一种延缓香蕉组培苗生长的培养基及培养方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养技术领域，具体的提供了一种延缓香蕉组培苗生长的培养基及培养方法。本发明专利技术的培养基通过改变MS培养基中的物质成份及含量，添加脱落酸、烯效唑和卡拉霉素三种不同的激素，并同时添加生长抑制剂甘露醇和葡萄糖，有效地控制香蕉种苗在正常组培室温度条件下的生长速度，减少了种质保存中继代培养的次数，且不用低温保存、不用日光灯补充光照，也节约了能源，从很大程度上节省了长期保存中所需的成本。

【技术实现步骤摘要】
一种延缓香蕉组培苗生长的培养基及培养方法
本专利技术属于植物组织培养
，具体的提供了一种延缓香蕉组培苗生长的培养基及培养方法。
技术介绍
香蕉属芭蕉科（Musaceae）芭蕉属（Musa），目前，在世界范围内，最广泛商业种植的为MusaAAACavendish亚组的香蕉，又称中国香牙蕉。香蕉是无性繁殖作物，是依靠香蕉植株球茎发生的侧芽(俗称吸芽)来延续生命，为了保存现有品种，开发新品种，国家香蕉改良协会（INIBAP）于1985年在比利时鲁文大学设有香蕉种源保存及转输中心，收集并以组织培养法保存全球香蕉种源1050个。香蕉组培苗生长迅速，28℃常规继代周期为20d-30d，如不及时进行继代转接，香蕉试管苗衰老黄化，长势弱，容易遭受微生物感染，而导致继代后恢复生长较缓慢且污染率大幅升高，而继代次数增加往往难以维持香蕉试管苗的遗传稳定性。常规试管保存继代时间只有3~4个月，无法满足香蕉种质资源保存的需要。目前，也有不少人想出一些延缓香蕉组培苗生长的方法，但这些方法大多需要将香蕉组培苗放到低温冷库中保存，通过长期低温培养来延缓种苗的生长，达到减少继代次数的目的。低温培养需一定的设施条件，同时增加了电力的消耗，不利于推广应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述缺陷，提供一种常温下可延长继代时间，且成本更低、更利于推广应用的延缓香蕉组培苗生长的培养基及培养方法。本专利技术的技术方案：一种延缓香蕉组培苗生长的培养基，包括如下体积比成分：硝酸钾(KNO3)712～760份，硝酸铵(NH4NO3)619～660份，硫酸镁(SO4·7H2O)139～148份，磷酸二氢钾(KH2PO4)64～68份，氯化钙(CaCl2·2H2O)165～176份，硫酸锰(MnSO4·4H2O)5.58～11.15份，硫酸锌(ZnSO4·7H2O)2.15～4.3份，硼酸(H3BO3)1.55～3.1份，碘化钾(KI)0.249～0.332份，钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)0.075～0.1份，硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.008～0.01份，氯化钴(CoCl2·6H2O)0.008～0.01份，乙二胺钠(Na2EDTA)18.7～27.9份，硫酸亚铁（FeSO4·4H2O）13.9～20.9份，肌醇(C6H12O6)50～100份，烟酸(C6H5NO2)0.25～0.5份，盐酸吡哆醇(C8H11NO3.HCl)0.25～0.5份，盐酸硫胺素(C12H17ClN4OS·HCl)0.05～0.1份；脱落酸（ABA）0.75～1.00份，烯效唑（S3307）0.50～0.75份，卡拉霉素（Kan）20～30份；葡萄糖5000～7500份，甘露醇15000～25000份；蔗糖15000～20000份，琼脂4500～6000份。本专利技术的另一个技术方案：一种延缓香蕉组培苗生长的培养方法，包括如下步骤：（1）培养基的配制：称量：按比例称取权利要求1中除卡拉霉素和琼脂以外的培养基其余组分，加蒸馏水充分溶解，得到溶解液；再称取琼脂粉加入溶解液中煮沸，然后加蒸馏水定容至1000份；将步骤处理的培养基的pH值调节至5.5～5.8，得到配置培养基；将配置培养基分装入组织培养瓶；将装有培养基的组织培养瓶放入灭菌锅进行高压灭菌，在121～125℃条件下灭菌20～30分钟；灭菌结束后，将装有培养基的组织培养瓶转移至接种室，待冷却至40～50℃，用一次性注射器将卡拉霉素加入到培养瓶中，制得本专利技术的培养基。（2）接种培养接种：在无菌操作台上接种，每40ml的培养基扦插入4-5个香蕉组培苗丛生芽；培养：将接种好的培养瓶放入组培室中培养。进一步的，步骤中，用1mol/L的盐酸或1mol/L的氢氧化钠溶液将步骤的培养基的pH值调节至5.5～5.8。进一步的，步骤中，培养室温度22-24℃，不需要开日光灯，培养室的窗户用透明膜密封。进一步的，步骤中，培养1-2个月后，在培养瓶外侧包覆一层制冷剂，所述制冷剂为冰块。等冰块融化后再将制冷剂拆下来。进一步的，所述制冷剂放置于制冷袋内，所述制冷袋包括长方形的袋体，所述袋体中部设有夹层、两侧设有相匹配的魔术贴或卡扣，所述制冷剂放置于所述夹层内。将冰块放到夹层内后，将袋体包覆在培养瓶外侧，并通过魔术贴或卡扣固定好。袋体尽量包覆在培养瓶的中上部，可3-6个培养瓶共用一个制冷袋，即将几个培养瓶凑成一圈后再将制冷袋沿培养瓶外圈包覆，操作方便、节约制冷袋的使用量。本专利技术优点：1、本专利技术通过改变培养基中物质成份及含量，添加三种不同的激素，并同时添加生长抑制剂甘露醇和葡萄糖，有效地控制香蕉种苗在正常组培室温度条件下的生长速度，减少了种质保存中继代培养的次数，且不用低温保存、不用日光灯补充光照，也节约了能源，从很大程度上节省了长期保存中所需的成本。2、在香蕉组织培养初期，在培养瓶外侧包覆可拆卸的冰块，可进一步延缓种苗的生长速度，且可提高香蕉组织对温度变化的适应能力，进而提高炼苗移栽的成活率。附图说明图1为制冷袋的结构示意图；图中的附图标号为：1-袋体，2-夹层，3-魔术贴，4-制冷剂。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。实施例1一种延缓香蕉组培苗生长的培养方法，包括如下步骤：一、培养基配方：以1L培养基计，由以下组分组成：硝酸钾712mg，硝酸铵619mg，硫酸镁139mg，磷酸二氢钾65mg，氯化钙165mg，硫酸锰6.0mg，硫酸锌2.2mg，硼酸1.6mg，碘化钾0.25mg，钼酸钠0.075mg，硫酸铜0.008mg，氯化钴0.008mg，乙二胺钠18.7mg，硫酸亚铁13.9～20.9mg，肌醇50mg，烟酸0.25mg，盐酸吡哆醇0.25mg，盐酸硫胺素0.05mg；脱落酸0.75mg，烯效唑0.50mg，卡拉霉素20mg，葡萄糖5000mg，甘露醇20000mg，蔗糖15000mg，琼脂4500mg，余量为水。培养方法：（1）培养基的配制：称量：按比例称取配方中除卡拉霉素和琼脂以外的培养基其余组分，加蒸馏水充分溶解，得到溶解液。再称取琼脂粉加入溶解液中煮沸，然后加蒸馏水定容至1L。用1mol/L的盐酸将步骤处理的培养基的pH值调节至5.5，得到配置培养基。将配置培养基分装入组织培养瓶，每瓶分装40ml，1升分装25瓶。将装有培养基的组织培养瓶放入灭菌锅进行高压灭菌，在121～125℃条件下灭菌25分钟；灭菌结束后，将装有培养基的组织培养瓶转移至接种室，待冷却至43～45℃，用一次性注射器将卡拉霉素加入到培养瓶中，制得本专利技术的培养基。（2）接种培养接种：在无菌操作台上接种，每40ml的培养基扦插入4-5个香蕉组培苗丛生芽，丛生芽切为单个芽，长度2-3cm；所述香蕉组培苗丛生芽为已继代5次的香蕉组培苗，资源品系代号为B6变异。培养：本试验于2016年6月23日开始剪切分株接种，接种好后放入培养室培养，培养室温度22℃，关闭日光灯，培养室的窗户用透明膜密封，透进来部分自然光。对照实施例1以不添加任何激素和生长抑制剂的MS培养基为对照。即与实施例1相比，配方中少了脱落酸、烯效唑、卡拉霉素、葡萄糖和甘露醇。操作步骤与实施例1的相同。2017年3月23日实施例1的组培苗株高5.3厘米，生长时间8个月，叶片有少量枯黄，丛本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种延缓香蕉组培苗生长的培养基，其特征在于，包括如下体积比成分：硝酸钾712～760份，硝酸铵619～660份，硫酸镁139～148份，磷酸二氢钾64～68份，氯化钙 165～176份，硫酸锰5.58～11.15份，硫酸锌2.15 ～4.3份，硼酸1.55 ～3.1份，碘化钾0.249 ～0.332份，钼酸钠0.075 ～ 0.1份， 硫酸铜0.008 ～ 0.01份，氯化钴 0.008 ～ 0.01份，乙二胺钠18.7～27.9份，硫酸亚铁13.9～20.9份，肌醇50～100份，烟酸0.25～0.5份，盐酸吡哆醇0.25～0.5份，盐酸硫胺素 0.05 ～ 0.1份；脱落酸0.75～1.00 份，烯效唑0.50 ～0.75份，卡拉霉素20～30 份；葡萄糖5000～7500份，甘露醇 15000 ～ 25000份；蔗糖15000 ～ 20000份，琼脂 4500 ～ 6000份。

【技术特征摘要】
1.一种延缓香蕉组培苗生长的培养基，其特征在于，包括如下体积比成分：硝酸钾712～760份，硝酸铵619～660份，硫酸镁139～148份，磷酸二氢钾64～68份，氯化钙165～176份，硫酸锰5.58～11.15份，硫酸锌2.15～4.3份，硼酸1.55～3.1份，碘化钾0.249～0.332份，钼酸钠0.075～0.1份，硫酸铜0.008～0.01份，氯化钴0.008～0.01份，乙二胺钠18.7～27.9份，硫酸亚铁13.9～20.9份，肌醇50～100份，烟酸0.25～0.5份，盐酸吡哆醇0.25～0.5份，盐酸硫胺素0.05～0.1份；脱落酸0.75～1.00份，烯效唑0.50～0.75份，卡拉霉素20～30份；葡萄糖5000～7500份，甘露醇15000～25000份；蔗糖15000～20000份，琼脂4500～6000份。2.一种延缓香蕉组培苗生长的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）培养基的配制：称量：按比例称取权利要求1中除卡拉霉素和琼脂以外的培养基其余组分，加蒸馏水充分溶解，得到溶解液；再称取琼脂粉加入溶解液中煮沸，然后加蒸馏水定容至1000份；将步骤处理的培养基的pH值调节至5.5～5.8，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许娟，石云平，李小泉，苏祖祥，林茜，韦绍龙，胡一凤，桂杰，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西,45