一种四黄祛痘复方的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种四黄祛痘复方的筛选方法。在祛痘古方三黄敷的基础上，选择黄连、黄柏、黄芩、大黄的中草药水提液作为祛痘功效成分，采用四因素三水平的正交试验方法进行复配，通过现代测试方法分析各复方对DPPH·的清除能力，对透明质酸酶、5α‑还原酶活性的抑制能力及对金黄色葡萄球菌的抑制作用，从四个方面进行科学的分析比较，确定其最佳的复配比例，为四种中草药各自的添加量对于复方祛痘功效的影响提供了科学的依据。由于四黄来源天然，符合现代人安全护肤的理念，相较于市场上的祛痘药物与祛痘化妆品，在应用方面更有优势。本发明专利技术为古方今用以及对四黄复配祛痘产品的研发提供了较好的技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种四黄祛痘复方的筛选方法
本专利技术属于中药组合
，尤其涉及一种四黄祛痘复方的筛选方法。
技术介绍
痤疮问题已经成为年轻人最大的困扰之一，中医认为痤疮的发病原因可概括为肺热、血热、湿热、风热、风邪外袭、阴虚血淤、阴阳失调、气血不和、胃肠积热、冲任失调等，多属于热症。祛痘古方中应用最多的是三黄敷、三黄散、三黄膏，其中的三黄分别为黄连、黄芩、黄柏，或是黄连、黄柏、大黄。黄连、黄柏、黄芩属于清热药，大黄属于泻下药，四味中药均具有清热、凉血、解毒、泻火的作用，对于人体内部各种热性疾病具有较好的疗效。现代科学研究表明，痤疮的发病与机体内的雄激素水平过高相关。在人体血液中具有生理活性的雄激素睾酮(T)，在经体内5α-还原酶催化后会产生活性更强的二氢睾酮(DHT)。5α-还原酶作为依赖于还原性辅酶Ⅱ的膜蛋白酶，其主要功能是将睾酮还原为二氢睾酮。5α-还原酶基因表达过程中，受前列腺和肝脏组织中雄性激素的调节，在几种由内分泌紊乱而引发的疾病中发挥影响，如前列腺增生、多毛症、秃顶等。由于痤疮患者体内的雄性激素水平过高会使皮脂分泌异常，当过度分泌的皮脂集聚在皮肤表面会被空气中的氧气氧化，随之就会为微生物(最主要的是痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌)的繁殖提供合适的生存环境，使其大量繁殖；微生物大量繁殖后产生的脂酶会引起炎症反应，加重皮损症状。对于痤疮产生机理的分析中可以发现，传统中药材要想达到较好的祛痘效果需要针对痤疮发病的各个阶段都要发挥一定的作用，但传统配方中各类药材的复配比例对祛痘复方的祛痘功效有怎样的影响还没有具体的研究，使得人们对于所使用的中药复方的祛痘功效并没有明确的认识。因此，研究黄连、黄柏、黄芩、大黄的添加量对于四黄复方的祛痘功效的影响就具有了一定的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种四黄祛痘复方的筛选方法。为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：一种四黄祛痘复方的筛选方法，包括以下步骤：(1)四黄的中草药水提液的制备：将黄连、黄柏、黄芩、大黄四种中草药分别置于电热恒温干燥箱中，40℃下干燥24h，用粉碎机将其分别粉碎，准确称取各类中草药粉末10g装入无纺布袋中，置于干燥的烧杯中，加入100mL水，沸水浴1h，倒出水提液，烧杯中继续加入100mL水，沸水浴1h后取出药包，合并两次水提液，水浴加热浓缩至100mL以下，移入100mL容量瓶中，用水定容至刻度，制得各中草药提取液，原药含量为100mg/mL，再将其稀释得到原药含量分别为50mg/mL和75mg/mL的溶液；(2)四黄复配水提液的制备：以黄连、黄柏、黄芩、大黄4种中草药水提液作为正交试验的四个因素，分别命名为A、B、C、D；另外分别取4种中草药水提液的不同浓度50mg/mL、75mg/mL、100mg/mL作为因素的三水平，列出筛选实验中的四因素三水平，选取L9(34)正交试验的方法，进行等体积复配，得到由4种中草药的不同浓度的水提液复配的Y-1到Y-9的9组复配液；四因素三水平表和正交试验方案见表1和表2：表1.四因素三水平表表2.正交试验方案表(3)功效测试：分别对表2中的各组复配液进行DPPH·自由基清除率和透明质酸酶抑制率的测定、金黄色葡萄球菌抑菌实验、睾酮转化率测试；(4)最优组合的筛选：对步骤3测试结果进行分析，由每个指标的测试结果选出一个优质组合，再通过正交试验，根据各自的K值选出一个优质组合，最后通过矩阵计算结合所有的指标计算出一个优化的组合，再将初步选出的组合分别按照步骤3再进行一轮功效测试，通过对实验结果的分析得到一个最优的复配组合。本专利技术的优点是：本专利技术在祛痘古方三黄敷的基础上，选择黄连、黄柏、黄芩、大黄的中草药水提液作为祛痘功效成分，采用四因素三水平的正交试验方法进行复配，通过现代测试方法分析各复方对DPPH·自由基清除能力，对透明质酸酶、5α-还原酶活性的抑制能力及对金黄色葡萄球菌的抑制作用，从抗氧化、抗炎、抑菌、抑制5α-还原酶活性四个方面进行科学的综合比较，确定其最佳的复配比例，为四种中草药各自的添加量对于复方祛痘功效的影响提供了科学的依据，同时由于四黄来源天然，符合现代人安全护肤的理念，相较于市场上的祛痘药物与祛痘化妆品，在应用方面更有优势。本专利技术为古方今用以及对四黄复配祛痘产品的研发也提供了较好的技术支持。具体实施方式以下结合具体的实例对本专利技术的技术方案做进一步说明：实施例所用试剂：黄连、黄柏、黄芩、大黄，购自合肥百姓缘大药房；对-二甲氨基苯甲醛、还原性辅酶Ⅱ(NADPH，95％)，睾酮(98％)，阿拉丁试剂(上海)有限公司；三羟甲基氨基甲烷(Tris，99.9％生物技术级)，考马斯亮蓝G-250(AR，无蛋白酶)，10mg/mL牛血清蛋白标准溶液(分析标准品)，上海麦克林生化科技有限公司；牛肉膏，北京奥博星生物技术有限责任公司；氯化钠、蛋白胨，国药集团化学试剂有限公司；爱普列特(5mg/片，有效成分含量)，江苏联环药业股份有限公司；5α-还原酶提取液，实验室提取，浓度为0.29mg/mL。一种四黄祛痘复方的筛选方法，包括以下步骤：(1)四黄的中草药水提液的制备：将黄连、黄柏、黄芩、大黄四种中草药分别置于电热恒温干燥箱中，40℃下干燥24h，用粉碎机将其分别粉碎，准确称取各类中草药粉末10g装入无纺布袋中，置于干燥的烧杯中，加入100mL水，沸水浴1h，倒出水提液，烧杯中继续加入100mL水，沸水浴1h后取出药包，合并两次水提液，水浴加热浓缩至100mL以下，移入100mL容量瓶中，用水定容至刻度，制得各中草药提取液，原药含量为100mg/mL，再将其稀释得到原药含量分别为50mg/mL和75mg/mL的溶液；(2)四黄复配水提液的制备：以黄连、黄柏、黄芩、大黄4种中草药水提液作为正交试验的四个因素，分别命名为A、B、C、D；另外分别取4种中草药水提液的不同浓度50mg/mL、75mg/mL、100mg/mL作为因素的三水平，列出筛选实验中的四因素三水平，选取L9(34)正交试验的方法，进行等体积复配，得到由4种中草药的不同浓度的水提液复配的Y-1到Y-9的9组复配液；四因素三水平表和正交试验方案见表1和表2：表1.四因素三水平表表2.正交试验方案表(3)功效测试：分别对表2中的各组复配液进行DPPH·自由基清除率和透明质酸酶抑制率的测定、金黄色葡萄球菌抑菌实验、睾酮转化率测试；(4)最优组合的筛选：对步骤3测试结果进行分析，由每个指标的测试结果选出一个优质组合，再通过正交试验，根据各自的K值选出一个优质组合，最后通过矩阵计算结合所有的指标计算出一个优化的组合，再将初步选出的组合分别按照步骤3再进行一轮功效测试，通过对实验结果的分析得到一个最优的复配组合。功效测试过程：1、DPPH·自由基清除率的测定分别取待测样品溶液和物质的量浓度为2.00×10-4mol/L的DPPH·乙醇溶液各3mL加入同一具塞试管中，摇匀，避光放置30min后，用紫外-可见分光光度计测定混合溶液在517nm处的吸光度Ai，同时测定3mL的纯水与3mL浓度为2.00×10-4mol/L的DPPH·乙醇溶液混合后的吸光度A0和3mL待测样品溶液与3mL无水乙醇混合后的吸光度Aj，根据式(1)计算清除本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种四黄祛痘复方的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)四黄的中草药水提液的制备：将黄连、黄柏、黄芩、大黄四种中草药分别置于电热恒温干燥箱中，40℃下干燥24h，用粉碎机将其分别粉碎，准确称取各类中草药粉末10g装入无纺布袋中，置于干燥的烧杯中，加入100mL水，沸水浴1h，倒出水提液，烧杯中继续加入100mL水，沸水浴1h后取出药包，合并两次水提液，水浴加热浓缩至100mL以下，移入100mL容量瓶中，用水定容至刻度，制得各中草药提取液，原药含量为100mg/mL，再将其稀释得到原药含量分别为50mg/mL和75mg/mL的溶液；(2)四黄复配水提液的制备：以黄连、黄柏、黄芩、大黄4种中草药水提液作为正交试验的四个因素，分别命名为A、B、C、D；另外分别取4种中草药水提液的不同浓度50mg/mL、75mg/mL、100mg/mL作为因素的三水平，列出筛选实验中的四因素三水平，选取L9(34)正交试验的方法，进行等体积复配，得到由4种中草药的不同浓度的水提液复配的Y‑1到Y‑9的9组复配液；四因素三水平表和正交试验方案见表1和表2：

【技术特征摘要】
1.一种四黄祛痘复方的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)四黄的中草药水提液的制备：将黄连、黄柏、黄芩、大黄四种中草药分别置于电热恒温干燥箱中，40℃下干燥24h，用粉碎机将其分别粉碎，准确称取各类中草药粉末10g装入无纺布袋中，置于干燥的烧杯中，加入100mL水，沸水浴1h，倒出水提液，烧杯中继续加入100mL水，沸水浴1h后取出药包，合并两次水提液，水浴加热浓缩至100mL以下，移入100mL容量瓶中，用水定容至刻度，制得各中草药提取液，原药含量为100mg/mL，再将其稀释得到原药含量分别为50mg/mL和75mg/mL的溶液；(2)四黄复配水提液的制备：以黄连、黄柏、黄芩、大黄4种中草药水提液作为正交试验的四个因素，分别命名为A、B、C、D；另外分别取4种中草药水提液的不同浓度50...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪梅，陈紫薇，潘佩瑶，李茜媛，肖伟莉，金芊芊，汪叶笛，徐诗童，左晶晶，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34