【技术实现步骤摘要】
一种基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法
本专利技术属于生物技术及纳米材料领域，特别涉及一种基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法。
技术介绍
细胞外囊泡是一类细胞产生的存在于细胞外的脂质囊泡，具体包括凋亡小体、外泌体、细胞出芽囊泡。外泌体是一种细胞分泌的具有脂质双分子层结构的纳米囊泡，粒径分布为30-150nm，包含有脂质，蛋白质和核酸等物质，在细胞间的相互通讯中有十分重要的作用。已有的研究证实外泌体广泛的参与多种生理及病理进程，可作为生物标记物用于疾病的筛查和诊断。因此对外泌体的分离富集在临床和科研领域都具有十分重要的意义。但是由于外泌体的粒径太小，密度(1.10-1.19g/ml)与水接近，目前缺乏合适的方法高效高纯度的分离外泌体。目前常用的分离手段有超速离心法、聚合物沉淀法、凝胶排阻色谱法、免疫富集法。超速离心法是基于外泌体与样本溶液中其它成分的密度差异，分步离心除去其它杂质后再用高转速离心的方法分离得到外泌体。但此方法需要昂贵的离心设备，离心步骤耗时较长。聚合物沉淀法是借鉴分离病毒的PEG沉淀法发展而来，成本低并且分离步骤简单，但其得到的外泌体通常...
【技术保护点】
1.一种基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于包含如下步骤：1)将锚定分子‑金属离子络合剂分子复合物与含有细胞外囊泡的待分离液体共孵育，将所述的分子复合物锚定到细胞外囊泡上，2)将连结有金属离子络合剂的分选颗粒与金属离子溶液混合，孵育，分离出分选颗粒；3)将步骤2)分离出的分选颗粒与步骤1)得到的连结有分子复合物的胞外囊泡混合，孵育使细胞外囊泡与分选颗粒连结在一起；4)分离出分选颗粒‑细胞外囊泡复合体；5)加入洗脱剂使细胞外囊泡与分选颗粒分离；6)分离出分选颗粒，剩余溶液中即为分离得到的细胞外囊泡。
【技术特征摘要】
1.一种基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于包含如下步骤：1)将锚定分子-金属离子络合剂分子复合物与含有细胞外囊泡的待分离液体共孵育，将所述的分子复合物锚定到细胞外囊泡上，2)将连结有金属离子络合剂的分选颗粒与金属离子溶液混合，孵育，分离出分选颗粒；3)将步骤2)分离出的分选颗粒与步骤1)得到的连结有分子复合物的胞外囊泡混合，孵育使细胞外囊泡与分选颗粒连结在一起；4)分离出分选颗粒-细胞外囊泡复合体；5)加入洗脱剂使细胞外囊泡与分选颗粒分离；6)分离出分选颗粒，剩余溶液中即为分离得到的细胞外囊泡。2.根据权利要求1所述的基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于在所述的步骤1)之前还包括将锚定分子与金属络合剂分子连结的步骤；所述的锚定分子为非特异性锚定分子或特异性锚定分子，所述的非特异性锚定分子为含有能嵌入磷脂双分子层的疏水结构的分子，所述的特异性锚定分子包括抗体和/或核酸适配体。3.根据权利要求2所述的基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于所述的非特异性锚定分子包括胆固醇、硬脂酰、油烯基链、糖基磷脂酰肌醇或上述任一种的衍生物。4.根据权利要求1所述的基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于步骤1)中所述的金属离子络合剂为既含有能与锚定分子形成化学键连结的活性基团又能与金属离子形成络合物的物质。5.根据权利要求1所述的基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于步骤3)中的分选颗粒相对于细胞外囊泡的数目是过量的。6.根据权利要求1所述的基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于步骤2)中所述的连结有金属离子络合剂的分选颗粒包括两类：第一类是连结有金属离子络合剂的微球；第二类是指表面包被有金属离子络合剂分子的磁珠。7.根据权利要求1所述的基于金属离子络合剂的细胞外囊泡的分离方法，其特征在于步骤2)所述的金属离子络合剂能与步骤2)中所加入金属离子形成配位...
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