CRISPR/Cas9质粒及其构建方法、使用方法技术

CRISPR/Cas9质粒及其构建方法、使用方法，属于生物技术领域。CRISPR/Cas9质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。本发明专利技术使用CRISPR/Cas9技术构建了用于茭白人工育种的CRISPR/Cas9质粒，通过该质粒转化菰黑粉菌，可得到基因敲除菌株，有利于更加便捷高效地用于茭白的人工育种等。

【技术实现步骤摘要】
CRISPR/Cas9质粒及其构建方法、使用方法
本专利技术属于生物
，具体涉及CRISPR/Cas9质粒及其构建方法、使用方法。
技术介绍
菰黑粉菌（Ustilagoesculenta）是一种独特的病原真菌，其侵染茭白植株（Zizanialatifolia）后可抑制植株抽穗开花并刺激茎基部膨大形成可食用的茭白。在东亚及东南亚地区尤其是中国，茭白是一种营养很高的水生蔬菜，也是一种重要的药材。但茭白的育种一直采用很古老的方法，耗费了巨大的人力物力，科研工作者一直致力于优化茭白的人工育种。CRISPR/Cas9技术是近几年来快速发展的一种基因编辑技术，现已被成功运用于许多植物的基因组编辑中。基于上述问题，申请人成功构建CRISPR/Cas9质粒，经试验发现该质粒经原生质体转化，可敲除菰黑粉菌中的特定基因，得到缺失菌株，将缺失菌株接种茭白植株后获得正常孕茭的茭白。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供CRISPR/Cas9质粒及其构建方法、使用方法的技术方案。所述的一种含有如SEQIDNo.3所示核苷酸序列的CRISPR/Cas9质粒。所述的CRISPR/C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有如SEQ ID No.3所示核苷酸序列的CRISPR/Cas9质粒。

【技术特征摘要】
1.一种含有如SEQIDNo.3所示核苷酸序列的CRISPR/Cas9质粒。2.如权利要求1所述的CRISPR/Cas9质粒在茭白人工育种中的应用。3.如权利要求1所述的CRISPR/Cas9质粒作为菰黑粉菌UET1或UET2敲除基因的原核表达载体的应用。4.如权利要求1所述的CRISPR/Cas9质粒的构建方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1）使用限制性内切酶ACC65I将pMS7质粒进行单酶切，使其线性化并回收片段，所述pMS7质粒的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；2）将Itd1基因序列、scaffold、U6终...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雅芬，叶子弘，于金梦，夏文强，俞晓平，崔海峰，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33