从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法技术

本发明专利技术提供了一种从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法。所述方法为:将南山茶饼经过浸提处理得到样品液；将样品液湿法上样至大孔树脂层析柱，用乙醇水溶液体系进行梯度洗脱，收集含有目标化合物的洗脱液，经后处理得粗组分液；将粗组分液湿法上样至聚酰胺树脂层析柱，进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有目标化合物的洗脱液，浓缩冻干得到粗提取物；将粗提取物用溶剂溶解后进样，使用第一C18ME色谱柱进行HPLC半制备，用乙腈‑甲酸水溶液作为流动相进行等度洗脱，分别收集含有目标化合物的流份段，浓缩冻干得到第一、第二目标化合物。本申请提供的方法，从山茶属植物中有效分离出目标化合物，提取纯度高。

【技术实现步骤摘要】
从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法
本专利技术涉及化合物提取领域，具体而言，涉及一种从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法。
技术介绍
南山茶又名广宁红花油茶(CamelliasemiserrataChi.)，属于山茶科(Theaceae)山茶属(CamelliaL.)植物，多年生乔木或灌木。南山茶主要分布在我国的广西东南部以及广东西部。它是油茶的一种重要栽培物种。经研究比较发现，在各类油茶中，广宁红花油茶中的化学成分相对比较丰富。南山茶及其饼粕尤其富含具有多种生物活性的黄酮类和皂苷等化合物。目前，对油茶饼粕的研究主要集中在以总黄酮或皂苷为指标进行的各种提取工艺的优化，还有一些着重于对得到的粗提物或初步纯化物进行抗氧化以及抑菌等活性方面的研究。但是，对提取物中具体成分的研究不够。山奈酚及其衍生物是油茶中一类重要的化合物，具有抗癌、治疗糖尿病和骨质疏松以及保护损伤细胞等功能。分析南山茶中的有效活性物质，将其活性成分从复杂多样的成分中分离提取出来，得到纯度较高的产品，对于南山茶的深度开发具有重要的作用。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法，所述方法首次从南山茶中提取出目标化合物，而且快速有效、纯度很高。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法，所述方法包括以下步骤:A.将南山茶饼经过浸提处理得到样品液；B.将所述样品液湿法上样至大孔树脂层析柱，用乙醇水溶液体系进行梯度洗脱，收集含有第一目标化合物和第二目标化合物的洗脱液，经后处理得粗组分液；C.将所述粗组分液湿法上样至聚酰胺树脂层析柱，依次用蒸馏水、体积分数为20％、40％、90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有所述第一目标化合物和所述第二目标化合物的洗脱液，浓缩冻干得到粗提取物；D.将所述粗提取物用溶剂溶解后进样，使用第一C18ME色谱柱进行HPLC半制备，用乙腈-甲酸水溶液作为流动相进行等度洗脱，收集含有所述第一目标化合物的第一流份段，浓缩冻干得到所述第一目标化合物；收集含有所述第二目标化合物的第二流份段，浓缩冻干得到所述第二目标化合物；所述第一目标化合物的结构式为：所述第二目标化合物的结构式为：根据南山茶浸提液中的主要成分及目标化合物的性质，采用浸提-萃取-大孔树脂柱层析-C18ME色谱柱洗脱-聚酰胺树脂柱层析-C18ME色谱柱高效液相色谱制备的方法，有效将两个目标化合物从南山茶的复杂成分中分离出来。优选地，所述步骤B中，所述大孔树脂层析柱的制备方法为：先用乙醇浸泡D101大孔树脂，然后装柱，依次用乙醇、水冲洗至无乙醇味。大孔树脂进行处理制备成层析柱，目的是为了充分的释放大孔树脂的吸附能力，防止杂质对提取过程产生不良影响，保证最大的柱层析效率。进一步优选地，所述乙醇水溶液体系为：体积分数为5％、15％、50％、95％的乙醇水溶液。更加优选地，所述大孔树脂层析柱的柱体积BV1为10L，所述5％乙醇水溶液的用量为6倍BV1、所述15％乙醇水溶液的用量为8倍BV1、所述50％乙醇水溶液的用量为8倍BV1、所述95％乙醇水溶液的用量为4倍BV1；收集用所述15％乙醇水溶液洗脱的洗脱液。合适的洗脱液体系，是基于对浸提液中有效成分及目标化合物之间的差异的认知而做出的。合适的洗脱用量，一方面是为了保证能够尽量将目标化合物和其他组分分离开，减少分离的次数；另一方面是为了保证提取效率，尽可能的提高提取得率。更加优选地，所述后处理为：将洗脱液减压蒸馏除去乙醇，然后用第二C18ME色谱柱、以甲醇作为流动相进行洗脱做DAC富集，接收流出液减压浓缩直至无液体旋出，用体积比为1:1的甲醇和丙酮溶解得所述粗组分液；所述第二C18ME色谱柱规格为：100A，50mm×250mm，10μm。用色谱柱处理洗脱液的主要目的是将水分离掉。而使用甲醇和丙酮溶解后，有利于下一步分离的进行。优选地，所述步骤C中，所述聚酰胺树脂层析柱的柱体积BV2为1L；所述蒸馏水、所述体积分数为20％乙醇水溶液、所述40％乙醇水溶液的用量均为5倍BV2、所述90％乙醇水溶液的用量为2倍BV2。更加优选地，所述梯度洗脱过程中，每500mL为一个收集单位，并顺次编号，收集第19-22号洗脱液。聚氨酯树脂柱层析的洗脱体系、柱体积以及洗脱液用量，是基于被分离物、洗脱液和聚氨酯层析柱的性质来确定的。设定收集单位，是为了更好地获得含有目标化合物的流份段。优选地，所述步骤D中，所述第一C18ME色谱柱规格为：100A，20mm×250mm，10μm；所述乙腈-甲酸水溶液中乙腈与甲酸水溶液的体积比为19:81，所述甲酸水溶液的体积分数为0.1％。更加优选地，所述溶剂为所述乙腈-甲酸水溶液。溶剂、色谱柱规格、洗脱体系等的选择，是基于被分离物的极性来确定的。可选地，所述步骤A中，所述浸提处理的方法为：用体积分数为50-60％的乙醇水溶液浸提，料液比为1kg所述南山茶饼对应2-4L所述乙醇水溶液，在60-70℃加热回流浸提2-4次，过滤、合并得到提取液；然后减压浓缩，再用正丁醇萃取得到萃取液，加水稀释18-22倍得到所述样品液。乙醇水溶液可以很好的把南山茶中的成分浸提出来，但由于成分的性质不同，需要采用合适的温度和浸提时间；萃取剂的选择取决于目标化合物的性质；高浓度的提取液直接用大孔树脂进行柱层析时，分离效果比较差，因此需要稀释后使用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)首次从山茶属植物中分离出了第一目标化合物，有效分离出了第二目标化合物；(2)本申请提供的提取方法简单、有效，适合于推广应用。(3)目标化合物提取纯度高。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为实施例1使用第一C18ME色谱柱进行HPLC半制备的谱图；图2为实施例1制备得到的第一目标化合物的纯度测定图；图3为实施例1制备得到的第二目标化合物的纯度测定图；图4为本申请制备得到的第一目标化合物的质谱图；图5为本申请制备得到的第一目标化合物的H谱图；图6为本申请制备得到的第一目标化合物的C谱图；图7为本申请制备得到的第二目标化合物的质谱图；图8为本申请制备得到的第二目标化合物的H谱图；图9为本申请制备得到的第二目标化合物的C谱图；图10为本申请制备得到的第二目标化合物的H-HCOSY谱图；图11为本申请制备得到的第二目标化合物的HSQC谱图；图12为本申请制备得到的第二目标化合物的HMBC谱图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1将南山茶的茶果晾晒，去壳，以物理压榨法脱去油脂后产生的饼晾干，并适当粉碎，即得到南山茶饼。以体积分数为50％的乙醇水溶液于60℃条件下超声浸提3次，每次2h，料液比为1:4(m/v)，然后进行过滤、合并，得到提取液。然后将提取液浓缩、用等体积的正丁醇萃取得到萃取液，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:A.将南山茶饼经过浸提处理得到样品液；B.将所述样品液湿法上样至大孔树脂层析柱，用乙醇水溶液体系进行梯度洗脱，收集含有第一目标化合物和第二目标化合物的洗脱液，经后处理得粗组分液；C.将所述粗组分液湿法上样至聚酰胺树脂层析柱，依次用蒸馏水、体积分数为20％、40％、90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有所述第一目标化合物和所述第二目标化合物的洗脱液，浓缩冻干得到粗提取物；D.将所述粗提取物用溶剂溶解后进样，使用第一C18ME色谱柱进行HPLC半制备，用乙腈‑甲酸水溶液作为流动相进行等度洗脱，收集含有所述第一目标化合物的第一流份段，浓缩冻干得到所述第一目标化合物；收集含有所述第二目标化合物的第二流份段，浓缩冻干得到所述第二目标化合物；所述第一目标化合物的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种从南山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:A.将南山茶饼经过浸提处理得到样品液；B.将所述样品液湿法上样至大孔树脂层析柱，用乙醇水溶液体系进行梯度洗脱，收集含有第一目标化合物和第二目标化合物的洗脱液，经后处理得粗组分液；C.将所述粗组分液湿法上样至聚酰胺树脂层析柱，依次用蒸馏水、体积分数为20％、40％、90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有所述第一目标化合物和所述第二目标化合物的洗脱液，浓缩冻干得到粗提取物；D.将所述粗提取物用溶剂溶解后进样，使用第一C18ME色谱柱进行HPLC半制备，用乙腈-甲酸水溶液作为流动相进行等度洗脱，收集含有所述第一目标化合物的第一流份段，浓缩冻干得到所述第一目标化合物；收集含有所述第二目标化合物的第二流份段，浓缩冻干得到所述第二目标化合物；所述第一目标化合物的结构式为：所述第二目标化合物的结构式为：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B中，所述大孔树脂层析柱的制备方法为：先用乙醇浸泡D101大孔树脂，然后装柱，依次用乙醇、水冲洗至无乙醇味。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述乙醇水溶液体系为：体积分数为5％、15％、50％、95％的乙醇水溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂层析柱的柱体积BV1为10L，所述5％乙醇水溶液的用量为6倍BV1、所述15％乙醇水溶液的用量为8倍BV1、所述50％乙醇水溶液的用量为8倍BV1、所述95％乙醇水溶液的用量为4倍BV1；...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹清明，胡丹丹，师明月，欧青媛，周文化，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43