一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，属于食品安全技术领域。该方法是将待检物质中的菌体细胞进行破碎处理释放出DNA，萃取除杂后获得粗提DNA溶液，向粗提DNA溶液中加入氨基磁珠，孵育捕获DNA；建立阪崎克罗诺杆菌特异性PCR反应，以捕获的DNA为模板进行PCR扩增；设计阪崎克罗诺杆菌的DNA探针，将胶体金与DNA探针进行孵育，然后进行老化获得胶体金探针，将PCR产物与胶体金探针混合杂交，加入MgSO4溶液观察颜色变化。本发明专利技术方法步骤简单，特异性好，用时较短，可以实现快速检测，无需抗体等昂贵试剂，成本低。本发明专利技术适用于快速检测食品中的阪崎克罗诺杆菌。

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法
本专利技术涉及一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，属于食品安全

技术介绍
阪崎克罗诺杆菌(Cronobactersakazakii)，原阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii)，是一种含周身鞭毛、能运动并兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢的粗短杆菌。该菌可引起婴幼儿死亡，尤其是对早产儿、出生体重轻的婴儿或免疫受损婴儿的威胁最大，严重者可导致败血症、脑膜炎或坏死性小肠结肠炎，报告病例的病死率达20％～50％，幸存者常有严重的神经系统后遗症。阪崎克罗诺杆菌是婴儿配方乳粉主要的微生物安全指标，阪崎克罗诺杆菌的检测与控制已经成为影响婴儿食品安全的重要因素。因此建立一种高效、快速的检测方法尤为重要。与传统的基于微生物培养的检测方法相比，聚合酶链反应(PCR)是细菌检测的一个里程碑，PCR反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它最大特点就是能将微量的DNA大幅增加。因此从理论上来说，很少的菌就能在很短的时间内被检测到。然而当PCR用于检测阪崎克罗诺杆菌的主要污染源奶粉时，由于奶粉中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将待检物质中所含菌的菌体细胞进行破碎处理释放出DNA，萃取除杂后获得粗提DNA溶液，2)向步骤1)的粗提DNA溶液中加入活化好的氨基磁珠，孵育捕获粗提DNA溶液中的DNA；3)建立阪崎克罗诺杆菌的特异性PCR扩增反应，以步骤2)捕获到的DNA为模板进行PCR扩增，获得PCR产物；4)设计阪崎克罗诺杆菌的DNA探针，将胶体金与DNA探针进行孵育，然后加入磷酸缓冲液进行老化，获得胶体金探针；5)将步骤3)获得的PCR产物与步骤4)获得胶体金探针进行混合杂交，然后加入MgSO4溶液后5min内观察颜色变化，若...

【技术特征摘要】
1.一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将待检物质中所含菌的菌体细胞进行破碎处理释放出DNA，萃取除杂后获得粗提DNA溶液，2)向步骤1)的粗提DNA溶液中加入活化好的氨基磁珠，孵育捕获粗提DNA溶液中的DNA；3)建立阪崎克罗诺杆菌的特异性PCR扩增反应，以步骤2)捕获到的DNA为模板进行PCR扩增，获得PCR产物；4)设计阪崎克罗诺杆菌的DNA探针，将胶体金与DNA探针进行孵育，然后加入磷酸缓冲液进行老化，获得胶体金探针；5)将步骤3)获得的PCR产物与步骤4)获得胶体金探针进行混合杂交，然后加入MgSO4溶液后5min内观察颜色变化，若溶液仍呈现红色表明该待检测物质中含有阪崎克罗诺杆菌，若溶液由红色变成蓝紫色表明该待检测物质中不含有阪崎克罗诺杆菌。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)是将待检物质离心后重悬于pH为4-11的TEbuffer溶液中，添加0μL-50μL蛋白酶K孵育，然后在90℃-100℃下高温处理后进行冰浴，再用体积比为25:24:1的苯酚-氯仿-异戊醇溶液进行萃取，获得粗提DNA溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述活化好的氨基磁珠的添加量为：每10mL粗提DNA溶液中加入0.1mg活化好的氨基磁珠。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述孵育捕获是...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜毓君，满朝新，王蕊，潘瑞丽，孙露宏，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23