一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法技术

本发明专利技术涉及分子检测技术领域，且公开了一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法，步骤一：PCR引物设计与合成，根据NCBI上预测的猪ACVR1基因序列，在NCBI中设计用于PCR的引物，引物稀释后终浓度为（10pmol/L）；步骤二：PCR扩增，以步骤一中提取的肌肉组织DNA为模板，利用引物进行PCR扩增，PCR扩增的反应程序；步骤三：扩增反应体系。该检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法，通过在PCR产物中引入了内对照酶切位点，克服了所用快酶NdeI切割PCR产物的效率相对较低，容易造成酶切不完全的弊端，可根据酶切产物的电泳图谱识别酶切不完全的情形，并且在酶切不完全的情况下，仍可根据各基因型的特征条带的状况来判别基因型，确保了基因型判别的准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法
本专利技术涉及分子检测
，具体为一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法。
技术介绍
ACVR1基因是胚胎发育和生长必不可少的，涉及了多细胞和组织类型，如肌肉、骨骼和神经系统等，并且在小鼠发育过程具有时空表达特异性。研究表明敲除ACVR1基因使得小鼠胚胎在发育早期就出现阻滞现象，因此研究ACVR1基因在组织/器官发育中的功能时多采用条件突变(conditionalmutants)。目前对ACVR1基因的研究主要集中在进行性肌肉骨化症(FibrodysplasiaOssificansProgressiva，FOP)以及神经胶质瘤(DiffuseIntrinsicPontineGlioma，DIPG)等疾病的研究上，并揭示了与两者相关的关键突变。目前，检测ACVR1基因rs324003968的基因型的方法有PCR-RFLP法、测序法、荧光PCR、基因芯片等。除了PCR-RFLP法外，其他方法均需昂贵设备或试剂、素质要求高的人员、繁琐的操作、高的检测成本。PCR-RFLP法操作简单，对仪器设备要求低，便于应用。因此，本专利技术提出了一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法。
技术实现思路
（一）解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法具备通过在PCR产物中引入了内对照酶切位点，克服了所用快酶NdeI切割PCR产物的效率相对较低，容易造成酶切不完全的弊端，可根据酶切产物的电泳图谱识别酶切不完全的情形，并且在酶切不完全的情况下，仍可根据各基因型的特征条带的状况来判别基因型，确保了基因型判别的准确性的优点，解决了目前ACVR1基因SNP位点基因分型的方法要求素质要求高的人员、繁琐的操作、高的检测成本的问题。（二）技术方案为实现上述的目的，本专利技术提供如下技术方案：一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物，具体如下：ACVR1基因PCR引物序列信息:>15dna:chromosomechromosome:Sscrofa10.2:15:72093370:72093970:1TCCCCAGGGGTGGATGTTGACCAAGGACCCTTGTCTGATCTTGCCCCCTTTCTCCTGCCTTCTCATTCTCATAACTAGAAGGTGAGGTCCTCCTTATTCCTTTTCTTCTGGTCTGATATGAAATACCCTTATACACTGAATTCTCCCTGACTTCTAGCAATTGCCATGATCAAGTTCAGGAAACCTAGACTTCAAGTATGTTAATAGAAACATAAACATTTTTCAAATCCTTATTTTTCTCACATTGCCTGACTAGGGACTCAAAATTCCTATTCAAAGTATCAGAAGTCCTACTTCATAGGTAAACAACAAGGTCCTACCTTATACCACAGGGAACTATATTCATTATCTTTTAATAATCTATAATGGAAACATATCTGAAAAGAATATATATATAGTGTGTGTATATACATATACTAAGAATATGTATATGTATATATATATGTGTGTAACAATTACGTTGCTATACACAAGAAACTAACACAACCTTGCACACCAACTACACTTCAATTAACAAACAATTCCCTGCTCCAATTCCCATCCCTTACAGATAGGTGATAATATGGGCTATGAAAATGATCACGCACATATAAAGGAAAAC下划线为SNP位点，加粗部分为引物位置>UntitledreversecomplementGTTTTCCTTTATATGTGCGTGATCATTTTCATAGCCCATATTATCACCTATCTGTAAGGGATGGGAATTGGAGCAGGGAATTGTTTGTTAATTGAAGTGTAGTTGGTGTGCAAGGTTGTGTTAGTTTCTTGTGTATAGCAACGTAATTGTTACACACATATATATATACATATACATATTCTTAGTATATGTATATACACACACTATATATATATTCTTTTCAGATATGTTTCCATTATAGATTATTAAAAGATAATGAATATAGTTCCCTGTGGTATAAGGTAGGACCTTGTTGTTTACCTATGAAGTAGGACTTCTGATACTTTGAATAGGAATTTTGAGTCCCTAGTCAGGCAATGTGAGAAAAATAAGGATTTGAAAAATGTTTATGTTTCTATTAACATACTTGAAGTCTAGGTTTCCTGAACTTGATCATGGCAATTGCTAGAAGTCAGGGAGAATTCAGTGTATAAGGGTATTTCATATCAGACCAGAAGAAAAGGAATAAGGAGGACCTCACCTTCTAGTTATGAGAATGAGAAGGCAGGAGAAAGGGGGCAAGATCAGACAAGGGTCCTTGGTCAACATCCACCCCTGGGGA。一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型的方法，具体步骤如下：步骤一：PCR引物设计与合成，根据NCBI上预测的猪ACVR1基因序列，在NCBI中设计用于PCR的引物，引物稀释后终浓度为（10pmol/L）；步骤二：PCR扩增，以步骤一中提取的肌肉组织DNA为模板，利用引物进行PCR扩增，PCR扩增的反应程序；步骤三：扩增反应体系，取（含染料）2×TaqMasterMix为10ul、灭菌去离子水（ddH2O）为7.7ul、正向引物（10pmol/L）Forwardprimer为0.15µl、反向引物（10pmol/L）Reverseprimer为0.15ul以及模板DNATemplates为2ul组成PCR扩增体系；步骤四：PCR产物检测，PCR扩增反应结束后，取5µl的反应液上样，用2%的琼脂糖凝胶检测，120V电压下电泳30min，结束后用凝胶成像系统在紫外灯下分析成像结果，用单一限制性内切酶NdeⅠ酶切PCR扩增产物，酶切反应条件为：37℃下，酶切2-3h；步骤五：酶切结果检测，酶切反应完毕，取10ul酶切产物进行3.0%琼脂糖凝胶电泳检测130V3min后100V47min分析酶切结果，且酶切结果为：目的条带305bp、244bp、61bp；步骤六：ACVR1基因rs324003968位点PCR产物测序。优选的，所述正向引物的序列信息为：5′-CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGCAAAGGCCATCGCAGAAGACAT-3′(SEQIDNO：1)，所述反向引物的序列信息为5′-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTGGGACACTGAGATTCAAGAG-3′(SEQIDNO：2)（三）有益效果与现有技术相比，本专利技术提供了一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法，具备以下有益效果：1、该检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物和方法，通过在PCR产物中引入了内对照酶切位点，通过A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物，具体如下：ACVR1基因PCR引物序列信息:>15dna:chromosome chromosome:Sscrofa10.2:15:72093370:72093970:1TCCCCAGGGGTGGATGTTGACCAAGGACCCTTGTCTGATCTTGCCCCCTTTCTCCTGCCTTCTCATTCTCATAACTAGAAGGTGAGGTCCTCCTTATTCCTTTTCTTCTGGTCTGATATGAAATACCCTTATACACTGAATTCTCCCTGACTTCTAGCAATTGCCATGATCAAGTTCAGGAAACCTAGACTTCAAGTATGTTAATAGAAACATAAACATTTTTCAAATCCTTATTTTTCTCACATTGCCTGACTAGGGACTCAAAATTCCTATTCAAAGTATCAGAAGTCCTACTTCATAGGTAAACAACAAGGTCCTACCTTATACCACAGGGAACTATATTCATTATCTTTTAATAATCTATAATGGAAACATATCTGAAAAGAATATATATATAGTGTGTGTATATACATATACTAAGAATATGTATATGTATATATATATGTGTGTAACAATTACGTTGCTATACACAAGAAACTAACACAACCTTGCACACCAACTACACTTCAATTAACAAACAATTCCCTGCTCCAATTCCCATCCCTTACAGATAGGTGATAATATGGGCTATGAAAATGATCACGCACATATAAAGGAAAAC下划线为SNP位点，加粗部分为引物位置 >Untitled reverse complementGTTTTCCTTTATATGTGCGTGATCATTTTCATAGCCCATATTATCACCTATCTGTAAGGGATGGGAATTGGAGCAGGGAATTGTTTGTTAATTGAAGTGTAGTTGGTGTGCAAGGTTGTGTTAGTTTCTTGTGTATAGCAACGTAATTGTTACACACATATATATATACATATACATATTCTTAGTATATGTATATACACACACTATATATATATTCTTTTCAGATATGTTTCCATTATAGATTATTAAAAGATAATGAATATAGTTCCCTGTGGTATAAGGTAGGACCTTGTTGTTTACCTATGAAGTAGGACTTCTGATACTTTGAATAGGAATTTTGAGTCCCTAGTCAGGCAATGTGAGAAAAATAAGGATTTGAAAAATGTTTATGTTTCTATTAACATACTTGAAGTCTAGGTTTCCTGAACTTGATCATGGCAATTGCTAGAAGTCAGGGAGAATTCAGTGTATAAGGGTATTTCATATCAGACCAGAAGAAAAGGAATAAGGAGGACCTCACCTTCTAGTTATGAGAATGAGAAGGCAGGAGAAAGGGGGCAAGATCAGACAAGGGTCCTTGGTCAACATCCACCCCTGGGGA。...

【技术特征摘要】
1.一种检测ACVR1基因SNP位点基因分型PCR引物，具体如下：ACVR1基因PCR引物序列信息:>15dna:chromosomechromosome:Sscrofa10.2:15:72093370:72093970:1TCCCCAGGGGTGGATGTTGACCAAGGACCCTTGTCTGATCTTGCCCCCTTTCTCCTGCCTTCTCATTCTCATAACTAGAAGGTGAGGTCCTCCTTATTCCTTTTCTTCTGGTCTGATATGAAATACCCTTATACACTGAATTCTCCCTGACTTCTAGCAATTGCCATGATCAAGTTCAGGAAACCTAGACTTCAAGTATGTTAATAGAAACATAAACATTTTTCAAATCCTTATTTTTCTCACATTGCCTGACTAGGGACTCAAAATTCCTATTCAAAGTATCAGAAGTCCTACTTCATAGGTAAACAACAAGGTCCTACCTTATACCACAGGGAACTATATTCATTATCTTTTAATAATCTATAATGGAAACATATCTGAAAAGAATATATATATAGTGTGTGTATATACATATACTAAGAATATGTATATGTATATATATATGTGTGTAACAATTACGTTGCTATACACAAGAAACTAACACAACCTTGCACACCAACTACACTTCAATTAACAAACAATTCCCTGCTCCAATTCCCATCCCTTACAGATAGGTGATAATATGGGCTATGAAAATGATCACGCACATATAAAGGAAAAC下划线为SNP位点，加粗部分为引物位置>UntitledreversecomplementGTTTTCCTTTATATGTGCGTGATCATTTTCATAGCCCATATTATCACCTATCTGTAAGGGATGGGAATTGGAGCAGGGAATTGTTTGTTAATTGAAGTGTAGTTGGTGTGCAAGGTTGTGTTAGTTTCTTGTGTATAGCAACGTAATTGTTACACACATATATATATACATATACATATTCTTAGTATATGTATATACACACACTATATATATATTCTTTTCAGATATGTTTCCATTATAGATTATTAAAAGATAATGAATATAGTTCCCTGTGGTATAAGGTAGGACCTTGTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新建，叶建伟，李秀领，王克君，韩雪蕾，乔瑞敏，吕刚，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41