一种非洲猪瘟的合成基因、建立方法以及mRNA疫苗技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种非洲猪瘟的合成基因、建立方法以及mRNA疫苗，非洲猪瘟病毒mRNA疫苗，含有包被的非洲猪瘟的mRNA；非洲猪瘟病毒mRNA疫苗的制备方法为将重组K205R‑IRES‑A104R‑IRES‑E183L基因连接至pMD19‑T载体，构成亲本pMD19‑K205R‑IRES‑A104R‑IRES‑E183L质粒；将亲本质粒转化感受态细胞，扩增后提取质粒即克隆质粒，在克隆质粒中提取目的片段；将目的片段进行体外转录即得mRNA。本发明专利技术非洲猪瘟mRNA疫苗，填补现有的空白区域、用于预防ASFV感染；克隆质粒制备简单，成本较低，适用于产业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种非洲猪瘟的合成基因、建立方法以及mRNA疫苗
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种非洲猪瘟的合成基因、建立方法以及mRNA疫苗。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)引起的猪的一种病毒性疾病，是一种急性、热性、高度接触性传染病，其常表现出全身出血、呼吸障碍和神经症状等临床症状，具有病程时间短、高病死率等特征，在家猪中导致的死亡率接近100％，因此我国将其列为一类传染病，同时该病也是世界动物卫生组织(OIE)的法定报告动物疫病之一。ASFV主要在巨噬细胞的细胞质中复制，并且是非洲猪瘟病毒科中唯一成员，也是唯一由节肢动物传播的DNA病毒。2018年8月2日经中国动物卫生与流行病学中心诊断，沈阳市发生第一例非洲猪瘟疫情，截至2018年11月23日共发生了74起非洲猪瘟疫情，全国累计扑杀生猪60万头，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。近年来RNA分子领域相关技术突破性进展，mRNA疫苗在流感病毒、埃博拉病毒和寨卡病毒等多种传染病上取得了一定的研究本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非洲猪瘟病毒合成基因，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒合成基因为K205R‑IRES‑A104R‑IRES‑E 183L，序列为SEQ ID NO：1。

【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒合成基因，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒合成基因为K205R-IRES-A104R-IRES-E183L，序列为SEQIDNO：1。2.一种如权利要求1所述非洲猪瘟病毒合成基因的建立方法，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒合成基因的建立方法包括：步骤一：合成K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因片段，将合成K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因片段用引物P1、P2进行扩增，构成重组K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因；步骤二：将重组K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因连接至pMD19-T载体，构成亲本pMD19-K205R-IRES-A104R-IRES-E183L质粒；步骤三：将上述亲本质粒转化感受态细胞，扩增后提取质粒即克隆质粒，在克隆质粒中提取目的片段；步骤四：将上述目的片段进行体外转录即得合成基因K205R-IRES-A104R-IRES-E183L。3.如权利要求2所述的非洲猪瘟病毒合成基因的建立方法，其特征在于，其特征在于，所述步骤一具体包括：K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因片段中三基因K205R、A104R和E183L由IRES链接；IRES能招募核糖体对合成K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因进行翻译；IRES与外源cDNA融合，IRES能独立地起始翻译。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：徐志文，朱玲，孙贤刚，李飞，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51