一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，本发明专利技术建立了木香药材的UPLC指纹图谱，运用相似度分析、聚类分析和主成分分析对不同产地的木香药材UPLC指纹图谱进行了分析，并首次在指纹图谱的条件下同时检测其水溶性成分3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸的含量。本发明专利技术运用3种指纹图谱分析方法以及以3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸含量作为指标，较全面地评价了不同产地木香的质量，为木香的质量控制研究奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法及其应用
本专利技术属于药物分析及药物质量控制
，具体涉及一种木香药材指纹图谱的构建方法及其应用。
技术介绍
木香为菊科木香属植物木香AucklandialappaDecne.的干燥根，其性辛、苦，温。归脾、胃、大肠、三焦、胆经。木香生品具有行气止痛，健脾消食之功效。明代《本草纲目》曰：云木香“凡人理气药只生用，不见火，若实大肠，宜面煨熟用”，是治疗胃肠疾病的常用药。始载于《神农本草经》，列为上品。历代本草也均有记载，药用历史悠久。木香原产于印度，因曾引种到云南，故又称云木香，在云南、四川、甘肃、广西、西藏、陕西及中南诸省均有引种栽培。目前云南产量最大，为道地品种。现为《中国药典》收载品种。现代中药学表明，木香含有萜类、甾体、配糖体、生物碱、糖、氨基酸、脂肪酸及其酯等成分。近年来，木香药材种植产地不断增加，大部分文献都以木香脂溶性成分木香烃内酯及去氢木香烃内酯含量作为木香质量评价指标，水溶性成分检测鲜有报道。中药成分复杂，仅以几个化合物的含量作为质量的评价指标亦是不全面的。中药指纹图谱是指中药材或中药制剂经适当处理后采用一定的分析手段，得到能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。由于UPLC具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点，所以目前在中药指纹图谱技术中UPLC已经得到广泛应用。因此，本专利技术建立了木香UPLC指纹图谱，并在指纹图谱的条件下同时检测其水溶性成分3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量，并结合相似度分析、聚类分析和主成分分析对不同产地木香药材的质量进行了全面、有效的评价。专利技术内容本专利技术的目的在于提供一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法，该方法为木香药材的质量控制提供了较为全面、有效的快速评价方法。本专利技术是通过以下技术方案实现：一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：(a)对照品溶液的制备：取紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯20μg、10μg、15μg、15μg的溶液；精密称取3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，用80％甲醇制成每1ml含3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸20.3454μg的溶液；(b)供试品溶液的制备：取木香药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60-80％甲醇25-50ml，称定重量，超声处理15-45分钟，放冷，再称定重量，用60-80％甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；(c)超高相液相色谱测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.30ml/min；柱温为30℃；检测波长为254nm，进样体积为1μl，梯度洗脱表见下表：(d)指纹图谱的建立：将多批木香药材的色谱图，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行共有峰标识，建立木香药材的对照指纹图谱，确定具有8个共有峰，以3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.43、峰2：0.49、峰3：0.95、峰4：1.00、峰5：1.05、峰6：1.21、峰7：1.67、峰8：1.69，相对保留时间在规定值的±10％之内；(e)相似度评价：比较不同产地各批次木香药材的色谱图与对照指纹图谱的相似度；(f)聚类分析：运用SPSS20.0软件对不同产地的木香药材进行系统聚类，采用组间平均数联结法，以夹角余弦作为样品相似度的距离公式，得到不同产地的木香药材的聚类结果；(g)主成分分析：以8个共有峰的峰面积为数据，用SPSS20.0软件对其进行主成分分析，得出相关矩阵的特征值及其方差，确定主成分，计算权重值，判定在区分各产地木香指纹图谱中占了决定性作用的各峰，并针对主成分对木香药材进行综合评价，得到不同产地的木香药材的质量分析结果。优选的，步骤(b)供试品溶液的制备：取木香药材粉末，过四号筛，0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足损失的重量，摇匀，用0.22um滤膜过滤，取续滤液，即得。优选的，步骤(g)中，区分各产地木香指纹图谱中占了决定性作用的各峰分别为：峰4：3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、峰2：绿原酸和峰3。作为本专利技术进一步优选的技术方案，所述的一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法，还包括步骤(h)3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量测定，采用超高液相色谱仪测定，其中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.30ml/min；柱温为30℃；检测波长为327nm，进样体积为1μl，梯度洗脱表见下表：本专利技术还提供了上述木香药材UPLC指纹图谱的构建方法在木香药材质量检测中的应用。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术建立了木香药材的UPLC指纹图谱，运用相似度分析、聚类分析和主成分分析对不同产地的木香药材UPLC指纹图谱进行了分析，并首次在指纹图谱的条件下同时检测其水溶性成分3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量。本专利技术运用3种指纹图谱分析方法以及以3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量作为指标，较全面地评价了不同产地木香的质量，为木香的质量控制研究奠定基础。附图说明图1为13批木香药材UPLC指纹图谱叠加图；图2为13批木香药材UPLC指纹图谱共有模式图；图3为13批木香药材的聚类分析结果图；图4为主成分分析的碎石图；图5为旋转空间中的成分图。具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术，以下实施例为本专利技术具体的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受下述实施例的限制。1、仪器与试药1.1仪器Waters超高效液相色谱仪(沃特斯公司)，Agilent超高效液相色谱仪(安捷伦公司)，YMCTraitC18(100mm×2.1mm，1.9μm)色谱柱，万分之一天平(梅特勒-托利多公司，ME204E)，百万分之一天平(梅特勒-托利多公司，XP26)。数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。1.2试药木香药材来源于全国4个产地，经广东一方制药有限公司魏梅主任中药师鉴定为木香AucklandialappaDecne.的干燥根，具体信息见表1。绿原酸(含量：99.3％，批号：110753-201716)，紫丁香苷(批号：111574-201605)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(含量：97.3％，批号：111782-201706)对照品来自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱级、水为超纯水，其他试剂为分析纯。表1木香药材来源2、方法与结果2.1对照品溶液的制备取紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯20μg、10μg、15μg、15μg的溶液；精密称取3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品5.227mg，置25ml量瓶中，用80％甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含203.4543μg的贮备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（a）对照品溶液的制备：取紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯20μg、10μg、15μg、15μg的溶液；精密称取3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸对照品，用80%甲醇制成每1ml含3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸20.3454μg的溶液；（b）供试品溶液的制备：取木香药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60‑80%甲醇25‑50ml，称定重量，超声处理15‑45分钟，放冷，再称定重量，用60‑80%甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；（c）超高相液相色谱测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.30ml/min；柱温为30℃；检测波长为254nm，进样体积为1μl，梯度洗脱表见下表：

【技术特征摘要】
1.一种木香药材UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（a）对照品溶液的制备：取紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含紫丁香苷、绿原酸、木香烃内酯、去氢木香烃内酯20μg、10μg、15μg、15μg的溶液；精密称取3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，用80%甲醇制成每1ml含3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸20.3454μg的溶液；（b）供试品溶液的制备：取木香药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60-80%甲醇25-50ml，称定重量，超声处理15-45分钟，放冷，再称定重量，用60-80%甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；（c）超高相液相色谱测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.30ml/min；柱温为30℃；检测波长为254nm，进样体积为1μl，梯度洗脱表见下表：（d）指纹图谱的建立：将多批木香药材的色谱图，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行共有峰标识，建立木香药材的对照指纹图谱，确定具有8个共有峰，以3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.43、峰2：0.49、峰3：0.95、峰4：1.00、峰5：1.05、峰6：1.21、峰7：1.67、峰8：1.69，相对保留时间在规定值的±10%之内；（e）相似度评价：比较不同产地各批次木香药材的色谱图与对照指纹图谱的相似度；...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷桥仕，梁慧，童培珍，王燕雄，黎晓丽，索彩仙，彭劲源，陈向东，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44