一种内肽酶活力测定的新方法技术

本发明专利技术涉及一种内肽酶活力测定的新方法；是以牛血清白蛋白为底物，根据内肽酶特征产物肽的显色反应，测定反应前后反应体系吸光度值，同时用能反应体系中肽含量多少的标准物绘制标准曲线，通过查标准曲线确定反应前后产物肽含量的变化，从而对内肽酶准确定量。本发明专利技术克服了常规内肽酶活力测定过程中蛋白质以及氨基酸的干扰，能快速准确测定内肽酶活力,操作简单，快速。

【技术实现步骤摘要】
一种内肽酶活力测定的新方法
本专利技术涉及一种内肽酶活力测定的新方法，目的在于准确测定内肽酶活性大小，以提高相关食品加工原料及加工过程、食品用酶等的内肽酶监控准确度，属于食品加工

技术介绍
内肽酶是蛋白酶的一种，主要作用于蛋白质多肽链内部的肽键使蛋白质长链分解成短肽片段。在许多食品加工原料及食品加工过程中，内肽酶活力的大小直接影响到底物蛋白、产物蛋白的含量及组成比例。比如啤酒酿造原料—麦芽，内肽酶活力的大小关系到成品麦芽库尔巴哈值的大小以及高中低分子的蛋白质含量，进而影响到啤酒泡沫性质以及啤酒的稳定性。内肽酶是很多发酵食品的重要监测指标，但是目前所采用的内肽酶活性测定的方法都不够精确。目前常用的内切酶活力测定方法从原理上分为两种：一种是以牛血红蛋白为底物，适当条件下酶和底物反应，三氯乙酸沉淀蛋白终止反应，在280nm下测定吸光度值，空白管为酶反应前加三氯乙酸终止反应，用反应组和对照组的吸光度值差表示酶活力。在280nm下部分氨基酸以及核酸等生物大分子也存在吸收峰，这种方法测得的是内肽酶和外肽酶的综合酶活力；另一种是内肽酶与蛋白底物反应，沉淀蛋白后，让体系中产物氨基酸与茚三酮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种内肽酶活力测定的新方法，其特征在于，步骤如下：1)标准曲线的绘制以缩二脲浓度(mg/mL)为横坐标x，吸光度OD值为纵坐标y，绘制标准曲线方程：y＝ax+b(r2≥0.99)，变形得方程‑1：x＝(y‑b)/a；方程中a，b为常数，分别代表曲线与x轴和y轴的交点；2)粗酶液提取对于固体样品，先粉碎过80目筛；测定固体样品粉末的水分含量，记为w；取粉碎后的待测固体样品适量，记为m，加入样品质量4倍的pH5.2、浓度为0.1mol/L的柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液，4℃条件下磁力搅拌30min，用pH5.2，浓度为0.1mol/L的柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液定容至V；4℃条件下过滤收集上清液作为...

【技术特征摘要】
1.一种内肽酶活力测定的新方法，其特征在于，步骤如下：1)标准曲线的绘制以缩二脲浓度(mg/mL)为横坐标x，吸光度OD值为纵坐标y，绘制标准曲线方程：y＝ax+b(r2≥0.99)，变形得方程-1：x＝(y-b)/a；方程中a，b为常数，分别代表曲线与x轴和y轴的交点；2)粗酶液提取对于固体样品，先粉碎过80目筛；测定固体样品粉末的水分含量，记为w；取粉碎后的待测固体样品适量，记为m，加入样品质量4倍的pH5.2、浓度为0.1mol/L的柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液，4℃条件下磁力搅拌30min，用pH5.2，浓度为0.1mol/L的柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液定容至V；4℃条件下过滤收集上清液作为待测粗酶液；对于液体样品直接取样，记为V0，置于冰浴中，缓慢加入95％乙醇溶液，使体系中乙醇的终浓度为60％v/v，静置沉淀后，抽滤，得湿酶粉；于4℃冰箱保存；测定酶活时，用浓度为0.05mol/L、pH6.0的柠檬酸―磷酸氢二钠缓冲液复溶并定容至V，即得到待测粗酶液；3)实验组的测定实验组设3个平行处理；每个平行处理分别取待测粗酶液，记为v，用浓度为0.2mol/L，pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液补足待测粗酶液至2mL；50℃水浴预热10min后加入牛血清白蛋白溶液1mL进行反应，加入牛血清白蛋白溶液后在50℃水浴中的反应时间记为h；加入0.8mL浓度为15％三氯乙酸溶液终止反应；4℃静置30min，5000r/min离心10min收集全部上清液；向上清液中添加4mL碱性硫酸铜溶液，用漩涡混合器充分摇匀，在室温下放置30min，于540nm波长下测定吸光值；三个平行吸光度值分别记为y1，y2，y3；y1，y2，y3分别代入方程-1计算实验组反应体系中与每个平行吸光度值对应的缩二脲的浓度x1，x2，x3；计算平均值4)对照组的测定对照组设3...

【专利技术属性】
技术研发人员：金玉红，战超，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37