗;B.采摘未成熟的新鲜栀子果实拨开取其种子并消毒,通过无菌操作将消毒处理的种子拨去种皮,并用解剖刀将脱皮的栀子仁按横切面切成两半,接种在脱分化培养基上,25℃左右室温下培养7‑10天,获得种仁愈伤组织;C.多倍体细胞系接种在MS固体培养基中,继代培养三次以上,每次继代培养的时间为7‑10天;D.得到的多倍体细胞接种在合成培养基中,25℃左右室温下培养10‑20天,得到富集栀子苷次生代谢产物的细胞;这里用A‑D表示这些步骤的先后次序。
【技术特征摘要】
1.通过细胞培养获得栀子苷的方法,包括如下步骤:A.栀子坐果期,当栀子果实的直径为2-3mm时,用浓度为0.6-1.2%的秋水仙素溶液处理栀子果,处理时长24-36小时,处理结束后,用清水对存活的果实进行喷雾淋洗;B.采摘未成熟的新鲜栀子果实拨开取其种子并消毒,通过无菌操作将消毒处理的种子拨去种皮,并用解剖刀将脱皮的栀子仁按横切面切成两半,接种在脱分化培养基上,25℃左右室温下培养7-10天,获得种仁愈伤组织;C.多倍体细胞系接种在MS固体培养基中,继代培养三次以上,每次继代培养的时间为7-10天;D.得到的多倍体细胞接种在合成培养基中,25℃左右室温下培养10-20天,得到富集栀子苷次生代谢产物的细胞;这里用A-D表示这些步骤的先后次序。2.根据权利要求1所述的方法,其中步骤A还可以为:对开花期的栀子进行诱导,具...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈建荣,刘芳,赵晨曦,唐伟卓,唐映红,
申请(专利权)人:长沙学院,
类型:发明
国别省市:湖南,43
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