The invention discloses a method for rapid detection of peanut allergen protein Arah2. The mast cell of rat basophilic leukemia (RBL_2H3) wrapped in magnetic beads/gold nanoparticles/alginate/graphene oxide composite hydrogel is fixed on a glassy carbon electrode to construct a mast cell sensor, and the mast cell reaction stimulated by allergen protein Arah2 is electrochemically fractionated. The content of allergen protein Ara H2 was recorded and determined by electrochemical impedance spectroscopy. The developed cell sensor can detect Arah2 in the range of 0.02 to 0.1 ng/mL with a detection limit of 8 pg/mL. Compared with the ELISA kit on the market, the method has the advantages of simple operation, high sensitivity, accurate and reliable detection results and wide application prospects.
【技术实现步骤摘要】
一种快速检测花生过敏原蛋白Arah2的方法
本专利技术涉及生物-电化学领域,具体涉及一种用于快速检测花生过敏原蛋白Arah2的新方法。
技术介绍
近年来,食物过敏对公众健康产生了严重威胁,患病率为4%至5%。花生在食品工业中的广泛应用使得花生过敏成为一个主要的健康问题。目前检测过敏原方法中应用最为广泛的是皮肤试验,它具有快速真实诊断过敏症的特点,但其操作需要对患者皮肤造成一定损伤,检测结果无法定量;而常用的酶联免疫吸附试验(ELISA)和PCR检测方法的成本高,实验复杂,对操作技术和实验环境要求高,检测结果易存在假阳性。
技术实现思路
针对以上问题,本专利技术提供了一种细胞传感器、其制备方法以及利用该细胞传感器快速检测花生过敏原蛋白Arah2的方法,该细胞传感器以肥大细胞作为传感介质,采用电化学阻抗谱作为指标,突破了常规检测评价的束缚,为快速检测花生过敏原蛋白提供一条崭新的途径。本专利技术的一种细胞传感器的制备方法,包括以下步骤:1)、混合凝胶的制备:将氧化石墨烯与DMEM培养液按质量体积比为0.1g:100mL的比例混合,超声处理4-6min,使得氧化石墨烯均匀地分散在DMEM培养液中得到氧化石墨烯混合液,然后向含有1%海藻酸钠的DMEM培养液中滴加占DMEM培养液质量分数为10%的氧化石墨烯混合液,制得海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶,之后向凝胶中添加纳米磁珠使得凝胶中的纳米磁珠的含量为1mg/mL,得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠凝胶,再向凝胶中添加纳米金粒子,使得凝胶中纳米金的含量为0.4mg/mL,得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠/纳米金混合凝胶;2)、 ...
【技术保护点】
1.一种细胞传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:1)、混合凝胶的制备:将氧化石墨烯与DMEM培养液按质量体积比为0.1g:100mL的比例混合,超声处理4‑6min,使得氧化石墨烯均匀地分散在DMEM培养液中得到氧化石墨烯混合液,然后向含有1%海藻酸钠的DMEM培养液中滴加占DMEM培养液质量分数为10%的氧化石墨烯混合液,制得海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶,之后向凝胶中添加纳米磁珠使得凝胶中的纳米磁珠的含量为1mg/mL,得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠凝胶,再向凝胶中添加纳米金粒子,使得凝胶中纳米金的含量为0.4mg/mL,得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠/纳米金混合凝胶;2)、肥大细胞RBL‑2H3的培养:在37℃、CO2含量为5%的培养环境中,于含有体积浓度为10%的胎牛血清的DMEM培养基中培养肥大细胞RBL‑2H3 2~3天,将肥大细胞与小鼠单克隆Ara h2 IgG1抗体孵育30min,之后收集细胞得到肥大细胞悬浮液;3)、细胞固定:将细胞悬浮液与混合凝胶按体积比1:1混合,混匀后吸取20μL滴加在电极的表面,然后浸没于CaCl2溶液中进行固定,固定6min,并置于 ...
【技术特征摘要】
1.一种细胞传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:1)、混合凝胶的制备:将氧化石墨烯与DMEM培养液按质量体积比为0.1g:100mL的比例混合,超声处理4-6min,使得氧化石墨烯均匀地分散在DMEM培养液中得到氧化石墨烯混合液,然后向含有1%海藻酸钠的DMEM培养液中滴加占DMEM培养液质量分数为10%的氧化石墨烯混合液,制得海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶,之后向凝胶中添加纳米磁珠使得凝胶中的纳米磁珠的含量为1mg/mL,得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠凝胶,再向凝胶中添加纳米金粒子,使得凝胶中纳米金的含量为0.4mg/mL,得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠/纳米金混合凝胶;2)、肥大细胞RBL-2H3的培养:在37℃、CO2含量为5%的培养环境中,于含有体积浓度为10%的胎牛血清的DMEM培养基中培养肥大细胞RBL-2H32~3天,将肥大细胞与小鼠单克隆Arah2IgG1抗体孵育30min,之后收集细胞得到肥大细胞悬浮液;3)、细胞固定:将细胞悬浮液与混合凝胶按体积比1:1混合,混匀后吸取20μL滴加在电极的表面,然后浸没于CaCl2溶液中进行固定,固定6min,并置于5%CO2的37℃培养箱孵育5min,制备得到细胞传感器。2.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员:蒋栋磊,葛攀玮,葛庆丰,王立峰,鞠兴荣,
申请(专利权)人:南京财经大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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