一种基因组DNA提取试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种基因组DNA提取试剂盒，包括溶液A、NaAC、异丙醇、75%的乙醇和含有50μg/mL RNA酶的ddH2O。其中溶液A由Tris‑HCl、EDTA、SDS、NaCl和N‑月桂酰肌氨酸钠组成。还公开了利用该试剂盒提取基因组DNA的方法。本发明专利技术提供试剂盒和方法适用于植物、真菌和细菌样品的通用型基因组DNA的快速提取，无需液氮研磨，有效避免样品污染，成本低，时间短，无需有机溶剂抽提，降低了实验危险性。

【技术实现步骤摘要】
一种基因组DNA提取试剂盒和方法
本专利技术属于分子生物学实验
，具体涉及一种基因组DNA提取试剂盒和方法，更具体地，涉及一种植物、真菌、细菌等基因组DNA提取试剂盒和方法。
技术介绍
随着分子生物学的快速发展，基因组DNA的提取以及PCR技术在生物学相关的研究领域中应用越来越广泛，例如分子标记鉴定、突变体鉴定、遗传多样性分析、基因克隆等，而且基因组DNA的提取效率直接影响实验进程。传统的基因组DNA提取方法主要有SDS法和CTAB法，首先通过液氮研磨将样品进行破壁处理，利用苯酚、氯仿等有机溶剂将蛋白质与DNA进行分离，最后用无水乙醇或者异丙醇沉淀DNA。传统方法在基因组DNA提取过程中需要购买液氮，没有研磨仪的实验室需要用研钵进行研磨，样品DNA易交叉污染，而且苯酚、氯仿有机溶剂对人体健康都是有危害的。传统的提取方法实验时间久，成本高，效率低，易污染，具有一定的危险性。目前很多生物公司针对不同的实验样品都有相应的试剂盒，但是大都价格昂贵，且一般只适用于植物、真菌或细菌中的某一类，通用性不强。在一些分子鉴定实验中，需要对大量样品的基因组DNA进行快速提取。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术一方面提供一种基因组DNA提取试剂盒，包括溶液A、溶液B、溶液C、溶液D、溶液E和吸附柱，其中：溶液A：50mMTris-HCl，50mMEDTA，10％SDS，2MNaCl，N-月桂酰肌氨酸钠3g/100mL；溶液B：3MNaAC，PH5.2；溶液C：异丙醇；溶液D：75％的乙醇；溶液E：含有50μg/mLRNA酶的ddH2O。本专利技术的另一方面提供一种基因组DNA提取方法，其利用本专利技术第一方面所述的试剂盒进行提取，具体包含以下步骤：(1)将20～50mg植物、真菌或细菌菌体样品加入到1.5mL的离心管中；(2)加入400～600μL的溶液A振荡混匀；(3)在90-95℃下水浴加热10min，冷却至室温；(4)12000rpm离心1min，取350μL上清液至新的离心管中；(5)加入35μL的溶液B，颠倒混匀，加入350μL的溶液C，颠倒混匀，室温静置2min；(6)将750μL混合液转移至吸附柱中，9000rpm离心30s，倒掉收集管中的废液；(7)在吸附柱中加入650μL溶液D，9000rpm离心30s，倒掉收集管中的废液，9000rpm再次离心30s，将吸附柱转移至新的离心管中，打开吸附柱盖子，放置2min；(8)向吸附柱中加入30μL50℃预热的溶液E，静止3min后，12000rpm离心1min，获得基因组DNA。在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤(2)中加入400μL的溶液A。在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤(3)中水浴温度为94℃。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述样本为植物叶片组织。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述植物为水稻。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述植物为小麦。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述植物为玉米。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述植物为棉花。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述植物为番茄。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述样本为真菌菌丝。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述真菌为禾谷镰刀菌。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述真菌为草酸青霉菌。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述真菌为葡萄球座菌。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述真菌为橘青霉菌。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述样本为离心后收集的细菌菌体。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述细菌为大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述细菌为枯草芽孢杆菌。本专利技术的有益效果本专利技术提供的快速提取基因组DNA的试剂盒和方法，将其用于植物、真菌、细菌基因组DNA的提取，利用其良好的生物降解性特点，直接破碎细胞壁，避免了传统真菌DNA提取方法中繁琐的物理破除细胞壁的过程，极大简化了DNA的提取。本专利技术的基因组DNA提取方法，与传统方法相比还具有以下优点：①研磨无需研磨仪等仪器设备，无需购买液氮，实验成本低，安全可靠，有效避免了传统基因组DNA提取过程中因实验材料研磨造成的污染。②无需氯仿、苯酚等有毒试剂，减小了对人体的伤害。实验过程中，操作温和，避免了基因组DNA的损伤。③提取基因组DNA方便快捷，整个提取过程只需25min左右，提高了实验效率。用该专利技术提取的植物、真菌和细菌基因组DNA总量在3μg-90μg之间，浓度和纯度都满足后续PCR反应的要求，可用于各种分子生物学实验。附图说明图1示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的禾谷镰刀菌基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图。图2示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的水稻基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图3示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的小麦基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图4示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的玉米基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图5示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的棉花基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图6示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的辣椒基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图7示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的番茄基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图8示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的禾谷镰刀菌基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图9示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的草酸青霉菌基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图10示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的葡萄球座菌基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图11示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的菌青霉基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图12示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的大肠杆菌基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图13示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的枯草芽孢杆菌基因组DNA浓度、OD260/280比值及峰图。图14示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的植物基因组DNA为模板进行PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。图15示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的真菌基因组DNA为模板进行PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。图16示出了利用本专利技术的试剂盒和方法提取的细菌基因组DNA为模板进行PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。实施例以下例子在此用于示范本专利技术的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表专利技术人发现的可以用于实施本专利技术的技术，因此可以视为实施本专利技术的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本专利技术的精神或范围。除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本专利技术所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的专利技术的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。实验材料有植物叶片、真菌菌丝和细菌菌液，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括溶液A、溶液B、溶液C、溶液D、溶液E和吸附柱，其中：溶液A：50mM Tris‑HCl，50mM EDTA，10％SDS，2M NaCl，N‑月桂酰肌氨酸钠3g/100mL；溶液B：3M NaAC，PH 5.2；溶液C：异丙醇；溶液D：75％的乙醇；溶液E：含有50μg/mL RNA酶的ddH2O。

【技术特征摘要】
1.一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括溶液A、溶液B、溶液C、溶液D、溶液E和吸附柱，其中：溶液A：50mMTris-HCl，50mMEDTA，10％SDS，2MNaCl，N-月桂酰肌氨酸钠3g/100mL；溶液B：3MNaAC，PH5.2；溶液C：异丙醇；溶液D：75％的乙醇；溶液E：含有50μg/mLRNA酶的ddH2O。2.一种基因组DNA提取方法，其特征在于，利用权利要求1的试剂盒进行提取，具体包含以下步骤：(1)将20～50mg植物、真菌或细菌菌体样品加入到1.5mL的离心管中；(2)加入400～600μL的溶液A振荡混匀；(3)在90-95℃下水浴加热10min，冷却至室温；(4)12000rpm离心1min，取350μL上清液至新的离心管中；(5)加入35μL的溶液B，颠倒混匀，加入350μL的溶液C，颠倒混匀，室温静置2min；(6)将750μL混合液转移至吸附柱中，9000rpm离心30s，倒掉收集管中的废液；(7)在吸附柱中加入650μL溶液D，9000rpm离心30...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建华，刘玉洋，赵志勇，杨俊花，杨宪立，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31